盛芳芳 林 於 劉 新

(重慶醫(yī)科大學(xué)，重慶 400016)

中國藥典2010年版收載的舒胸片臨床主要用于冠心病、心絞痛、心律失常的治療。傳統(tǒng)的舒胸片為口服固體制劑，若改為舌下黏膜給藥，可具有使用方便、無胃腸及肝臟首過效應(yīng)、吸收起效快、生物利用度高等優(yōu)點。舌下給藥也是小劑量藥物注射給藥的理想替代給藥途徑之一〔1〕，已廣泛應(yīng)用于臨床〔2〕。本試驗旨在優(yōu)選舒胸舌下片制備成型工藝中的輔料組成和舌下黏膜給藥促透劑的組成。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 YPJ-200A型片劑硬度儀(成都一科儀器設(shè)備有限公司)；FT2000A型脆碎度儀(北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司)；TDP-5小型壓片機(長沙市常宏制藥機械設(shè)備廠)；C-20A型高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；RYJ-6A型藥物透皮擴散試驗儀(上海黃海藥檢儀器廠)。

三七、紅花、川芎均購自重慶市解放碑藥材市場，經(jīng)本校林於教授鑒定三七為五加科三七〔Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen〕干燥根及根莖，紅花為菊科植物紅花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花，川芎為傘形科植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根莖。人參皂苷Rg1對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110703-2010027，含量以96.3%計。交聯(lián)聚維酮(PVPP)、可溶性淀粉、甘露醇、微晶纖維素均為分析純(成都市科龍化工試劑廠)；乳糖(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司)；月桂氮卓酮、薄荷醇(中國醫(yī)藥集團化學(xué)試劑有限公司)；油酸(蘇州工業(yè)園正興化工研究院)；人工唾液(按 ISO/TR10271標(biāo)準(zhǔn)自制)〔3〕；豬舌下黏膜自制備；甲醇為色譜純，95%乙醇為分析純。

1.2方法

1.2.1輔料的優(yōu)選

1.2.1.1單因素試驗 按文獻(xiàn)方法〔4〕制備三七、紅花、川芎藥材提取物干膏，稱取干膏加不同比例的輔料(見表1)，過80目篩，混勻，用95%乙醇制軟材，過20目篩制粒，置50℃減壓干燥30 min，40目整粒，壓片，即得?？梢缘玫饺樘呛透事洞急壤⒂昧?，微晶纖維素的用量對片劑的制備有很大的影響。

1.2.1.2正交試驗 以乳糖和甘露醇比例(A)、用量(B)、微晶纖維素的量(C)作為主要影響因素，各取3個水平，以硬度、外觀、脆碎度為指標(biāo)進(jìn)行綜合評價〔5〕，見表2。

1.2.2人參皂苷Rg1的HPLC測定 舒胸片中人參皂苷Rg1性質(zhì)穩(wěn)定、含量較高，中國藥典2010年版以其為指標(biāo)控制舒胸片含量。因此，選其累積透膜量為指標(biāo)間接考察不同的促透劑對舒胸舌下片的促透作用。

表1 不同輔料類型及用量性狀表

1.2.2.1溶液制備 供試品溶液：取片劑適量，研細(xì)，精密稱定3 g(相當(dāng)于10片片重)，加甲醇分兩次超聲提取(15 ml×2，每次5 min)，濾過，合并濾液，水浴蒸干，殘渣用甲醇轉(zhuǎn)移并定容至10 ml，再精密吸取5 ml置10 ml量瓶中，甲醇定容，0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液：精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，甲醇溶解并制成為1.8 mg/ml的溶液。陰性樣品溶液：稱取不含三七藥材的片劑適量，參照供試品溶液制備方法制備。

表2 正交試驗因素水平

1.2.2.2色譜條件 色譜柱：島津SPD-20A C18 (4.0 mm×200 mm，5 μm)柱，柱溫25 ℃；流動相(A：乙腈，B：水)0～12 min A 19%，12～60 min A 12%～60%；流速為1.0 ml/min ；檢測波長為203 nm；進(jìn)樣量20 μl。

1.2.2.3系統(tǒng)適應(yīng)性實驗 分別精密吸取對照品、供試品和陰性樣品溶液各20 μl，按藥典色譜條件測定。

1.2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5 ml，移至 5 ml容量瓶中，甲醇定容。按藥典色譜條件分別進(jìn)樣測定。

1.2.2.5加樣回收率試驗 取片劑粉末3 g，分別加入2、2、4、4、8、8 mg對照品，按1.2.2.1供試品溶液制備方法處理。按藥典色譜條件分別進(jìn)樣測定，計算加樣回收率加樣回收率。

1.2.3體外透黏膜實驗

1.2.3.1溶液配制 含藥促透劑溶液：稱取藥材干膏3 g置50 ml量瓶中，共6份，分別精密加入月桂氮卓酮、油酸或薄荷醇1、2、2.5、3、4、5 ml，用人工唾液溶解并定容，得含促透劑2%、4%、5%、6%、8%和10%的藥物溶液?？瞻讓φ杖芤海悍謩e精密加入月桂氮卓酮、油酸或薄荷醇1、2、2.5、3、4、5 ml，用人工唾液溶解并定容，得不含促透劑的對照溶液。供試黏膜：選取新鮮豬舌下黏膜，置液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3.2試驗操作 將清洗后的舌下黏膜上表皮朝上固定在擴散池上。供給池中加入1.5 ml的供試液，擴散池中加入生理鹽水，控制溫度(37±0.5)℃，攪拌速度360 r/min〔6〕，分別在1、2、3、4、5、6、7、8 h取樣0.5 ml，立刻補充等溫等體積的生理鹽水。樣品用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，高效液相色譜(HPLC)測定人參皂苷Rg1含量。

1.2.3.3單因素試驗 分別考察氮酮、薄荷醇、油酸對人參皂苷Rg1的促透規(guī)律，找出適合舒胸舌下片的復(fù)合促透劑〔7〕。按照1.2.2.2操作，分別對空白組、氮酮組、油酸組、薄荷醇組進(jìn)行透黏膜實驗，每組重復(fù)6次取平均值。

1.2.3.4星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)選促透劑 在單因素實驗基礎(chǔ)上,按照表6研究三種不同的促透劑之間的最佳比例。采用Design Expert8.0軟件對實驗數(shù)據(jù)擬合方程。

采用體外透膜實驗，以人參皂苷Rg1為透膜指標(biāo)，最佳促透劑配方為：2%氮酮、2%油酸和5%的薄荷醇。

2 結(jié) 果

2.1正文實驗結(jié)果 由方差分析得出，A、B、C對綜合評分都有顯著影響，由直觀分析得到最佳制備工藝是A1B2C3 ，即藥物干膏:〔乳糖:甘露醇(1∶9)〕:微晶纖維素為 6∶8∶0.5。見表3，表4。

2.2系統(tǒng)適應(yīng)性實驗結(jié)果 在該色譜條件下，陰性無干擾，分離良好。人參皂苷Rg1的HPLC，見圖1。以人參皂苷Rg1濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得方程Y=1 598X-344.28，r2=0.998，表明理論上在3.78～20.64 μg/ml濃度范圍內(nèi)人參皂苷Rg1濃度與其對應(yīng)的峰面積呈良好的線性關(guān)系。精密度試驗峰面積(RSD)為1.13%，表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗RSD為0.89%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗，樣品含量的RSD為1.53%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.3體外透膜實驗結(jié)果 氮酮組、油酸組、薄荷醇組8 h累積透膜量和空白組(0.47±0.24)比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5。采用多重比較最小顯著差法(LSD)法進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較，任何兩種濃度間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。對于氮酮而言， 2%、4%、6%的濃度時,隨著濃度增加,累積透膜量依次增加,氮酮為6%濃度時累積透膜量最大，當(dāng)濃度>6%時,累積透膜量有所降低?？紤]到成本等綜合因素,選取2%～6%濃度的氮酮作為實驗考查范圍；同理分析油酸和薄荷醇累積透黏膜數(shù)據(jù)得油酸和薄荷醇組均選取2%、4%、6%的濃度。因此,氮酮、油酸、薄荷醇有效濃度區(qū)間均為2%～6%。見表6、表7，圖2～圖7。

表3 正交實驗設(shè)計和結(jié)果

(OD)= 0.33×W1/Wmax1+0.33×W2/Wmax2+0.33×W3/Wmax3；A、B、C、D同表2

表4 綜合方差分析表

F0.05(2，2)=19.00，F(xiàn)0.01(2，2)=99.00；A、B、C、D同表2

人參皂苷Rg1對照品

人參皂苷Rg1供試品

人參皂苷Rg1陰性

圖1人參皂苷Rg1的HPLC圖譜

2.4累積透膜量(Q) 擬合方程為累積透黏膜量Q=0.389 86-0.077 602×A+0.125 25×B+0.148 92×C+8.892 89E-0.03×A×B+6.889 78E-0.03×A×C-0.038 394×B×C。A為氮酮，B為油酸，C為薄荷醇。

表5 人參皂苷Rg1累積透黏膜量±s,mg/ml)

表6 各因素各水平的代碼值及實際數(shù)值

表7 實驗設(shè)計及各效應(yīng)值數(shù)據(jù)

圖2 氮酮A、油酸B曲面圖

圖3 氮酮A、油酸B等高

圖4 氮酮A、薄荷醇C曲面圖

圖5 氮酮A、薄荷醇C等高

圖6 油酸B、薄荷醇C曲面圖

圖7 油酸B、薄荷醇C等高圖

3 討 論

由于藥典中舌下片要求輔料為可溶性，因此本實驗嘗試用不同的吸濕性小的可溶性輔料改善其吸濕性，選用了常用的輔料如可溶性淀粉、乳糖、甘露醇等。可溶性淀粉對舒胸舌下片吸濕性具有較好的改善作用，但是對于舌下片而言口感較差；乳糖、甘露醇口感較好，但是單獨使用黏性較強，制粒困難，本實驗通過調(diào)整乳糖甘露醇比例，發(fā)現(xiàn)當(dāng)乳糖和甘露醇的比例為1∶9時可以達(dá)到很好地減輕顆粒黏性的作用。

傳統(tǒng)口服型舒胸片制備是用三七粉末直接吸收其他藥材浸膏制粒壓片。本舌下片為全浸膏片，有利于其中的活性成分在口腔中迅速釋放；體外舌黏膜透皮實驗顯示，本品中已知的主要活性成分人參皂苷Rg1在復(fù)合促透黏膜劑為2%氮酮、2%油酸和5%的薄荷醇復(fù)合促透劑下有較好和較快的透過性。

本實驗以人參皂苷Rg1為考察對象，舌下片最佳制備工藝為:按干藥材提取物-〔乳糖-甘露醇(1∶9)〕-微晶纖維素=6∶8∶0.5比例稱取輔料,過80目篩，混勻，分別加2%氮酮、2%油酸和5%的薄荷醇,用95%乙醇制軟材，過20目篩制粒，置50 ℃減壓干燥30 min，40目整粒，壓片，即得。

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