何正梅 陶善東 鄧 媛 于 亮

白血病屬于造血干細胞惡性克隆性疾病,死亡率較高,臨床治療難度較大,急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)屬于白血病的一種常見類型[1]。近幾年研究發(fā)現(xiàn)微小殘留病(minimal residual disease,MRD)與白血病復發(fā)有緊密聯(lián)系，但其在人體內(nèi)分布和生存特點較為復雜,尤其是MRD增殖受機體免疫情況影響較大[2]。因此,準確、快速檢測MRD成為了關注的熱點。我院采用流式細胞術(flow cytometry,FCM)對66例AML患者誘導化療前后的各亞型髓系抗原陽性表達情況進行了檢測和分析,現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2012年6月至2013年6月我院收治的66例初治AML患者作為研究對象。所有患者均符合AML的診斷標準(依據(jù)細胞形態(tài)學、分子生物學、遺傳學及免疫學確立診斷[3])?；颊吣挲g為14～70歲,平均年齡為(37.22±8.33)歲,按照法美英(French-American-British,FAB)分型標準[4]進行分型,M2型40例,M3型18例,M4型6例,M5型2例。按照誘導化療結束時患者臨床療效,將66例患者分為緩解組46例和未緩解組20例。選取我院同期收治的20例缺鐵性貧血患者骨髓作為對照組,其中男性9例,女性11例,年齡為14～72歲,平均年齡為(47.05±8.77)歲,髓系抗原總陽性表達率為(0.69±0.25)%。

1.2 方法

使用COULTER?EPICS?ALTRATM流式細胞儀(美國)采用免疫熒光標記法對白血病免疫表型進行檢測,單克隆抗體9種,包括MPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD34[5],均購自美國Beckman-Coulter公司,采用CD45/SSC散點圖設門。細胞膜抗原陽性判斷標準：熒光陽性細胞>20%；CD34、CD38和胞漿抗原陽性判斷標準：熒光陽性細胞>10%；MRD陽性判斷標準：總陽性表達率顯著高于對照組即為MRD陽性[6]。

1.3 觀察指標

記錄初診時與誘導化療結束時AML患者各亞型髓系抗原陽性表達情況,比較誘導化療結束時緩解組、未緩解組及對照組患者髓系抗原總陽性表達率。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 AML患者初診時各亞型髓系抗原陽性表達率比較

本組66例AML患者陽性總表達率為(19.98±11.98)%,各亞型陽性表達率由高到低依次為：M4、M2、M3、M5。各髓系抗原陽性表達率由高到低依次為：MPO、CD13、CD117、CD33、HLA-DR、CD34、CD11b、CD15、CD14(表1)。

表1 AML患者初診時各亞型髓系抗原陽性表達率比較/%

2.2 誘導化療結束時緩解組與未緩解組患者各亞型髓系抗原陽性表達率比較

本組66例AML患者誘導化療結束時46例緩解、20例未緩解。緩解組髓系抗原陽性總表達率為(10.50±10.49)%,各髓系抗原陽性表達率由高到低依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、HLA-DR、CD117、CD34、CD14；未緩解組髓系抗原陽性總表達率為(16.80±17.39)%,各髓系抗原陽性表達率由高到低依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、CD34、HLA-DR、CD117、CD14(表2)。

表2 誘導化療結束時2組患者各亞型髓系抗原陽性表達率比較/%

2.3 誘導化療結束時3組髓系抗原總陽性表達率比較

緩解組與未緩解組患者髓系抗原總陽性表達率分別為(10.50±10.49)%、(16.80±17.39)%，均顯著高于對照組的(0.69±0.25)%,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；緩解組患者髓系抗原總陽性表達率顯著低于未緩解組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3 討論

白血病是以惡性克隆性增殖為特點的血液系統(tǒng)疾病,其抗原的表達具有很大的異質性[7]。異常表達的抗原不僅在初發(fā)白血病細胞中能夠被檢測出[8]，在形態(tài)學完全緩解后殘存的白血病細胞和復發(fā)時的白血病細胞中也能夠保留其初發(fā)時的抗原異常表達特征[9]。因此,可以依據(jù)白血病細胞的這一克隆性增生的特征進行微小殘留病灶檢測,而確定特異性抗體組合是FCM檢測MRD的關鍵[10]。

研究表明單一抗原在檢測MRD中有較高臨床價值,但AML亞型多、免疫表型復雜,單一抗原或某一亞型難以準確檢測MRD[11]。本研究對AML表型表達陽性率較高的一組髓系CD抗原(MPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b、HLA-DR、CD34)[12]進行AML患者各亞型MRD動態(tài)檢測。結果顯示,初診時AML患者免疫表型陽性總表達率為(19.98±11.98)%,誘導緩解化療后為(10.50±10.49)%。表明誘導化療具有顯著臨床效果,AML髓系抗原總陽性表達率隨治療時間延長而逐漸下降。另外,初診時AML患者各髓系抗原陽性表達率由高到低依次為：MPO、CD13、CD117、CD33、HLA-DR、CD34、CD11b、CD15、CD14,誘導化療結束時緩解組依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、HLA-DR、CD117、CD34、CD14,未緩解組依次為：MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b、CD34、HLA-DR、CD117、CD14,相互比較可知MPO、CD13、CD33總是排在前列,表明MPO、CD13、CD33是AML最有特異性的白細胞分化抗原[13]。

本研究緩解組患者髓系抗原總陽性表達率顯著低于未緩解組,表明誘導化療能夠顯著改善AML患者MRD陽性情況；緩解組與未緩解組患者髓系抗原總陽性表達率均顯著高于對照組,表明緩解組患者仍存在MRD陽性,誘導緩解化療后患者雖處于細胞形態(tài)學持續(xù)緩解狀態(tài),但仍有較高水平殘存白血病細胞?？梢娋徑饨M患者尚未達到免疫學水平的緩解,需鞏固化療。也表明髓系特異性抗體組合對處于細胞形態(tài)學持續(xù)緩解狀態(tài)的MED殘留仍有較高敏感性。

總之,MRD是AML復發(fā)的主要因素,其水平高低對AML患者預后和復發(fā)有重要意義,利用上述9種單克隆抗體能夠較好地檢測MRD,臨床應用價值較高。

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