逄 利 王少坤 凡文博 張 楠 侯 玥 徐大海 吳 揚(yáng)

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院急診科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

百草枯中毒與氧自由基損傷、過(guò)度炎癥反應(yīng)、鈣超載、酶失衡、細(xì)胞凋亡、DNA損傷及基因表達(dá)異常等有關(guān)〔1〕。蛹蟲(chóng)草小分子肽有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、抗氧化損傷等特點(diǎn)。本文旨在觀察蛹蟲(chóng)草小分子肽對(duì)百草枯所致人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5過(guò)氧化的保護(hù)作用。

1 資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料及主要試劑 胎牛血清，人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5，DMEM培養(yǎng)基，丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒。

1.2蟲(chóng)草小分子肽的提取 將購(gòu)買(mǎi)的蛹蟲(chóng)草制成小分子肽，采用高效凝膠過(guò)濾色譜法(HPGFC)測(cè)定，小分子肽峰值分子量為300～700 D。

1.3MRC-5細(xì)胞的培養(yǎng)及分組 MRC-5細(xì)胞用0.25%胰酶消化后傳代，計(jì)數(shù)后以106個(gè)/ml的密度懸浮于DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)4代后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞隨機(jī)分為5組：①對(duì)照組：MRC-5細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)；②模型組：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯；③實(shí)驗(yàn)組1：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯+5 mg/ml的蛹蟲(chóng)草小分子肽；④實(shí)驗(yàn)組2：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯+10 mg/ml的蛹蟲(chóng)草小分子肽；⑤實(shí)驗(yàn)組3：加入終濃度為1 mmol/L的百草枯+20 mg/ml的蛹蟲(chóng)草小分子肽。

1.4MTT法測(cè)細(xì)胞存活率 細(xì)胞存活率用MTT 法測(cè)定〔2〕。

1.5檢測(cè)方法 采用氯化硝基氮藍(lán)四唑光還原法(NBT法)測(cè)定SOD活性，按照試劑盒說(shuō)明操作，在560 nm處測(cè)定OD值。GSH-Px用DTNB顯色法測(cè)定〔3〕。MDA含量用硫代巴比妥酸(TBARS)方法測(cè)定〔4〕。

2 結(jié) 果

2.1蛹蟲(chóng)草小分子肽對(duì)MRC-5存活率的作用 與對(duì)照組〔(46.13±7.56)%〕相比，百草枯可顯著誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞的損傷，模型組細(xì)胞存活率僅為(17.06±3.43)%。隨著蛹蟲(chóng)草小分子肽濃度增加，細(xì)胞的存活率也逐漸增加。較低濃度(5 mg/ml)的蛹蟲(chóng)草小分子肽〔(21.23±5.53)%〕與模型組相比沒(méi)有明顯的差別，而較高濃度(10、20 mg/ml)的蛹蟲(chóng)草小分子肽組對(duì)百草枯造成的損傷有顯著地阻礙作用，細(xì)胞存活率分別為〔(26.78±5.69)%、(31.82±6.78)%〕(P<0.05)。

2.2蛹蟲(chóng)草小分子肽對(duì)MRC-5抗氧化酶系活性的影響 模型組SOD和GSH-Px的活性均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。與模型組相比，SOD、GSH-Px的活性隨蛹蟲(chóng)草小分子肽濃度的升高也相應(yīng)提高，并存在明顯的量效關(guān)系(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3蛹蟲(chóng)草小分子肽對(duì)MRC-5細(xì)胞MDA含量的影響 隨著蛹蟲(chóng)草小分子肽濃度增加，MDA含量逐漸下降。與模型組相比，中等濃度(10 mg/ml)和高濃度(20 mg/ml)蛹蟲(chóng)草小分子肽可使MDA顯著降低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組SOD、GSH-Px活性及MDA含量測(cè)定±s)

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，蛹蟲(chóng)草小分子肽可保護(hù)細(xì)胞，能抑制百草枯誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并且其作用呈量效遞增關(guān)系。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)蛹蟲(chóng)草對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的多項(xiàng)免疫指標(biāo)均有明顯增強(qiáng)作用，可促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能；消除機(jī)體內(nèi)超氧自由基；保護(hù)細(xì)胞膜穩(wěn)定性及通透性；明顯提高NK細(xì)胞的活性。蟲(chóng)草小分子肽為蛹蟲(chóng)草經(jīng)過(guò)酶解工藝直接制得的蛹蟲(chóng)草水解物，主要作用包括減輕溶酶體損傷、穩(wěn)定溶酶體；下調(diào)炎癥基因和凋亡基因的表達(dá)；維持SOD，減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA產(chǎn)生以及氧自由基所致的細(xì)胞損傷〔5，6〕。

總之，蛹蟲(chóng)草小分子肽可顯著提高M(jìn)RC-5細(xì)胞中SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量，對(duì)百草枯誘導(dǎo)的MRC-5過(guò)氧化損傷具有明顯的保護(hù)作用。

4 參考文獻(xiàn)

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