閆振坤 王立波 宋玉梅 劉曉陽 齊 玲

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130033)

腫瘤生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，腦腫瘤中存在的腫瘤干細(xì)胞(TSCs)是腫瘤發(fā)生及耐藥的根源〔1～3〕。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)作為臨床腫瘤新藥已進(jìn)入Ⅱ期研究階段，順鉑(CIS)是常規(guī)化療藥物之一。本文擬研究TRAIL和CIS這兩種藥物對(duì)人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤SC326神經(jīng)球細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞和主要試劑 SC326神經(jīng)球(吉林醫(yī)藥學(xué)院干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室提供)。CIS、MTS試劑盒(美國(guó)Sigma公司)；神經(jīng)培養(yǎng)基、B27添加物(美國(guó)Gibco公司)，人堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)和人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)(英國(guó)Pepro Tech公司)。

1.2神經(jīng)球培養(yǎng)〔4，5〕將神經(jīng)球細(xì)胞接種于干細(xì)胞培養(yǎng)液(SCM，包括神經(jīng)培養(yǎng)基、B27添加物、20 μg/L EGF和bFGF)中進(jìn)行培養(yǎng)，每3～5 d離心換液一次，按1∶2比例傳代。

1.3TRAIL和順鉑對(duì)神經(jīng)球細(xì)胞生長(zhǎng)的作用 神經(jīng)球細(xì)胞機(jī)械分離成單細(xì)胞懸液，以每孔100 μl SCM含5 000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，置入37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)設(shè)為空白對(duì)照組、TRAIL組(300 mg/L)、CIS組(10 mg/L)和聯(lián)合用藥組(TRAIL 300 mg/L+CIS 10 mg/L)，每組5個(gè)復(fù)孔，作用3 h后，每孔加入MTS 20 μl繼續(xù)孵育2 h，加入10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀490 nm處測(cè)定各孔光吸收值。計(jì)算細(xì)胞死亡率。倒置顯微鏡下觀察SC326神經(jīng)球形成情況。

2 結(jié) 果

2.1藥物作用后神經(jīng)球細(xì)胞的死亡率 TRAIL和CIS組SC326神經(jīng)球細(xì)胞死亡率分別是(24.43±2.06)%和(22.02±2.58)%；兩者聯(lián)合作用后明顯增加到(52.32±4.35)%。

2.2藥物作用后神經(jīng)球形成觀察 見圖1。TRAIL和順鉑均可以抑制神經(jīng)球的形成，兩者聯(lián)合抑制作用更明顯。

空白對(duì)照組 聯(lián)合用藥組

3 討 論

腦腫瘤發(fā)生在顱內(nèi)，以惡性居多，其中以膠質(zhì)母細(xì)胞瘤惡性度最高，現(xiàn)今無有效的治療方式。包括手術(shù)、放療、化療和替莫唑胺在內(nèi)的多種療法對(duì)患者生存期的延長(zhǎng)意義不大〔6〕。這是因?yàn)槟[瘤中存在腦TSCs(BTSCs)，它是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)以及放化療抵抗等的原因。在干細(xì)胞培養(yǎng)液中，BTSCs是以神經(jīng)球的方式進(jìn)行生長(zhǎng)，傳代后仍保持這種特性〔7～9〕。本文結(jié)果說明，TRAIL和CIS對(duì)神經(jīng)球細(xì)胞均有一定的殺傷作用，并且可以抑制神經(jīng)球的形成，兩者聯(lián)合后可以發(fā)揮藥物協(xié)同作用。但TRAIL和CIS殺死神經(jīng)球細(xì)胞及抑制神經(jīng)球形成的原因及機(jī)制還有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4 參考文獻(xiàn)

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