邢亞威 楊大運 劉春玉

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院感染性疾病科，河北 石家莊 050011)

炎癥性腸病(IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)。盡管多年來對IBD進行了大量的研究, 但其發(fā)病機制尚未完全明確。目前大多學(xué)者認為腸壁黏膜免疫調(diào)節(jié)異常、持續(xù)腸道感染、腸壁黏膜屏障缺損、遺傳和環(huán)境等因素共同參與該疾病的發(fā)生發(fā)展。其中細胞因子和炎癥介質(zhì)參與IBD的免疫反應(yīng)和炎癥過程，是近年來的研究熱點之一。本實驗通過測定炎癥性腸病患者腸黏膜可溶性髓系細胞表達觸發(fā)受體(sTREM)-1與環(huán)氧化酶-2(COX-2)水平的表達并觀察與疾病活動度的關(guān)系，探討兩者在IBD發(fā)病機制中的作用，為臨床治療及研究提供一些思路。

1 材料與方法

1.1研究對象 選擇2010年1月至2011年2月我院門診及住院治療的50例IBD患者，其中UC患者42例，CD患者8例。所有病例均經(jīng)臨床、內(nèi)鏡及組織病理學(xué)檢查，符合2007年濟南會議消化病學(xué)分會炎癥性腸病協(xié)作組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔1〕。UC病人根據(jù)患者病情進行分級：輕度 15例，中度20例，重度7例。CD患者8例。正常對照組20例，為結(jié)腸息肉或體檢者。

1.2標(biāo)本采集 IBD患者在行結(jié)腸鏡檢查時，取其病變明顯處組織2～3塊，對照組選距息肉10 cm處取活檢，或體檢處正常組織。

1.3COX-2及sTREM-1的測定

1.3.1sTREM-1采用流式細胞計數(shù) 試劑購自美國Santa Cruz Biotechnology公司(克隆號98z12,lot#B1210)。流式細胞儀檢測條件及參數(shù)：采用美國Beckman Coulter公司生產(chǎn)的Epics-XLⅡ型流式細胞儀，激發(fā)光源為15 mW氬離子激光器，激發(fā)波長為488 nm，應(yīng)用Expo 32 ADC進行免疫熒光數(shù)據(jù)分析。檢測前以flow-checkTMFluorpheres(10 μm)熒光微球(REF 6605359.Beckman Coulter,Inc.Fullerton,CA 92835.)作為標(biāo)準(zhǔn)樣品調(diào)整儀器CV值在2%以內(nèi)。以x-mode值代表TREM-1蛋白表達量。

1.3.2COX-2表達檢測 COX-2切片除作常規(guī)HE染色外，余作免疫組化染色，即石蠟切片脫蠟水化，采用枸櫞酸-微波-SP法，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，具體操作按SP試劑盒說明書進行。用PBS替代一抗作為陰性對照，余步驟相同。兔抗人COX-2多克隆抗體均購自武漢博士德生物工程公司，抗體工作濃度為1∶50。 S-P試劑盒為美國MAXIM公司產(chǎn)品，購自福州邁新公司。染色結(jié)果判斷： COX-2蛋白以細胞質(zhì)或核膜上出現(xiàn)棕黃色為陽性細胞。每張切片在400倍顯微鏡下隨機選定10個視野，采用全自動圖像分析儀，HPIAS-2000圖像分析軟件，分別掃描記錄陽性細胞表達百分數(shù)，取其平均數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1不同組別腸黏膜組織COX-2及sTREM-1 在正常對照組、CO和UC中COX-2的結(jié)果分別為61.81±20.10，200.42±20.33和209.28±9.62，sTREM-1的結(jié)果分別為268.94±4.75、541.48±153.63 和487.54±141.59；sTREM-1和COX-2在CD組、UC組及正常對照組三組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=8.584，P<0.05；F=147.714，P<0.05)；任何兩組之間sTREM-1的表達差別有顯著性意義(P<0.05)，正常對照組與CD組、UC組相比COX-2的表達有顯著性差異(P<0.05)。

2.2不同組別sTREM-1、COX-2的表達與病情及內(nèi)鏡分級的關(guān)系 UC患者sTREM-1在不同的病情分級及不同內(nèi)鏡分級中表達有顯著性差異(F=19.055，P<0.05；F=34.119，P<0.05)，COX-2在不同的病情分級及不同內(nèi)鏡分級中表達亦有顯著性差異(F=54.617，P<0.05；F=58.608,P<0.05)。見表1。

表1 UC患者病情、內(nèi)鏡分級與sTREM-1和COX-2的表達比較±s)

2.3sTREM-1與COX-2表達的相關(guān)性 結(jié)腸黏膜sTREM-1和COX-2的表達呈正相關(guān)(r=0.642,P<0.05)。sTREM-1的表達水平與患者病情程度及內(nèi)鏡分級呈正相關(guān)(r=0.945,P<0.05；r=0.944,P<0.05)；COX-2的表達水平與患者病情程度及內(nèi)鏡分級亦呈正相關(guān)(r=0.944,P<0.05；r=0.944,P<0.05)。

3 討 論

IBD是一種病因尚不明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括UC和CD。目前認為其發(fā)病機制除與環(huán)境、遺傳因素的變化有關(guān)外，亦與腸黏膜免疫調(diào)節(jié)異常，持續(xù)腸道感染，免疫應(yīng)答及炎癥因子的改變有關(guān)。

髓樣細胞觸發(fā)受體是一種新型的炎癥激發(fā)受體，其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在炎癥反應(yīng)的發(fā)生和級聯(lián)放大中起重要作用。sTREM-1是TREM-1的可溶形式。有研究表明〔2〕TREM-1參與了炎性反應(yīng)的級聯(lián)放大過程，細菌的某些成分可以上調(diào)細胞表面TREM-1的表達，并且能和TREM-1配體協(xié)同激活TREM-1受體向下游傳遞信號，TREM-1被激活后會誘導(dǎo)前炎性因子的產(chǎn)生并引起相關(guān)的炎癥反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)sTREM-1在CD組、UC組的表達明顯高于對照組。sTREM-1在UC組的表達與病情的嚴(yán)重程度及內(nèi)鏡分級程度明顯相關(guān)，這與Tzivras 等〔3〕的報道一致。Park等〔4〕研究亦表明，在UC患者中，其血清sTREM-1-表達增高，且腸黏膜巨噬細胞表面sTREM-1表達增高的程度與疾病的活動程度呈正相關(guān)。以上結(jié)果說明，sTREM-1可能在患者的病情中起到重要作用。同時證明sTREM-1可作為判斷UC病情進程的輔助指標(biāo)。

目前認為COX-2屬誘導(dǎo)型酶，在炎癥狀態(tài)下，可以被多種炎性遞質(zhì)和細胞因子所誘導(dǎo)。本研究發(fā)現(xiàn)UC、CD患者結(jié)腸黏膜中COX-2的表達較對照組顯著增高；UC患者COX-2的表達與病情嚴(yán)重程度及內(nèi)鏡分級有關(guān)。這與國內(nèi)的一些研究結(jié)果一致〔5～7〕，這些結(jié)果表明COX-2作為重要的炎癥介質(zhì)參與IBD的發(fā)生和發(fā)展。但是COX-2陽性表達在腸黏膜中的作用觀點不同，COX-2的表達是炎癥過程中非特異性產(chǎn)物抑或是參與炎癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因子，目前尚無定論。

4 參考文獻

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4Park JJ, Cheon JH, Kim BR,etal.Correlation of serum-soluble triggering receptor expressed on myeloid cells-1 with clinical disease activity in inflammatory bowel disease〔J〕.Dig Dis Sci,2009; 54(7):1525-31.

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