楊化冰 徐丹林 馬 駿

(湖北中醫(yī)藥大學，湖北 武漢 430065)

“臟虛絡(luò)痹”是臨床辨治慢性病和老年病的病機理論。“補臟通絡(luò)”是2型糖尿病的基本治則，本研究多年臨床基礎(chǔ)上創(chuàng)立補臟通絡(luò)基本方(后稱補臟通絡(luò)方)。臨床及實驗表明補臟通絡(luò)方能有效延緩糖尿病大血管并發(fā)癥的發(fā)生。本研究觀察補臟通絡(luò)方對2型糖尿病大鼠大血管內(nèi)皮細胞Ⅳ型膠原表達的影響及內(nèi)皮細胞分泌功能的影響，初步探討補臟通絡(luò)方保護大血管內(nèi)皮的作用機制。

1 材料和方法

1.1動物 雄性SD大鼠60只8周齡，體重(200±20)g，武漢大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。

1.2藥物 補臟通絡(luò)方由生黃芪、淮山藥、丹參、玄參、麥冬、生曬參、川貝、水蛭按4∶4∶3∶3∶3∶2∶2∶1構(gòu)成，購自湖北中醫(yī)附院中藥房，制成1、2 g生藥/ml水煎液。

1.3主要試劑與儀器 鏈脲佐菌素(STZ)，購自美國Sigma公司；內(nèi)皮素(ET)放射免疫分析藥盒，購自北京北方生物技術(shù)研究所；一氧化氮(NO)檢測試劑盒，購自南京建成生物工程研究所。日本Olympas-CH30顯微鏡；One touch Ultra血糖測定儀，美國Johnson & Johnson公司；SN-682型放射免疫γ計數(shù)器，上海核福光電儀器有限公司。

1.4模型的建立與分組 高脂飼料(含脂肪41%，碳水化合物41%，蛋白質(zhì)18%)喂養(yǎng)2 w后，一次性尾靜脈注射STZ 30 mg/kg，72 h后測空腹血糖(FPG)，穩(wěn)定在13.5 mmol/L以上者為造模成功〔1〕。正常組給予正常飼料。分組：補臟通絡(luò)方低劑量組(低劑量組)、補臟通絡(luò)方高劑量組(高劑量組)分別給予補臟通絡(luò)方1、2 g/ml灌胃；正常組、病理組給予生理鹽水灌胃。灌胃劑量均為1 ml/100 g，1次/d。治療期間飲食不變，治療周期為8 w。

1.5指標的檢測 大鼠分別于給藥第8周末禁食12 h，從尾靜脈采血在OneTouch Ultra血糖儀上測FPG；頸動脈插管放血，收集血液3 ml，分離血清，待測ET、NO含量；打開胸腔，剪取主動脈弓下主動脈約0.5 cm ，剝?nèi)ブ鲃用}外膜和中膜，保留血管內(nèi)皮細胞層，4%戊二醛固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片(厚度為5 μm)，蘇木素-伊紅(HE)染色，備用光鏡觀察；免疫組化測定主動脈內(nèi)皮細胞Ⅳ型膠原表達；放免法(RIA)測定ET含量；硝酸還原酶法測定NO含量。

1.6統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析和q檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組胸主動脈內(nèi)膜形態(tài)比較 光鏡觀察結(jié)果：正常組內(nèi)膜光滑均一，內(nèi)皮細胞無增生、脫落；病理組內(nèi)膜粗糙不均，明顯增厚，內(nèi)皮細胞突起，可見較多炎細胞黏附；低劑量組內(nèi)膜較粗糙，內(nèi)膜輕度增厚；高劑量組內(nèi)膜較模型組明顯光滑，內(nèi)膜局部輕度增厚。

2.2各組胸主動脈內(nèi)皮細胞Ⅳ型膠原表達比較 與正常組相比，病理組Ⅳ型膠原表達水平明顯增高(P<0.01)；與病理組比較，各治療組Ⅳ型膠原表達水平明顯降低(P<0.01)； 與低劑量組比較，高劑量組Ⅳ型膠原表達明顯降低(P<0.05)。見表1。

2.3各組FPG比較 病理組FPG明顯高于正常組(P<0.01)；治療組FPG顯著低于病理組(P<0.01)；各治療組FPG無顯著差異(P>0.05)。見表1。

2.4各組血清ET、NO、ET/NO比值比較 病理組較正常組血清ET顯著升高(P<0.01)，NO顯著降低(P<0.01)，ET/NO比值顯著升高(P<0.01)；各治療組較病理組ET顯著降低(P<0.01)，NO顯著升高(P<0.01)，ET/NO比值顯著降低(P<0.01)；高劑量組降低ET、ET/NO比值，升高NO作用優(yōu)于低劑量組(P<0.05)。見表1。

表1 各組胸主動脈內(nèi)皮細胞Ⅳ型膠原表達、FBG、血清ET、NO、ET/NO比值比較±s，n=10)

3 討 論

細胞外基質(zhì)沉積是大血管內(nèi)膜增厚的主要原因。血管內(nèi)皮細胞可合成Ⅳ型膠原，Ⅳ型膠原是正?；啄さ闹饕M成成分之一。現(xiàn)有研究已表明血管內(nèi)皮功能受損可能是血管并發(fā)癥發(fā)生的關(guān)鍵和啟動因子，高血糖作用則被認為是引起血管內(nèi)皮細胞功能紊亂的主要原因之一。高血糖可增加內(nèi)皮細胞合成Ⅳ型膠原的活性，改變內(nèi)皮細胞的基質(zhì)合成，導致基底膜增厚。血管內(nèi)皮是非常重要的內(nèi)分泌腺，內(nèi)皮功能異常、內(nèi)皮收縮因子與內(nèi)皮舒張因子分泌調(diào)節(jié)和功能平衡的失調(diào)是糖尿病合并動脈粥樣硬化發(fā)病的重要機制。高血糖可引起血管內(nèi)皮細胞損傷，進而導致其分泌功能障礙，如ET的過量釋放和NO分泌不足。ET是血管內(nèi)皮細胞分泌的一種強有力的血管收縮肽，在內(nèi)皮損傷時合成及釋放增加。NO是內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的血管舒張因子，有很強的舒血管和抗血小板凝集的功能，能阻抑動脈硬化的發(fā)生和發(fā)展〔2，3〕。本研究提示補臟通絡(luò)方對糖尿病大血管內(nèi)皮保護作用機制可能與其改善糖尿病糖代謝紊亂，減少血管內(nèi)皮細胞Ⅳ型膠原表達以及改善血管內(nèi)皮的分泌功能，降低ET/NO比值有關(guān)。

4 參考文獻

1沈亞非，徐焱成.2高糖高脂膳食和鏈脲佐菌素誘導2型糖尿病模型的建立〔J〕.實用診斷與治療雜志，2006；20(9)：6.

2梁永平，魏劍芬，金秀平.血清內(nèi)皮素水平與2型糖尿病大血管病變的關(guān)系〔J〕.中國綜合臨床，2007；23(5)：405-6.

3胡歡歡，衡先培.糖尿病血管內(nèi)皮損傷機制及防治研究進展〔J〕.實用中醫(yī)藥雜志，2010；26(1)：68-70.