鐘 越 齊 玲 楊寧江 任 曠 楊淑艷 趙東海 劉曉陽

(吉林醫(yī)藥學院科研學術(shù)處，吉林 吉林 132013)

越桔又稱藍莓，我國野生的篤斯越桔主要分布在吉林省長白山地區(qū)，因其富含原花青素(PC)而受到廣泛關(guān)注。大量的研究表明，PC具有抗腫瘤、抗衰老及增強免疫功能等多種藥理作用〔1～3〕。但關(guān)于越桔PC抗腫瘤的研究比較少，尤其是對腦膠質(zhì)瘤細胞的作用尚未見相關(guān)報道。本實驗研究越桔PC對膠質(zhì)瘤細胞株SHG-44細胞生長的作用。

1 材料與方法

1.1細胞和主要試劑 人腦SHG-44細胞株由吉林大學基礎(chǔ)醫(yī)學院提供。越桔PC購于南京蘇朗醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司；RPMI-1640培養(yǎng)液購自Hyclone公司；0.25%胰酶和小牛血清購自美國Gibco公司；二甲基亞楓(DMSO)和噻唑藍(MTT)均購自美國Sigma公司。

1.2SHG-44細胞的培養(yǎng) 自液氮罐中取出凍存的人腦SHG-44細胞，將其置于37℃水浴振蕩融解，再用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液混勻后置于25 cm2培養(yǎng)瓶中，在37℃、5%CO2及飽和濕度條件下進行培養(yǎng)，隔日換液一次。

1.3MTT檢測SHG-44細胞的生長情況 將對數(shù)生長期的SHG-44細胞制成單細胞懸液，以8 000個/孔密度接種于96孔板中，置于37℃、5% CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)過夜。次日加入越桔PC(5、10、20、40 μg/L，含5%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液為基礎(chǔ)培養(yǎng)液)，每個濃度設(shè)5個復孔，分別作用24、48、72 h時，并設(shè)空白對照組。終止反應(yīng)時，各孔再加入MTT 20 μl，繼續(xù)孵育4 h，棄上清，每孔加入DMSO 150 μl，振蕩后在全自動酶標儀上測定各孔490 nm 區(qū)的吸光度值。

2 結(jié) 果

5、10、20、40 μg/L越桔PC作用SHG-44細胞24、48、72 h時，均可明顯抑制膠質(zhì)瘤細胞的生長。10、20、40 μg/L各濃度越桔PC組在作用24、48、72 h時，細胞的生長均受到明顯的抑制，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)；5 μg/L濃度越桔PC組在作用72 h時，膠質(zhì)瘤細胞的生長亦明顯受到抑制，與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 越桔原花青素對SHG-44細胞生長的影響(n=5，±s)

3 討 論

神經(jīng)膠質(zhì)是腦腫瘤的最常見形式，以惡性居多〔4〕。一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，首先手術(shù)治療，術(shù)后可根據(jù)患者情況進行放、化療，結(jié)合最新的替莫唑胺療法，患者生存期的延長也不明顯〔5〕。中醫(yī)上對腦腫瘤的主要分型有痰濕內(nèi)阻型、氣滯血淤型、熱毒蘊結(jié)型、肝風內(nèi)動型、肝腎陰虛型、脾腎陽虛型。一般中醫(yī)治療腦腫瘤的中成藥、單方驗方都為合劑且只是對癥治療，但對于合劑中哪一種藥物發(fā)揮主要功效、作用機制并不清楚。有研究〔6～9〕表明，PC具有抗腫瘤作用，但對于野生的篤斯越桔的抗腫瘤作用還未見報道。綜上，越桔PC可以抑制腦膠質(zhì)瘤細胞的生長，但其抑制膠質(zhì)瘤細胞生長的機制，有待進一步探討。

4 參考文獻

1范紅艷，王艷春，任 曠，等.越桔原花青素對異丙腎上腺素誘導的大鼠心肌纖維化的抑制作用及機制〔J〕.中國中藥雜志，2012；37(3)：344-7.

2范紅艷，王艷春，任 曠，等.越桔原花青素對大鼠心肌纖維化作用的影響〔J〕.中國藥理學通報,2009;25(5)：626-30.

3Zhao BX，Sun YB，Wang SQ，etal.Grape seed procyanidin reversal of p-glycoprotein associated multi-drug resistance via down-regulation of NF-κB and MAPK/ERK mediated YB-1 activity in A2780/T cells〔J〕.PLoS One，2013;8(8)：e71071.

4Qi L，Bellail AC，Rossi MR，etal.Heterogeneity of primary glioblastoma cells in the expression of caspase-8 and the response to TRAIL-induced apoptosis〔J〕.Apoptosis，2011;16(11)：1150-64.

5Stupp R，Warren P，Martin J，etal.Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma〔J〕.N Engl J Med，2005;352(10)：987-96.

6Rao IJ，Yada H,Ono H，etal.Occurrence of antioxidant and radical scavenging proanthocyanidins from the Indian minor spic enagkesar(Mammea Iongitolia planch and trlanasyn)〔J〕.Bioorg Med Chemi，2004;12(1)：31-6.

7Meeran SM,Yada H,Ono H.Proanthocyanidins inhibit mitogenic and survival-signaing in vitro and tumor growth in vivo〔J〕.Front Biosci，2008;13(6)：887-97.

8Mantena SK，Katiyar SK.Grape seed proanthocyanidins inhibit UV-radiation-induced oxidative stress and activation of MAPK and NFkappa B signaling in human epidermal keratinocytes〔J〕.Free Radic Biol Med，2006;40(9)：1603-14.

9Sharma SD，Meeran SM，Katiyar SK.Dietary grape seed proanthocyanidins inhibit UVB-induced oxidative stress and activation of mitogen-activated protein kinases and nuclear factor-Kappa Bsignaling in vivo SKH-1 hairless mice〔J〕.Mol Cancer Ther，2007;6(3)：995-1005.