胡 玲，秦江霞，王天紅，陳敦金 (.廣東省廣州市花都區(qū)胡忠醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 50800;.廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 50000)

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的半數(shù)以上。我國(guó)每年有10萬(wàn)左右的新發(fā)病例，約占世界總數(shù)的1/4［1］。多數(shù)宮頸癌患者就診時(shí)已達(dá)中晚期，化療成為其重要輔助治療方法，但患者大多同時(shí)合并營(yíng)養(yǎng)不良、低蛋白血癥及免疫功能低下，限制了化療的順利進(jìn)行。生長(zhǎng)激素(Growth hormone，GH)通過(guò)GHR產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。臨床上己證實(shí)重組人生長(zhǎng)激素(Recombinant human growth hormone，rh-GH)能促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、糾正負(fù)氮平衡、促進(jìn)傷口愈合及提高機(jī)體免疫功能［2－5］。但rhGH能否應(yīng)用于惡性腫瘤患者還存在爭(zhēng)議，值得進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、不同分化程度的宮頸癌組織及其癌旁正常組織中GHR的表達(dá)情況，探討其在宮頸癌組織中表達(dá)規(guī)律，為臨床宮頸癌患者術(shù)后合理應(yīng)用rhGH提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料：隨機(jī)抽取2000年1月～2009年1月我院及廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院手術(shù)及門(mén)診活檢宮頸標(biāo)本120例，患者年齡40～65歲，平均50.2歲。其中宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變30例(Ⅰ級(jí)7例，Ⅱ級(jí)10例，Ⅲ級(jí)13例)，宮頸鱗癌60例。臨床分期采用國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2000年修訂的臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期16例，Ⅱ期21例，Ⅲ期23例，其中44例做盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)，發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例;高分化25例，中分化20例，未分化15例。另取同批患者癌旁正常宮頸組織30例作對(duì)照所有取材的標(biāo)本均經(jīng)過(guò)病理診斷證實(shí)為宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變或癌旁正常宮頸組織，術(shù)前均未接受過(guò)放療及化療。

1.2 方法：所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)病理切片。免疫組化采用鏈霉素抗生物素蛋白－過(guò)氧化物酶(SP)法檢測(cè)GHR的表達(dá)。鼠抗人GHR單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)serotee公司，具體步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，陽(yáng)性片由英國(guó)serotee公司提供，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。判斷標(biāo)準(zhǔn)：GHR陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞膜、細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽(yáng)性染色。400倍光鏡下觀察，每片隨機(jī)取5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性與陰性細(xì)胞數(shù)，最后計(jì)算陽(yáng)性百分率。細(xì)胞陽(yáng)性染色≤10%為陰性表達(dá)，染色＞10%為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GHR在不同宮頸組織中的表達(dá)情況：GHR在癌旁正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及宮頸癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率逐漸增高，分別為40.0%、46.7%、70.0%。宮頸癌組織中GHR陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和癌旁正常宮頸組織(P＜0.05)，但后兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1和圖1～3。

表1 GHR在正常癌旁組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及宮頸癌組織中的表達(dá)

圖1 GHR在正常癌旁組織組織的表達(dá)(SP法×400)

圖2 GHR在CIN組織的表達(dá)(SP法×400)

圖3 GHR在宮頸癌組織的表達(dá)(SP法×400)

2.2 GHR在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系：GHR在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P＜0.05);與腫瘤浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)(P＞0.05)，見(jiàn)表2。

表2 GHR在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討論

多數(shù)宮頸癌患者就診時(shí)已達(dá)中晚期，化療成為其重要輔助治療方法，傳統(tǒng)化療藥物以細(xì)胞毒性藥物為主，其治療指數(shù)狹小，毒副反應(yīng)大，對(duì)正常組織細(xì)胞、臟器的生理功能有一定的破壞作用，并抑制機(jī)體免疫功能和骨髓造血功能等，常導(dǎo)致患者無(wú)法順利完成化療。因此進(jìn)一步探索研究如何降低化療藥物毒副反應(yīng)是癌癥治療的重要課題。生長(zhǎng)激素通過(guò)生長(zhǎng)激素受體發(fā)揮生理作用，具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，維持氮平衡;能增加脂肪氧化分解和糖異生，提高提高機(jī)體免疫力等功能。人生長(zhǎng)激素受體分子是一個(gè)含620個(gè)氨基酸的單糖蛋白，分子量為70KD，位于細(xì)胞膜表面。重組人生長(zhǎng)激素是人工合成的生長(zhǎng)激素，理論上生長(zhǎng)激素具有潛在的促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)作用，故對(duì)腫瘤患者應(yīng)用rhGH的安全性存在爭(zhēng)議。研究表明，在正常組織和腫瘤組織中，GHR的表達(dá)存在著不同程度的異常，這些異常和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移都有著密切的關(guān)系［6］。有報(bào)道，GH缺乏能抵抗化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)的乳腺癌，但輸注GH后能促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞再生和腺泡發(fā)育［7］。另一方面，體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GH對(duì)人結(jié)腸、胃、肺、乳腺、卵巢、前列腺癌和黑色素瘤細(xì)胞沒(méi)有顯著的促增殖分裂作用［8］。宮頸細(xì)胞在其癌變過(guò)程中，生物學(xué)特性發(fā)生變化的同時(shí)，GHR是否依然存在和表達(dá)情況如何未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。從本組試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，宮頸癌組織GHR的表達(dá)水平比宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織及正常宮頸組織明顯增高(P＜0.05)，說(shuō)明GHR的表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著非常重要的作用。TNM分期越高，GHR的表達(dá)水平越高，三者間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);未分化患者的GHR的表達(dá)最高，高分化、中分化患者中的GHR的表達(dá)率低，三組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示GHR的表達(dá)與宮頸癌的進(jìn)展密切相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的GHR的表達(dá)率較未轉(zhuǎn)移者明顯增高(P＜0.05)，說(shuō)明GHR表達(dá)與宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此檢測(cè)腫瘤組織中GHR的表達(dá)，對(duì)了解腫瘤的侵襲、淋巴轉(zhuǎn)移等病情進(jìn)展、指導(dǎo)選擇治療方案以及預(yù)測(cè)預(yù)后有重要作用。生長(zhǎng)激素受體拮抗劑培維索孟其通過(guò)阻止生長(zhǎng)激素與生長(zhǎng)激素受體結(jié)合，阻止信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，達(dá)到治療目的，已被廣泛應(yīng)用于垂體腺瘤。本研究中發(fā)現(xiàn)GHR在宮頸癌中表達(dá)率較高，針對(duì)GHR為靶向治療是否也同樣可以用于宮頸癌的治療，值得進(jìn)一步研究。

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