魏 璇 翟錦霞 馬雪梅 杜秀英 張一兵

子宮頸癌(cervical carcinoma,CC)的發(fā)生呈逐年上升并且有年輕化的趨勢[1]，我國每年宮頸癌新增病例約為13.7萬人[2]。子宮頸癌是由癌前病變宮頸上皮內(nèi)瘤變 (cervical intraepithelial neoplasia,CIN)逐步發(fā)展形成的，其發(fā)病過程經(jīng)歷了CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ、早期浸潤癌、浸潤癌五個(gè)階段。宮頸癌的發(fā)生機(jī)制尚不完全明確,涉及多種因素，其中癌基因和抑癌基因在宮頸癌演變過程中的作用已越來越多地受到人們的重視。

腫瘤中的分子標(biāo)志物的表達(dá)可以表現(xiàn)腫瘤的一些生物學(xué)特性，檢測這些分子標(biāo)志物對腫瘤的早期診斷、進(jìn)展檢測和預(yù)后評估有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。迄今為止，EZH2在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及功能少有報(bào)道，本研究通過對不同病變的宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌組織中EZH2的表達(dá)，來探討他們在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及其相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集我院2009年1月-2010年6月收治的65例宮頸癌石蠟標(biāo)本(其中活檢標(biāo)本31例，手術(shù)標(biāo)本34例)及CIN 90例(其中CINⅠ 30例，CINⅡ 30例，CINⅢ級(jí)30例)作為實(shí)驗(yàn)組。同時(shí)，隨機(jī)選取同期因良性病變行全子宮切除的30例正常宮頸組織作為對照組。實(shí)驗(yàn)組155例，對照組30例，實(shí)驗(yàn)組與對照組患者年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。入選病例既往均無放療、化療及激素治療史。

1.2 主要試劑

EZH2抗體、S-P試劑盒、濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

EZH2蛋白表達(dá)的檢測采用免疫組織化學(xué)S-P法，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作，以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性切片作為陽性對照。

1.4 免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

EZH2主要表達(dá)于細(xì)胞核。按照參考文獻(xiàn)[3]中的方法判定陽性細(xì)胞：陽性染色為棕黃色，以陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比率和染色強(qiáng)度作為陽性判斷依據(jù)。于高倍鏡下隨機(jī)取 10 個(gè)不同視野，各計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞觀察。陽性細(xì)胞數(shù)≤25%為0分，26%～50%為1分，51%～75%為2分，>75%為3分；陽性染色強(qiáng)度：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。上述兩者得分相乘為最后結(jié)果，0～1分為陰性表達(dá)，≥2分為陽性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，陽性率間的比較采用卡方(χ2)檢驗(yàn)及Fisher確切概率計(jì)算法；蛋白表達(dá)相關(guān)性分析采用有序分組資料的線性趨勢檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 EZH2在正常宮頸組織、CIN和宮頸癌組織中的表達(dá)

正常對照組、CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組、宮頸癌組中EZH2陽性表達(dá)率分別為 13.3%(4/30)、30.0%(9/30)、40.0%(12/30)、56.7%(17/30)和76.9%(50/65)；差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

2.2 EZH2表達(dá)與CIN組織和宮頸癌組織臨床病理特征的關(guān)系

EZH2陽性表達(dá)與CIN組織病理學(xué)分級(jí)顯著相關(guān)，其與宮頸癌臨床分期無顯著相關(guān)性，見表1。

表1 EZH2表達(dá)與CIN組織和宮頸癌組織臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，其死亡率居女性腫瘤的第一位。近幾年來，宮頸癌的發(fā)病率呈上升趨勢[4]。我國宮頸癌患病率和病死率占世界總和的三分之一[5]，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和臨床深入研究，宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)從非典型增生到原位癌再到浸潤癌的漸進(jìn)過程。Sawaya等[6]研究表明，CIN Ⅰ級(jí)發(fā)展至CIN Ⅲ級(jí)的平均時(shí)間為9年，再發(fā)展到浸潤性癌則需要3個(gè)月到2年，宮頸癌5年存活率為67%，宮頸上皮內(nèi)瘤樣變存活率變?yōu)?00%,故早期診治CIN是降低宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵。

目前研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展由癌基因及抑癌基因共同參與，通過不同機(jī)制使原癌基因激活，抑癌基因失活，從而使細(xì)胞增殖和凋亡失調(diào)。臨床上常用的巴氏試驗(yàn)、宮頸細(xì)胞學(xué)涂片和活體組織學(xué)檢查方法受觀察者主客觀因素的影響，有些癌前病變難以做出準(zhǔn)確診斷[7]。

EZH2 (enhancer of zeste homolog 2 )是1996年發(fā)現(xiàn)的1種新型人類基因，是果蠅zeste基因的增強(qiáng)子，EZH2定位于人染色體7q35 位置上，該基因在基因組結(jié)構(gòu)中覆蓋了近40kb， EZH2 具有組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶 HDAC 和多種基因外的調(diào)控作用，參與細(xì)胞的生長調(diào)節(jié)，能夠減少轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合，抑制靶基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞周期的演進(jìn)和惡變[8-9]。EZH2還能增強(qiáng)原代細(xì)胞的生長能力。多項(xiàng)研究表明，EZH2基因在多種腫瘤中均呈高表達(dá)，被認(rèn)為是一個(gè)新的候選癌基因，EZH2 表達(dá)上調(diào)使一些腫瘤抑制基因和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的表達(dá)受到抑制，導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖，最終促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，另外，EZH2位于pRB-E2F通路的下游，上調(diào)EZH2 基因表達(dá)，使細(xì)胞周期調(diào)控異常，細(xì)胞增殖明顯，分化異常，導(dǎo)致腫瘤形成[10]。

本研究采用免疫組化方法檢測EZH2在宮頸癌組織中的表達(dá)及其意義。本實(shí)驗(yàn)正常對照組30例，CIN組共90例(CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ組均為30例)，宮頸癌組65例。其中宮頸癌組根據(jù)臨床分期分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移11例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例，EZH2蛋白的陽性表達(dá)率依次顯著性升高 。EZH2在宮頸癌組中的表達(dá)高于正常宮頸組織及CIN組。EZH2基因表達(dá)增強(qiáng)與宮頸癌惡性生長及不良預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果也提示宮頸癌中 EZH2 基因表達(dá)可考慮作為宮頸癌新的分子標(biāo)志物，用于宮頸癌早期診斷、監(jiān)測病情進(jìn)展，并可以作為判斷預(yù)后的指標(biāo)之一，同時(shí)也為應(yīng)用EZH2作為靶點(diǎn)對宮頸癌進(jìn)行基因治療提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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