楊 琴 萬 明 蔣正舉 王正龍 趙 曉

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻喉科，貴州 遵義 563003)

臨床常根據(jù)膽脂瘤發(fā)病位置分為顱內(nèi)膽脂瘤、膽脂瘤型中耳炎及外耳道膽脂瘤等幾類，系異位胚胎殘余的外胚層組織的良性腫瘤〔1〕。雖然膽脂瘤是良性病變，但其具有惡性腫瘤生物行為，對中耳、顳骨等存在廣泛損傷，而破骨細(xì)胞分化因子(RANKL)、配體核因子-κB受體活化因子(RANK)和骨保護(hù)素(OPG)在這一過程中扮演著重要角色〔2〕。本文旨在探究膽脂瘤骨質(zhì)破壞與RANKL、RANK和OPG之間的聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 我院耳鼻喉科2010年4月至2013年8月中耳膽脂瘤患者28例。男13例，女15例、年齡60～67歲，平均年齡(60.5±5.6)歲；病程3個(gè)月～2年，平均(11.2±5.4)個(gè)月。納入標(biāo)準(zhǔn)：①膽脂瘤患者均經(jīng)過術(shù)前高分辨率CT檢查及術(shù)后病理學(xué)確診；②均為第一次接受治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：膽脂瘤伴有耳道其他病變、手術(shù)前接受過相關(guān)藥物治療的患者。正常組20例，男8例，女12例；年齡61～68歲，平均年齡(61.7±5.8)歲；兩組年齡、性別差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2免疫組織化學(xué)檢測方法 武漢博士德生物工程有限公司生產(chǎn)的兔抗人RANKL和OPG多克隆抗體；北京中杉生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的DAB顯色試劑盒及免疫組織化學(xué)SP試劑盒。將新鮮標(biāo)本快速置于中性甲醛溶液內(nèi)充分固定，常規(guī)包埋，并行連續(xù)切片操作。染色操作按試劑說明書進(jìn)行：標(biāo)本脫蠟水化后，選用過氧化氫甲醛阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，再行PBS修復(fù)抗原，并應(yīng)用非免疫性山羊血清封閉，加入OPG多克隆兔IgG抗體一抗，于4℃溫箱內(nèi)過夜，加入生物素標(biāo)記二抗，常溫內(nèi)孵化25 min，蘇木精染色，樹膠封片，于顯微鏡下檢測RANKL、RANK、OPG、腫瘤壞死因子受體(TNFR)1表達(dá)情況。

1.3骨質(zhì)破壞程度的判定 手術(shù)過程中：觀察膽脂瘤對骨質(zhì)的破壞程度，輕度：鼓室盾板和聽骨遭到輕微破壞；中度：天蓋和聽骨大部分被破壞；重度：聽骨完全破壞，迷路破壞，外耳道后壁破壞，面神經(jīng)遭到破壞。

1.4統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS10.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組破骨細(xì)胞分化因子等指標(biāo)的差異 病例組RANKL、OPG、RANK、RANKL/OPG、TNFR1水平均顯著高于正常組(P<0.05)。見表1。

2.2RANKL/OPG與TNFR1的相關(guān)性 RANKL/OPG與TNFR1呈顯著的正相關(guān)(r=0.497，P=0.007)。見圖1。

2.3骨質(zhì)破壞程度觀察結(jié)果 術(shù)中觀察發(fā)現(xiàn)：輕度骨質(zhì)破壞9例、中度12例、重度7例。骨質(zhì)破壞程度與RANKL/OPG比值呈正相關(guān)(r=0.602，P=0.000)。

表1 兩組RANKL、OPG、RANK、RANKL/OPG、TNFR1表達(dá)比較±s)

圖1 RANKL/OPG與TNFR1的相關(guān)性

3 討 論

中耳膽脂瘤是一種多發(fā)于中鼓室、上鼓室、乳突或巖尖區(qū)域內(nèi)的膽脂瘤，是鱗狀上皮異常積聚，其對患者中耳聽力結(jié)構(gòu)及相鄰顱骨存在極大破壞，患者可能出現(xiàn)長期流膿、鼓膜穿孔以及聽力下降等癥狀〔3〕。臨床將中耳膽脂瘤分為先天性及后天性兩類，其中先天性中耳膽脂瘤發(fā)病由形成原始脊索相同的外胚層胚胎細(xì)胞殘留的異常集聚而成〔4〕。而后天性中耳膽脂瘤又可細(xì)分為后天原發(fā)性膽脂瘤及后天繼發(fā)性膽脂瘤兩類，其中后天原發(fā)性中耳膽脂瘤發(fā)病機(jī)制可能與咽鼓管功能障礙引發(fā)的鼓膜內(nèi)陷袋誘發(fā)的上皮碎屑堆積有關(guān)；后天繼發(fā)性膽脂瘤則與外傷、手術(shù)損傷引發(fā)的鱗狀上皮細(xì)胞中耳種植有關(guān)〔5〕。中耳膽脂瘤患者最為危險(xiǎn)的癥狀即為中耳聽力結(jié)構(gòu)及相鄰顱骨破壞，而這種骨破壞與破骨細(xì)胞活化水平有關(guān)，而RANKL、RANK和OPG則為破骨細(xì)胞的重要參與物質(zhì)。

臨床業(yè)已證實(shí)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞間的平衡關(guān)系是骨形成和吸收的重要影響因素。RANKL是人體骨吸收的重要因子，其是核因子-κB配體的受體活化物，歸屬于TNF家族，其主要通過活化的T淋巴細(xì)胞及成骨/基質(zhì)細(xì)胞來表達(dá)〔6〕。一般而言，表達(dá)于成骨細(xì)胞的RANKL可于巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)環(huán)境內(nèi)與表達(dá)于破骨細(xì)胞的特異性受體RANK結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控破骨細(xì)胞分化、生存以及附著功能，最終實(shí)現(xiàn)骨吸收〔7〕。但上述機(jī)制可被OPG抑制，OPG是一種生長因子受體，其歸屬于TNF家族，該物質(zhì)主要表達(dá)于骨髓基質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞內(nèi)，其他如：成纖維細(xì)胞、樹突細(xì)胞、主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞、單核細(xì)胞內(nèi)也存在少量表達(dá)〔8〕。OPG可與RANK競爭性結(jié)合RANKL，而骨組織微環(huán)境內(nèi)的OPG與RANKL相對水平是影響破骨細(xì)胞活化、增殖的關(guān)鍵，RANKL/OPG比值大小直接影響著該區(qū)域骨骼以骨破壞表達(dá)或骨生成表達(dá)，這一途徑被醫(yī)學(xué)界稱為RANKL-RANK-OPG通路〔9〕。已有研究表明，骨破壞相關(guān)因子與部分激素可調(diào)節(jié)RANKL與OPG的表達(dá)水平，進(jìn)而影響患者骨代謝，如維生素D3、甲狀旁腺素、IL-11、IL-1等可上調(diào)RANKL表達(dá)，進(jìn)而激活破骨細(xì)胞；而前列腺素E2則可下調(diào)OPG表達(dá)并激活破骨細(xì)胞〔10〕。

本研究表明中耳膽脂瘤患者存在較為明顯的RANKL-RANK-OPG通路激活。RANKL/OPG比值越高患者破骨細(xì)胞活化程度越高，患者中耳聽力結(jié)構(gòu)及相鄰顱骨損傷也越嚴(yán)重。臨床可根據(jù)患者RANKL、OPG及RANKL/OPG表達(dá)情況給予患者診斷及治療介入。

4 參考文獻(xiàn)

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