譚銀豐 李永輝 張俊清 陳小武 廖小平

(海南醫(yī)學(xué)院 海南省熱帶藥用植物研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571199)

在目前形勢(shì)下，積極的預(yù)防老年癡呆癥成為對(duì)抗該病的重要途徑。流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)研究表明，咖啡具有抗老年癡呆(AD)作用〔1～3〕。咖啡渣是生產(chǎn)咖啡粉過程中咖啡豆經(jīng)高溫高壓水提取后剩余的副產(chǎn)品。咖啡作為世界三大飲品之一，生產(chǎn)過程中產(chǎn)生大量咖啡渣，有關(guān)咖啡渣的再利用，除了用作肥料與燃料外，也在積極探索從咖啡渣中提取油脂〔4〕、制取D-甘露糖〔5〕、開發(fā)抗氧化作用〔6〕等。前期研究表明咖啡渣乙醇提取物中含有三萜類化學(xué)成分，并對(duì)咖啡渣提取物的急性毒性與抗炎作用進(jìn)行了初步研究。本文擬分析咖啡渣提取物是否具有與咖啡類似的抗AD作用，為咖啡渣的廢物再利用開辟新途徑。

1 材料與方法

1.1材料 清潔級(jí)18～22 g雌性昆明種小鼠，由長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供(動(dòng)物合格證號(hào)：HNACSDC20101587)。丙二醛(MDA)測(cè)試盒、超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所提供)。SMG-2型水迷宮(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制)?？Х仍珊Ｄ狭ι裢顿Y股份有限公司提供。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 供試樣品制備將生產(chǎn)速溶咖啡后剩余的咖啡渣烘干，稱取3份，每份800 g，分別加入30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇各6 000 ml加熱回流提取2 h，過濾，再分別加入4 000 ml原濃度乙醇提取2 h，過濾，合并2次濾液。回收乙醇，提取物濃縮至濃稠狀。30%乙醇提取物(30ECT)、60%乙醇提取物(60ECT)、90%乙醇提取物(90ECT)得率分別為：3.20%、68.75%、26.65%。

1.3對(duì)三氯化鋁、D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠癡呆模型影響〔7〕取18～22 g雌性昆明種小鼠120只，每組10只隨機(jī)分為12組，分別為空白組、模型組、陽性對(duì)照藥組、30ECT 3個(gè)不同劑量組、60ECT 3個(gè)不同劑量組、90ECT 3個(gè)不同劑量組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常飲食飲水，12 h明暗交替飼養(yǎng)適應(yīng)3 d后，按10 mg·kg-1·d-1灌胃給予蒸餾水配置的1 mg/ml AlCl3，同時(shí)腹腔注射生理鹽水配置的24 mg/ml D-半乳糖120 mg·kg-1·d-1,空白組灌胃給予相同體積的自來水，腹腔注射相同體積生理鹽水，連續(xù)7 w。腹腔注射后第25天開始灌胃給予相應(yīng)劑量受試藥物，陽性對(duì)照組灌胃給予鹽酸多奈哌齊10 mg·kg-1·d-1,持續(xù)給藥24 d。給藥結(jié)束后進(jìn)行方形水迷宮試驗(yàn)，具體方法如下：正式實(shí)驗(yàn)前2 d，每天訓(xùn)練各組小鼠3次，訓(xùn)練小鼠從SMG-2型方形水迷宮起點(diǎn)逃避水面游泳達(dá)到終點(diǎn)樓梯。方形水迷宮自動(dòng)記錄小鼠進(jìn)入各盲端的錯(cuò)誤次數(shù)與到達(dá)終點(diǎn)時(shí)間(潛伏期)。第3天進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，每組小鼠測(cè)試2次，取平均錯(cuò)誤次數(shù)和平均潛伏期。完成方形水迷宮實(shí)驗(yàn)后的小鼠，經(jīng)摘眼球取血，4 000 r/min離心10 min，取血清，測(cè)小鼠血清中MDA、SOD含量。剝離小鼠大腦，用4%甲醛溶液固定。

表1 咖啡渣對(duì)癡呆模型小鼠記憶能力的作用±s,n=10)

2 結(jié) 果

與空白組相比，模型組小鼠水迷宮測(cè)試的潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加，與模型組比較，多奈哌齊、30ECT能同時(shí)降低小鼠方形水迷宮實(shí)驗(yàn)潛伏期及錯(cuò)誤次數(shù)，其他咖啡渣醇提物均能減少小鼠水迷宮測(cè)試錯(cuò)誤次數(shù)，說明咖啡渣乙醇提取物具有潛在的抗老年癡呆作用。各供試藥組小鼠血清SOD、MDA含量與模型組無顯著差異，說明啡渣30EcT、60ECT、90ECT可能不是通過抗氧化作用產(chǎn)生抗老年癡呆作用。見表1，表2。

表2 咖啡渣對(duì)癡呆模型小鼠血清MDA含量、SOD活性影響±s,n=10)

3 討 論

鋁是公認(rèn)導(dǎo)致罹患老年癡呆的重要環(huán)境因素之一,Al3+促進(jìn)脂質(zhì)過氧化〔8〕，使SOD減少,增強(qiáng)鐵催化的活性氧類(ROS)自由基的生成和脂質(zhì)過氧化過程〔9〕,使神經(jīng)細(xì)胞膜損傷，促使β-淀粉蛋白(Aβ)聚合，抑制蛋白磷酸酯酶活性，促進(jìn)微管相關(guān)蛋白 (Tau)異常磷酸化，繼而促進(jìn)神經(jīng)元纖維纏結(jié)(NFT)的形成〔10〕。腹腔注射D-半乳糖經(jīng)小鼠代謝后產(chǎn)生O2-和H2O2，引起小鼠氧自由基損傷，導(dǎo)致AD模型形成。

本研究表明，咖啡渣的乙醇提取物具有增強(qiáng)AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，其中以30%乙醇提取物效果最好。本研究按文獻(xiàn)方法〔11〕測(cè)定癡呆模型小鼠血清中SOD、MDA含量，提示老年癡呆模型小鼠血清中MDA含量變化并不敏感，測(cè)定腦組織中SOD、MDA含量變化更能反映癡呆小鼠的過氧化產(chǎn)物代謝狀況。

4 參考文獻(xiàn)

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