袁 帥，潘夢音，馮凱祥，景東帥，謝明紅，李世朋，韓洪波

腎透明細胞癌中KISS-1、VEGF的表達及其臨床意義

袁 帥1，潘夢音1，馮凱祥1，景東帥1，謝明紅1，李世朋2，韓洪波1

目的探討腫瘤抑制因子KISS-1蛋白和血管內(nèi)皮生長因子VEGF在腎透明細胞癌組織中的表達及臨床意義。方法采用免疫組織化學法檢測31例腎透明細胞癌組織和15例正常腎組織中KISS-1蛋白和VEGF的表達。結果在腎透明細胞癌組織和正常腎組織中KISS-1蛋白陽性表達率分別為29.0%和60.0%，差異有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；在腎透明細胞癌組織和正常腎組織中VEGF陽性表達率分別為80.6%和46.7%，差異有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；兩者的表達均與腎透明細胞癌不同分化程度、分期、浸潤和轉(zhuǎn)移有關(P﹤0.05)；腎透明細胞癌中KISS-1、VEGF的表達呈顯著負相關(r=-5.086，P﹤0.05)。結論KISS-1蛋白低表達與VEGF高表達可能與腎透明細胞癌的發(fā)生及浸潤轉(zhuǎn)移有密切關系。

KISS-1；VEGF；腎透明細胞癌；蛋白表達

腎透明細胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)是腎細胞癌最常見的病理類型，占75%～80%[1-3]。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因由于僅抑制腫瘤轉(zhuǎn)移而不影響原發(fā)腫瘤的生長而得名，KISS-1基因是其中之一。研究發(fā)現(xiàn)KISS-1基因的高表達與食管癌[4]等惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移呈負相關，但它與腎透明細胞癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的關系少有報道。VEGF可分別與表達在自身及血管內(nèi)皮細胞上的受體結合，促進腫瘤細胞生長及新血管形成。本文采用免疫組化法對KISS-1蛋白和VEGF在腎透明細胞癌中的表達情況進行觀察，并探討KISS-1蛋白和VEGF與腎透明細胞癌擴散、侵襲和預后的關系。

1 資料與方法

1.1標本來源收集河南科技大學第一附屬醫(yī)院2010年10月～2013年6月行根治性腎切除術的ccRCC組織標本31例，術后經(jīng)病理檢查確診為ccRCC，并取15例正常腎組織作為對照。術前均未接受過化療、放療和免疫治療，手術標本取材后經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2主要試劑與設備KISS-1兔抗人抗體(稀釋濃度1∶150)，VEGF兔抗人抗體(稀釋濃度1∶200)，二步法免疫組化試劑盒(SP-0023)產(chǎn)自美國ZYMED公司均購自北京博奧森生物技術有限公司；DAB顯色試劑盒(AR-0612)購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司；其他試劑均為分析純。

1.3方法免疫組化測KISS-1與VEGF的表達。石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，微波爐法抗原修復，滴加抗體，DAB顯色顯微鏡下觀察，自來水終止，蘇木素復染2 min，鹽酸乙醇分化10 s，自來水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片，顯微鏡下觀察結果。

1.4結果判斷選用試劑盒中的陽性片作為陽性對照，PBS取代一抗作為陰性對照。KISS-1蛋白，VEGF可以表達于細胞質(zhì)和(或)細胞膜，染色呈棕黃色視為陽性。陽性細胞數(shù)為0%～10%為0分(-)，陽性細胞數(shù)大于10%～25%為1分(+)，陽性細胞數(shù)大于25%～50%為2分(++)，陽性細胞數(shù)大于50%～75%為3分(+++)，陽性細胞數(shù)大于75%為4分。0～3分為表達陰性，≥3分為表達陽性[5]。

1.5統(tǒng)計學處理SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。樣本率的比較采用χ2檢驗，以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

KISS-1蛋白染色主要存在于細胞質(zhì)中。在正常腎的細胞質(zhì)中可見大量棕黃色染色，在腎透明細胞癌的癌細胞中呈弱陽性表達。腎透明細胞癌組織和正常腎組織中KISS-1蛋白表達率分別為29.0%(22/31)和60.0%(9/15)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.070，P﹤0.05)。VEGF染色主要存在于細胞質(zhì)和細胞膜中。在正常腎組織中呈弱陽性表達，在腎透明細胞癌組織中可見大量棕黃色染色。腎透明細胞癌組織和正常腎組織中VEGF表達率分別為80.6%(25∕31)和46.7%(7/15)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.512，P﹤0.05)，見表1、表2。低未分化，Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結轉(zhuǎn)移的腎透明細胞癌組織中KISS-1 的表達水平分別比高中分化、Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結轉(zhuǎn)移的低；而低未分化，Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結轉(zhuǎn)移的腎透明細胞癌組織中VEGF的表達水平分別比高中分化、Ⅰ～Ⅱ期和無淋巴結轉(zhuǎn)移的高，見表3。KISS-1蛋白和VEGF在腎透明細胞癌表達中KISS-1與VEGF雙陽性4例，雙陰性1例，KISS陰性VEGF陰性5例，KISS陰性VEGF陽性21例。采用Spearman 相關檢驗計算相關系數(shù)r=-5.086，P﹤0.05，表明兩種蛋白在腎透明細胞癌中的表達存在負相關性。

表1 KISS-1蛋白在不同腎組織中的表達

兩組相比χ2=4.070，P=0.044。

表2 VEGF在不同腎組織中的表達

兩組相比χ2=5.512，P=0.019。

表3 腎透明細胞癌中KISS-1蛋白和VEGF表達與臨床病理學參數(shù)的關系

3 討論

腎透明細胞癌是泌尿系統(tǒng)中常見的腫瘤之一。腎透明細胞癌的治療以手術根治性切除為主要方法，放療及化療效果欠佳，免疫治療效果不明確。因此，迫切需要發(fā)現(xiàn)特異、敏感的早期診斷、鑒別診斷和預后評估的因子。KISS-1基因由是在人類黑色素細胞株中發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。它對人類腫瘤轉(zhuǎn)移有抑制作用，能夠調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生長信號[6]，對腫瘤的生物行為有潛在的作用。KISS-1表達的降低或缺失與腫瘤進展和臨床病理學分期等聯(lián)系緊密，而且對腫瘤患者的預后有前瞻性的價值。通過對它進一步的研究，將可能有助于為人類腫瘤的早期診斷、合理治療和預防轉(zhuǎn)移提供線索和依據(jù)。相關研究發(fā)現(xiàn)，在人體多種惡性腫瘤(胃癌[7]、胰腺癌[8])中存在KISS-1基因表達降低、缺失，其表達水平的下降與惡性腫瘤的進展、侵襲轉(zhuǎn)移及預后密切相關，高水平表達者進展慢、不易發(fā)生淋巴結及遠處器官轉(zhuǎn)移，預后好。本研究結果表明，在腎透明細胞癌組織中KISS-1蛋白表達與正常腎組織相比明顯減少，在低未分化腎透明細胞癌表達較少，隨著病理分級增高表達水平降低，且有淋巴結轉(zhuǎn)移腎透明細胞癌中的陽性率明顯低于無淋巴結轉(zhuǎn)移者。作者推測KISS-1蛋白表達減少，可能與癌細胞異常的增殖及癌細胞遷移有關，并可能參與了癌細胞的浸潤與轉(zhuǎn)移。

VEGF可分別與表達在自身及血管內(nèi)皮細胞上的受體結合，促進腫瘤細胞生長及新血管形成，這兩方面相輔相成，為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移提供重要的條件[9]。腫瘤細胞增殖能力強可促進腫瘤體積增大，且分期分級隨著增高，侵襲轉(zhuǎn)移能力也相應增強。新血管的形成為腫瘤提供充足的營養(yǎng)，同時脫落的腫瘤細胞可以通過血液途徑種植到其他部位發(fā)生轉(zhuǎn)移，為腫瘤轉(zhuǎn)移提供可能。本研究表明，在正常腎組織中VEGF呈弱陽性表達，而腎透明細胞癌組織中其表達上調(diào)，低未分化腎透明細胞癌中的陽性率明顯高于高中分化者，Ⅲ～Ⅳ期腎透明細胞癌組織中的表達水平比Ⅰ～Ⅱ期高，且有淋巴結轉(zhuǎn)移腎透明細胞癌中的陽性率表達較高。這提示VEGF在腎透明細胞癌組織中的高表達可能與癌細胞向周圍組織的浸潤、遷移有密切關系，并為癌細胞轉(zhuǎn)移奠定基礎。

本文采用配對資料的檢驗計算相關系數(shù)r=-5.085，P﹤0.05。表明KISS-1和VEGF在腎透明細胞癌組織中的表達呈負相關。因此作者推測KISS-1蛋白表達下調(diào)和VEGF表達增高在腎透明細胞癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程中存在拮抗作用。并為腎透明細胞癌機制及可行治療措施的探索研究提供了實驗基礎及理論依據(jù)。

[1]Terrone C，Volpe A．Can emerging level 1 evidence “discourage” elective nephron-sparing surgery for small renal tumors[J]．Eur Urol，201l，59：553-555．

[2]Bukowski RM．Prognostic factors for survival in metastatic renal cell carcinoma：update 2008[J]．Cancer，2009，115：2273-2281．

[3]Yan BC，Maekinnon AC，Al-Ahmadie HA．Recent developments in the pathology of renal tumors：morphology and molecular characteristics of select entities[J]．Arch Pathol Lab Med， 2009，133：1026-1032．

[4]Ikeguchi M，Yamaguchi K，Kaibara N．Clinical significance of the loss of KiSS-1 and orphan G-protein-coupledn receptor(hOT7T175) gene expression in esophageal squamous cell carcinoma[J]．Clin Cancer Res，2004，10(4)：1379-1383．

[5]Rosivatz E，Beker I，Specht K，et a1．Differential expression of the epithelial-mesenchymal transition regulators snail，SIP1，and twist in gastric cancer[J]．Am J Surg Pathol，2002，16l：188l-1891．

[6]West A，Vojta PJ，Welch DR，et a1．Chromosome localization and genomic structure of the KiSS-1 metastasis suppressor gene(KISS1)[J]．Genomics，1998，54(1)：145-148．

[7]Ringel MD，Hardy E，Bemet VJ，et al．Metastin Receptor is over expressed in papillary thyroid cancer and activates MAP kinase in thyroid cancer cells[J]．J Clin Endocrinol Metab，2002，87(5)：2399．

[8]劉源，姜濤.腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1在胰腺癌組織中的表達及意義[J]．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2008，16：777-779．

[9]Guo YP，Wang SH，Hoot DR，et a1．Clinical suppression of VEGF-mediated autocrine and paraerine interactions between prostate cancer cells and vascular endothelial cells by soy isoflavones[J]．J Nutri Biochem，2007，18(6)：408-417．

KISS-1andVEGFExpressioninRenalClearCellCarcinomaandItsClinicalSignificance

YUAN Shuai,PAN Meng-yin,FENG Kai-xiang,et al

(Medical College,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo investigate the expressions and significances of KISS-1 and VEGF in renal clear cell carcinoma tissues and its clinical significance.MethodsImmunohistochemical detection of 31 cases of renal clear cell carcinoma and 15 patients with normal kidney tissue and protein KISS-1 and VEGF expression.ResultsIn renal clear cell carcinoma and expression of KISS-1 protein in renal tissues of normal positive rate were 29% and 60%,a statistically significant difference(P<0.05);in renal clear cell carcinoma and normal kidney tissue VEGF expression in 80.6% and 46.7%,respectively,a statistically significant difference(P<0.05);low undifferentiated,Ⅲ～Ⅳ and lymph node metastasis in human renal clear cell carcinoma of the KISS-1 expression of differentiation than high schools,respectively,secondary and no lymph node metastasis of Ⅰ～Ⅱ low and undifferentiated,phase Ⅲ～Ⅳ renal clear cell carcinoma and lymph node metastasis in the differentiation of VEGF expression level than high schools,respectively,secondary and no lymph node metastasis of I～high.And both expressions are a significant negative correlation (r=-5.086,P<0.05).Conclusionabnormal expression of KISS-1 protein,VEGF may be associated with renal clear cell carcinoma and closely related to invasion and metastasis.

KISS-1；VEGF；Clear cell renal cell carcinoma

河南科技大學大學生訓練計劃(SRTP)項目(2012186)

2014-07-06

1.河南科技大學醫(yī)學院，河南洛陽 471003 2.天津醫(yī)科大學一中心臨床學院，天津 300192

袁帥(1991-)，男，四川廣元人，從事腫瘤研究工作。

韓紅波，男，講師，E-mail：295157120@qq.com

R737.11

A

1672-688X(2014)03-0167-03