朱強(qiáng)，王丕琳，張鐵，尹子毅，曲更寶，殷詠梅

（1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院乳腺科，北京100050；2.南京醫(yī)科大學(xué)乳腺科，江蘇南京210029）

泛素交聯(lián)酶UBE2D3在調(diào)節(jié)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞放射敏感性中的作用

朱強(qiáng)1，王丕琳1，張鐵1，尹子毅1，曲更寶1，殷詠梅2

（1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院乳腺科，北京100050；2.南京醫(yī)科大學(xué)乳腺科，江蘇南京210029）

目的研究泛素交聯(lián)酶UBE2D3（ubiquitin-conjugating enzyme E2D3）在端粒酶介導(dǎo)的放射敏感性調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用。方法針對(duì)UBE2D3基因序列，設(shè)計(jì)3條干擾序列，通過(guò)篩選選取1條干擾效率最優(yōu)的序列并合成pshRNA-UBE2D3；在MCF-7細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-UBE2D3以及干擾質(zhì)粒pshRNA-UBE2D3，Western blot檢測(cè)UBE2D3對(duì)hTERT蛋白表達(dá)的影響；通過(guò)轉(zhuǎn)染pEGFP-hTERT，Western blot法檢測(cè)hTERT蛋白表達(dá)對(duì)UBE2D3的影響；通過(guò)轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3抑制UBE2D3的表達(dá)，PCR-ELISA法檢測(cè)端粒酶活性，MTT法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞周期的變化，CCK-8法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞增殖情況，克隆形成法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞放射敏感性的變化。結(jié)果成功篩選出一條針對(duì)UBE2D3的最優(yōu)干擾序列，干擾UBE2D3能顯著降低MCF-7細(xì)胞的放射敏感性；UBE2D3能參與hTERT調(diào)控放射敏感性的調(diào)節(jié)，抑制UBE2D3的表達(dá)可能通過(guò)上調(diào)hTERT和Cyclin D1的表達(dá)、增加hTERT的活性、加速G1期向S期轉(zhuǎn)變以及提高M(jìn)CF-7細(xì)胞的增殖從而降低MCF-7細(xì)胞的放射敏感性。然而，過(guò)表達(dá)UBE2D3未能檢測(cè)到hTERT的表達(dá)差異。結(jié)論抑制UBE2D3可能通過(guò)上調(diào)hTERT以及Cyclin D1的表達(dá)參與hTERT調(diào)節(jié)的放射敏感性的過(guò)程。

泛素交聯(lián)酶UBE2D3；放射敏感性；蛋白相互作用；乳腺癌

泛素-蛋白酶體復(fù)合通路（ubiquitin-proteasome pathway，UPP）是Hershko等研究者在20世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)的一種高效的蛋白質(zhì)降解的通路，該通路不但能夠破壞損傷陳舊的蛋白質(zhì)，而且能夠通過(guò)精確降解細(xì)胞內(nèi)各種目的靶蛋白，進(jìn)而參與細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞凋亡、DNA修復(fù)、細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白的跨膜定位和細(xì)胞表面膜受體的內(nèi)化等多種生理過(guò)程，與許多疾病的發(fā)生有關(guān)，尤其與腫瘤的發(fā)生有著密切的相關(guān)性［1-2］。泛素（ubiquitin）是一個(gè)高度保守的、長(zhǎng)76個(gè)氨基酸殘基的小肽，它以單體或與其他蛋白結(jié)合的形式廣泛存在真核生物中，不僅是蛋白質(zhì)降解的標(biāo)記，更在DNA修復(fù)、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用［3］。為此選取UBE2D3作為研究對(duì)象，研究UBE2D3在端粒酶介導(dǎo)的放射敏感性調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)粒、菌種、細(xì)胞株 質(zhì)粒：過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pEGFPUBE2D3用于真核表達(dá)；干擾質(zhì)粒pshRNA-UBE2D3用于真核表達(dá)；菌種及細(xì)胞株：E.coli DH5α購(gòu)自天根生化公司，MCF-7細(xì)胞由江西省腫瘤生物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 培養(yǎng)基及試劑 DMEM培養(yǎng)基購(gòu)于美國(guó)HyClone公司，胎牛血清（FBS）購(gòu)于杭州四季青生物工程有限公司。胰蛋白胨（trytone）、酵母提取物（yeast extract）、瓊脂粉（agar）購(gòu)自O(shè)XOID公司。瓊脂糖購(gòu)自西班牙Agarose公司。其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純產(chǎn)品。細(xì)胞總RNA提取試劑Trizol reagent、轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000均購(gòu)自Invitrogen公司；M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶和dNTP購(gòu)自Promega公司；DNA凝膠回收純化試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自QIAGEN公司；蛋白Marker購(gòu)自Fermentas公司；DNA Marker、PCR Mix均購(gòu)自天根生化公司；BCA蛋白測(cè)定試劑盒、細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天公司；端粒酶活性試劑盒購(gòu)自Roche公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自Dongji公司；DNA測(cè)序由Invitrogen公司完成。

1.3 主要儀器 Bio 1200-II-A2型生物安全柜（上海振梓創(chuàng)）；SW-CJ-1F型潔凈工作臺(tái)（蘇州安泰）；MCO-175型CO2恒溫培養(yǎng)箱、－20℃醫(yī)用冰箱、－70℃超低溫冰箱、OLYMPUS倒置普通顯微鏡、OLYMPUS倒置熒光顯微鏡（日本OLYMPUS）；TGL-16G臺(tái)式高速離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）；Microfuge-22R臺(tái)式微量冷凍離心機(jī)（美國(guó)Beckman）；Allerga X-12R多功能離心機(jī)（美國(guó)Beckman）；細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（Invitrogen）；A1604型精密天平（上海天平儀器廠）；WGP-350隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海安亭）。

1.4 方法

1.4.1 針對(duì)UBE2D3基因序列，設(shè)計(jì)3條干擾序列，通過(guò)篩選選取1條干擾效率最優(yōu)的序列并合成pshRNA-UBE2D3；在MCF-7細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-UBE2D3以及干擾質(zhì)粒pshRNA-UBE2D3。

1.4.2 Western blot檢測(cè)UBE2D3對(duì)hTERT蛋白表達(dá)的影響：取適量25mg／mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至終濃度0.5mg／mL，同時(shí)按50∶1比例分別加入適量試劑A和試劑B配制BCA工作液；試劑準(zhǔn)備完畢后，于96孔板中分別加入0、1、2、4、8、12、16、20μL標(biāo)準(zhǔn)品以及10μL的待測(cè)樣品，補(bǔ)足稀釋液至20μL；每孔加入BCA工作液200μL，37℃孵育30min；使用酶標(biāo)儀測(cè)定562 nm的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算蛋白濃度。

1.4.3 通過(guò)轉(zhuǎn)染pEGFP-hTERT，Western blot法檢測(cè)hTERT蛋白表達(dá)對(duì)UBE2D3的影響：將4μL LipofectamineTM 2000分別加入2個(gè)500μLOPT-MEM培養(yǎng)基的EP管中，輕柔混勻，且室溫孵育5min。將上述2種稀釋液分別混勻，室溫培育20min后加入培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。4～6 h后，輕柔棄除轉(zhuǎn)染混合物，切忌用力吹打，用吸管沿瓶壁緩慢更換上新鮮的完全培養(yǎng)基；48 h后，按照標(biāo)準(zhǔn)步驟分別提取蛋白，利用BCA法檢測(cè)蛋白濃度。

1.4.4 干擾UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響：CCK-8法采用的主要試劑是WST-8，它是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。如果細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。以轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3的MCF-7細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，pshRNA-NC為對(duì)照組。

1.4.5 干擾UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞放射敏感性的影響：將處于凍存管內(nèi)凍存的MCF-7細(xì)胞置于37℃水浴中溫浴，待細(xì)胞溶化后，用75%乙醇消毒管壁外測(cè)盡量保持無(wú)菌，超凈工作臺(tái)內(nèi)將熔化的細(xì)胞轉(zhuǎn)到另一個(gè)15mL無(wú)菌離心管中，加入10mL含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基，2000 rpm，離心5min；收集細(xì)胞，棄上清；再加入5mL含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中，用吸管輕柔吹打，重懸細(xì)胞，將細(xì)胞接種至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于5%C02培養(yǎng)箱中，37℃常規(guī)培養(yǎng)；提前1 d準(zhǔn)備處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞，消化，均勻種于25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶；待細(xì)胞狀態(tài)良好，按照之前轉(zhuǎn)染步驟，按照無(wú)菌原則將pshRNA-UBE2D3（實(shí)驗(yàn)組）、pshRNA-NC（對(duì)照組），采用線性二次模型擬合細(xì)胞存活曲線，通過(guò)曲線計(jì)算細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)為0.5時(shí)，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的放射劑量比值為放射增敏比（sensitizer enhancementratio，SER）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，Western blot、端粒酶活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖檢測(cè)、細(xì)胞周期檢測(cè)、克隆形成實(shí)驗(yàn)均重復(fù)至少3次，端粒酶活性檢測(cè)、細(xì)胞增殖檢測(cè)采用t檢驗(yàn)，克隆形成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graphpad prism 5.0軟件分析，按照線性二次模型擬合生存曲線，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 UBE2D3干擾最佳序列篩選以及過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pEGFPUBE2D3的構(gòu)建 為了研究UBE2D3在放射敏感性中的作用，共設(shè)計(jì)3條干擾序列，分別將3條序列轉(zhuǎn)染至MCF-7細(xì)胞，進(jìn)而篩選出1條干擾效率最好的干擾序列。如圖1A所示，轉(zhuǎn)染后，Line-1（siRNA-486）顯示最好干擾效率，選取干擾序列siRNA-486，用以構(gòu)建pU6／GFP／Neo-shRNA-UBE2D3，簡(jiǎn)稱pshRNAUBE2D3。同時(shí)，構(gòu)建pEGFP-UBE2D3，如圖1B所示，測(cè)序完全正確。

圖1 UBE2D3干擾序列篩選結(jié)果（A）及pEGFP-UBE2D3雙酶切鑒定結(jié)果（B）Fig.1 UBE2D3 interference sequence screening results（A）and pEGFP-UBE2D3 double enzyme digestion identification results（B）

2.2 干擾、過(guò)表達(dá)UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞中hTERT蛋白表達(dá)影響 以重組質(zhì)粒pEGFP-UBE2D3、pshRNA-UBE2D3為實(shí)驗(yàn)組，pshRNA-NC作為對(duì)照組，轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞24 h后，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率（圖2A），實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組轉(zhuǎn)染效率均在80%左右；48 h后提取蛋白，WB檢測(cè)干擾、過(guò)表達(dá)UBE2D3后，hTERT的蛋白表達(dá)變化。如圖2B所示，轉(zhuǎn)染pEGFP-UBE2D3后，UBE2D3蛋白表達(dá)水平增加，hTERT蛋白水平較對(duì)照組未見(jiàn)明細(xì)變化；而轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3后，UBE2DE3蛋白表達(dá)水平降低，hTERT蛋白水平較對(duì)照組明顯增加。

圖2 熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率（A）及Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)（B）Fig.2 Transfection efficiency observed by fluorescentmicroscope（A）and protein expression detected by Western blot（B）

2.3 過(guò)表達(dá)hTERT對(duì)MCF-7細(xì)胞中UBE2D3蛋白表達(dá)的影響 為了研究hTERT的表達(dá)對(duì)MCF-7細(xì)胞中UBE2D3蛋白表達(dá)的影響，以重組質(zhì)粒pEGFP-hTERT為實(shí)驗(yàn)組，pEGFP-C1作為對(duì)照組，轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞24 h后，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率（圖3A），實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組轉(zhuǎn)染效率均在70%左右；48 h后提取蛋白，Western blot檢測(cè)過(guò)表達(dá)hTERT對(duì)UBE2D3的蛋白表達(dá)變化的影響。如圖3B所示，轉(zhuǎn)染pEGFP-hTERT后，hTERT蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組升高，而UBE2DE3蛋白表達(dá)較對(duì)照組未見(jiàn)明顯變化；

圖3 熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率（A）及Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)（B）Fig.3 transfection efficiency observed by fluorescentmicroscope（A）and protein expression detected by Western blot（B）

2.4 干擾UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞端粒酶活性的影響 為了檢測(cè)UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞端粒酶活性的影響，采用TRAPPCR-ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在不加放射線的情況下，實(shí)驗(yàn)組（轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3）與對(duì)照組（pshRNA-NC）相比，MCF-7細(xì)胞端粒酶活性明顯升高；在加放射線的情況下，實(shí)驗(yàn)組（轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3）與對(duì)照組（pshRNA-NC）相比，MCF-7細(xì)胞端粒酶活性也明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)圖4）。

圖4 PCR-ELISA檢測(cè)端粒酶活性Fig.4 PCR-ELISA detection of telomerase activity

2.5 干擾UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響 為研究UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響，通過(guò)轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3抑制UBE2D3的表達(dá)，采用CCK-8法分別在1、2、3、4、5、6、7 d，共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞的增殖情況，經(jīng)pshRNA-UBE2D3處理過(guò)的MCF-7細(xì)胞較轉(zhuǎn)染pshRNA-NC的MCF-7細(xì)胞，從第2天開(kāi)始出現(xiàn)增殖差異，且均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖6 CCK-8法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞增殖Fig.6 The proliferation of MCF-7 cellsmeasured with CCK-8 method

2.6 干擾UBE2D3對(duì)MCF-7細(xì)胞放射敏感性的影響 在明確干擾質(zhì)粒pshRNA-UBE2D3對(duì)hTERT的表達(dá)效應(yīng)后，分別轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3和陰性對(duì)照組pshRNA-NC至MCF-7細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24 h后，進(jìn)行克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞放射敏感性的變化。MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染pshRNA-UBE2D3和陰性對(duì)照組pshRNANC后，采用線性二次模型擬合照射后細(xì)胞的存活曲線，計(jì)算細(xì)胞的α值、β值以及SF2（2 Gy照射后細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)）；SF2分別為0.6939、0.5838，UBE2D3可能參與MCF-7細(xì)胞放射敏感性的調(diào)節(jié)（見(jiàn)表1）。

表1 細(xì)胞的α值、β值以及SF2Tab.1 Values ofα，βand SF2 of cells

3 討論

基于泛素連接酶E3在泛素蛋白酶體系統(tǒng)中的底物特異性，目前關(guān)于泛素蛋白酶體系統(tǒng)的研究主要集中在泛素連接酶E3上，這些泛素連接酶E3主要包括BRCA1、RNF8、RNF168、Siah2、Mdm2、MKRN1、Chfr等。有研究發(fā)現(xiàn)泛素-蛋白酶體通路特異性阻斷劑MG-132對(duì)SGC-7901細(xì)胞有顯著抑制作用，同時(shí)端粒酶活性也相應(yīng)降低［4-6］；另外的研究組發(fā)現(xiàn)MKRN1蛋白可標(biāo)記需要降解的hTERT，并通過(guò)促進(jìn)hTERT的降解導(dǎo)致端粒酶活性降低［11］；另外乳腺癌相關(guān)基因BRCA1能夠下調(diào)c-myc的活性［7-9］，還能夠與c-myc結(jié)合，從而抑制c-myc對(duì)hTERT的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)［10-11］，BRCA1基因敲除導(dǎo)致hTERT表達(dá)增加，端粒酶活性增強(qiáng)，端粒長(zhǎng)度延長(zhǎng)。此外，近來(lái)有研究者發(fā)現(xiàn)Hdm2作為一種泛素E3連接酶，可使hTERT多泛素化從而抑制端粒酶的活性［12-14］。而本研究中，通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)篩選出與hTERT相互作用的蛋白泛素交聯(lián)酶UBE2D3，并初步研究證實(shí)2者之間的相互作用。由于UBE2D3與UBE2N都屬于泛素交聯(lián)酶E2家族成員，這是否意味著，UBE2D3在放射敏感性的調(diào)節(jié)中也具有重要意義。為此進(jìn)行了相關(guān)的研究。研究表明，抑制UBE2D3的表達(dá)可以加速M(fèi)CF-7細(xì)胞G1期向S期的進(jìn)程，增加MCF-7細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步通過(guò)Western blot檢測(cè)研究發(fā)現(xiàn)，抑制UBE2D3的表達(dá)能上調(diào)Cyclin D1的表達(dá)，進(jìn)而解釋了細(xì)胞周期、增殖變化的原因。

與此同時(shí)，通過(guò)抑制UBE2D3的表達(dá)，可以上調(diào)hTERT的表達(dá)，增加MCF-7細(xì)胞的端粒酶活性。雖然對(duì)射線影響端粒酶活性存在不同的看法，前期的研究發(fā)現(xiàn)射線能誘導(dǎo)端粒酶活性增加。另外，也有研究顯示，hTERT的上調(diào)與端粒酶活性、細(xì)胞增殖存在正相關(guān)，上調(diào)hTERT的表達(dá)能上調(diào)Cyclin D1的表達(dá)［15］。但是過(guò)表達(dá)UBE2D3后，并沒(méi)有檢測(cè)到hTERT蛋白水平的變化，因此猜測(cè)，hTERT可能是UBE2D3的靶蛋白，hTERT的降解可能是通過(guò)泛素化修飾完成，但UBE2D3存在與之對(duì)應(yīng)的E3連接酶，過(guò)表達(dá)UBE2D3并不能引起相應(yīng)具有底物特異性E3的增加，因此并不能引起hTERT蛋白表達(dá)的變化。發(fā)現(xiàn)，通過(guò)抑制UBE2D3的表達(dá)，乳腺癌MCF-7細(xì)胞的放射敏感性降低。放射敏感的降低歸因于端粒酶活性的增加以及Cyclin D1的增加。干擾UBE2D3能上調(diào)hTERT以及Cyclin D1的表達(dá)，同時(shí)增加端粒酶的活性，干擾UBE2D3聯(lián)合放療，相對(duì)于單純干擾組，端粒酶活性明顯增加。綜上所述，研究成果顯示，除端粒酶-直接端粒延伸途徑可以成為放射增敏的靶點(diǎn)之外，端粒酶介導(dǎo)的非直接端粒延伸途徑，即端粒酶-泛素交聯(lián)酶-端粒調(diào)控通路，可能成為以后放射增敏研究的發(fā)展方向，為以后腫瘤細(xì)胞放射敏感性調(diào)控的研究及發(fā)展新的放射增敏／放射防護(hù)靶點(diǎn)提供思路。

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（編校：譚玲，秦曉英）

Effect of UBE2D3 in regulation of radiosensitivity in human breast cancer MCF-7 cell

ZHU Qiang1，WANG Pi-lin1，ZHANG Tie1，YIN Zi-yi1，QU Geng-bao1，YIN Yong-mei2

（1.Department of Mammary Gland，Beijing Tiantan Hospital Affiliated Capital Medical University，Beijing 100050，China；2.Department of Mammary Gland，Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China）

ObjectiveTo explore the role of UBE2D3 in hTERT-mediated radiosensitivity in MCF-7 cells.MethodsBased on UBE2D3 gene sequences，three interference sequence were designed and a optimal jamming efficiency sequence was selected to synthesize pshRNA-UBE2D3.In MCF-7 cells，pEGFP-UBE2D3 and pshRNA-UBE2D3 were transfected respectively，and the influence of UBE2D3 on hTERT protein expression was detected by Western blot.Through transfection of pEGFP-hTERT，the influence of hTERT protein expression on UBE2D3 was detected by Western blot. UBE2D3 expression was dampened by pshRNA-UBE2D3 transfection，telomerase activity was detected by PCR-ELISA，the change of MCF-7 cell cycle was detected by MTT，MCF-7 cell proliferation was detected by CCK-8 and the change of MCF-7 cellular radiosensitivity was detected by colony-forming assay.ResultsAn optimal jamming efficiency sequence was selected，which could significantly reduce the radiosensitivity of MCF-7 cell；UBE2D3 could participate in the regulation of hTERT radiosensitivity，inhibit UBE2D3 expression，up-regulate hTERT and Cyclin D1expression，increase the activity of hTERT，accelerate G1 turn to S phase，and improve the MCF-7 cell proliferation to reduce the MCF-7 cell radiosensitivity.However，overexpression of UBE2D3 failed to detect the expression differences of hTERT.Conclusion UBE2D3 is inhibited by up-regulating hTERT and Cyclin D1expression to participate in the regulation of hTERT radiosensitivity.

UBE2D3；radiosensitivity；protein interaction；breast cancer

R737.9

A

1005－1678（2014）08－0077－04

國(guó)家自然科學(xué)基金（81172503）

朱強(qiáng)，男，碩士，住院醫(yī)師，研究方向：乳腺疾病診療及乳腺癌綜合治療，E-mail：qch1821460072＠163.com。