李雪明，吳建賢

TNF-α在痙攣型腦癱中的異常表達(dá)

李雪明，吳建賢

選取痙攣型腦癱患兒及正常兒童共82例，其中小齡［1～3（1.9±0.6）歲］患兒和大齡［3～12（5.5±1.9）歲］患兒各27例（觀察組），小齡［1～3（2.2±0.6）歲］和大齡［3～12（6.9±2.7）歲］正常兒童各14例（對(duì)照組）。采用ELISA法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子α（TNF－α）水平。結(jié)果顯示小齡及大齡痙攣型腦癱兒童血清TNF－α水平均較相應(yīng)年齡正常兒童升高（P＜0.01）;小齡痙攣型腦癱兒童血清TNF－α水平較大齡痙攣型腦癱兒童血清TNF－α水平升高（P＜0.01），而對(duì)照組內(nèi)正常兒童的不同年齡段的血清TNF－α水平無明顯差異;痙攣型腦性癱瘓患兒血清TNF－α水平較正常兒童增高（P＜0.01）;TNF－α在痙攣型腦性癱瘓患兒體內(nèi)持續(xù)過度表達(dá)，參與腦性癱瘓的后續(xù)腦損傷。

腦性癱瘓;免疫因子;腫瘤壞死因子α

吳建賢，女，主任醫(yī)師，副教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E－mail:ay2fyjianxianwu@126.com

腦性癱瘓是自受孕開始至嬰兒期非進(jìn)行性腦損傷和發(fā)育缺陷所導(dǎo)致的綜合征，主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)障礙及姿勢(shì)異常［1］，是造成兒童殘疾的重要原因之一。但近年來，有研究［2］提示腦癱患兒體內(nèi)存在免疫功能異常，并指出腦癱患兒的腦損傷并非靜止，其腦組織內(nèi)的異常炎癥反應(yīng)可持續(xù)存在，并影響大腦功能重建。該研究通過觀察不同年齡組痙攣型腦性癱瘓患兒及相應(yīng)年齡組的正常兒童血清中腫瘤壞死因子 α （tumor necrosis factor－alpha，TNF－α）的含量，探討痙攣型腦性癱瘓兒童腦組織內(nèi)炎癥因子是否持續(xù)表達(dá)。

1 材料與方法

1.1 病例資料

1.1.1 觀察組納入標(biāo)準(zhǔn) 診斷標(biāo)準(zhǔn)符合以下條件:2006年在長沙召開的我國第二屆全國兒童康復(fù)、第九屆中國小兒腦癱康復(fù)學(xué)術(shù)會(huì)議討論通過的腦性癱瘓的定義、分型及診斷條件;痙攣型腦性癱瘓;1歲＜年齡＜12歲;生命體征穩(wěn)定;患兒家長均簽署知情同意書。

1.1.2 觀察組排除標(biāo)準(zhǔn) 凡合并有以下任何一項(xiàng)者，則不能成為本研究的對(duì)象:非腦癱疾病引起的運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩，如進(jìn)行性肌萎縮癥、腦脊髓炎、重癥營養(yǎng)不良、重癥肌無力、聽覺/視覺、癲癇、嚴(yán)重的小兒科其他疾患;近2個(gè)月內(nèi)有發(fā)燒病史;有其他內(nèi)分泌、代謝性、自身免疫性及遺傳性疾病。

1.1.3 對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn) 無腦癱病史;發(fā)育及運(yùn)動(dòng)功能正常;無異常肌張力;近2個(gè)月內(nèi)無發(fā)燒病史。

1.1.4 對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn) 符合觀察組的納入標(biāo)準(zhǔn)患兒;有內(nèi)分泌、自身免疫性、代謝性及遺傳性疾病。

1.2 一般資料

1.2.1 觀察組 選擇2012年12月～2013年8月在安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院康復(fù)科及安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立兒童醫(yī)院康復(fù)科住院治療的54例痙攣型腦癱患兒為觀察組，其中1～3（1.9±0.6）歲腦癱患兒27例，男17例，女10例，作為小齡觀察組;3～12（5.5±1.9）歲腦癱患兒27例，男15例，女12例，作為大齡觀察組。

1.2.2 對(duì)照組 選擇同時(shí)期體檢正常兒童28例作為對(duì)照組，其中1～3（2.2±0.6）歲14例，男7例，女7例，為小齡對(duì)照組;3～12（6.9±2.7）歲14例，男8例，女6例，為大齡對(duì)照組。對(duì)各組受試者之間年齡、體重、身高及性別等臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，表1。

表1 觀察組與對(duì)照組一般資料比較（±s）

表1 觀察組與對(duì)照組一般資料比較（±s）

組別 n 性別男 女年齡（歲） 身高（cm） 體重（kg）大齡觀察27 15 12 5.5±1.9 110.61±11.87 19.73±5.49大齡對(duì)照 14 8 6 6.9±2.7 119.83±17.05 24.31±8.61小齡觀察 27 17 10 1.9±0.6 84.73±10.17 12.56±2.75小齡對(duì)照14 7 7 2.2±0.6 90.74±8.97 14.06±2.89

1.3 標(biāo)本采集與檢測(cè) 用肝素鈉抗凝采血管采集觀察組及對(duì)照組兒童靜脈血3 ml，以3 000 r/min離心5 min。離心后取血清，按1次用量分裝，于－30℃保存?zhèn)錅y(cè)，避免反復(fù)凍融。使用ELISA法檢測(cè)血清TNF－α濃度，試劑盒購自德國bender公司，操作由專人并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)以±s表示，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

由表2顯示:①大齡及小齡觀察組血清TNF－α明顯高于相應(yīng)對(duì)照組（P＜0.01）;② 觀察組內(nèi)小齡腦癱兒童血清TNF－α較大齡兒童血清TNF－α水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而正常兒童的不同年齡段的血清TNF－α水平無明顯差異。③ 觀察組全組即腦性癱瘓患兒血清TNF－α水平較對(duì)照組全組正常兒童增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表2 觀察組和對(duì)照組組間及組內(nèi)TNF-α水平比較（ng/L，±s）

表2 觀察組和對(duì)照組組間及組內(nèi)TNF-α水平比較（ng/L，±s）

與觀察組比較:＊＊P＜0.01;與大齡觀察組比較:△P＜0.05;全組c表示觀察組全組或者對(duì)照組全組

項(xiàng)目 n 觀察組 對(duì)照組大齡組 54 17.83±5.18 11.03±4.94＊＊小齡組 28 24.99±4.91△ 11.39±3.36＊＊全組c 82 21.42±6.17 11.21±4.11＊＊

3 討論

在初次腦損傷后腦癱患兒體內(nèi)可能存在一種異常的持續(xù)激活機(jī)制，導(dǎo)致少突膠質(zhì)細(xì)胞成熟障礙、神經(jīng)元及軸突再生受限、神經(jīng)突觸形成受損等病理變化，從而阻礙大腦功能重建［3］。研究［2，4］表明腦癱患兒血清TNF－α水平高于健康兒童，但也有學(xué)者［5］指出新生兒臍血炎癥因子中TNF－α對(duì)腦癱發(fā)生的預(yù)測(cè)沒有意義。本研究顯示觀察組全組血清TNF－α水平高于對(duì)照組全組，表示痙攣型腦癱體內(nèi)存在異常免疫。TNF－α增高可能與外周單核細(xì)胞分泌增多有關(guān)，而單核細(xì)胞在此前已被證實(shí)參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病如腦白質(zhì)軟化癥及自閉癥的病理變化［6－7］。但本試驗(yàn)中腦癱患兒血清TNF－α水平偏低，因本研究在設(shè)計(jì)階段考慮到TNF－α缺乏特異性，故在選擇患兒時(shí)嚴(yán)格控制入選標(biāo)準(zhǔn)，如2個(gè)月內(nèi)無畏寒發(fā)熱、無癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)疾病及其他炎癥性疾病，可能是導(dǎo)致本研究TNF－α檢測(cè)水平偏低的原因之一。

研究［8－9］顯示中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷過程產(chǎn)生的TNF－α通過作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞而致血管通透性增加或者腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。不僅如此，TNF－α過量表達(dá)引起血腦屏障功能紊亂以及腦水腫的研究也有報(bào)道［10］。有研究［11］顯示 TNF－α 可抑制少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞的分化，從而產(chǎn)生腦白質(zhì)損傷。圍生期及產(chǎn)后出現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)炎癥可改變大腦的可塑性，但是新生兒時(shí)期的炎癥反應(yīng)是否在腦癱體內(nèi)長期存在仍未有定論。該研究顯示觀察組組內(nèi)小齡觀察組血清TNF－α水平高于大齡觀察組，且兩組TNF－α水平均高于相應(yīng)對(duì)照組，支持腦性癱瘓患兒的免疫異常持續(xù)存在，也間接反映TNF－α對(duì)腦癱兒童的腦損傷并沒有在短時(shí)間內(nèi)消失。故腦癱兒童免疫異常的治療可能是腦癱的防治新方向。該研究中最大的腦癱患兒為12歲，提示這種腦損傷至少持續(xù)12年。

該研究顯示小齡痙攣型腦性癱瘓患兒血清TNF－α水平較大齡痙攣型腦癱患兒TNF－α水平明顯升高，表明隨著年齡升高，血清中TNF－α水平逐漸降低。這種現(xiàn)象提示腦癱兒童體內(nèi)的免疫異?？赡茈S著年齡的增長逐漸減弱，表明患兒的免疫治療具有時(shí)限性，具體的治療窗有待進(jìn)一步研究。在臨床過程中腦性癱瘓患兒的功能障礙會(huì)隨著時(shí)間的延長而愈發(fā)嚴(yán)重，這提示愈早期的免疫治療可能會(huì)對(duì)腦性癱瘓患兒的功能改善愈有益，并與臨床中腦癱兒童康復(fù)介入越早效果越好的原則一致。

該研究中僅對(duì)不同年齡組的痙攣型患兒血清TNF－α進(jìn)行對(duì)比分析，如能對(duì)小齡痙攣型腦癱患兒進(jìn)行長期隨訪研究，則將更有利于了解腦癱患兒體內(nèi)TNF－α的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)一步明確腦癱患兒體內(nèi)的持續(xù)激活機(jī)制。另一方面，早期對(duì)腦癱患兒運(yùn)用相應(yīng)藥物進(jìn)行免疫治療是否對(duì)腦損傷有幫助仍需要深入的研究，為腦癱的早期治療及預(yù)防提供臨床指導(dǎo)。

［1］陳秀潔.小兒腦性癱瘓的定義、分型和診斷條件［J］.中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志，2007，29（5）:309.

［2］Lin C Y，Chang Y C，Wang S T，et al.Altered inflammatory responses in preterm children with cerebral palsy［J］.Ann neurol，2010，68（2）:204－12.

［3］Favrais G，Van De Looij Y，F(xiàn)leiss B，et al.Systemic inflammation disrupts the developmental program of white matter［J］.Ann Neurol，2011，70（4）:550－65.

［4］袁記霞.高壓氧治療對(duì)腦性癱瘓兒童血清白細(xì)胞介素6和腫瘤壞死因子水平的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合兒科學(xué)，2011，3（6）:536－7.

［5］Kaukola T，Kallankari H，Tuimala J，et al.Perinatal immunoproteins predict the risk of cerebral palsy in preterm children［J］.Ann Med，2013，45（1）:57－65.

［6］Jyonouchi H，Geng L，Streck D L，et al.Immunological characterization and transcription profiling of peripheral blood（PB）monocytes in children with autism spectrum disorders（ASD）and specific polysaccharide antibody deficiency（SPAD）:case study［J］.J Neuroinflammation，2012，9:4.

［7］Kapitanovi'cVidak H，Catela Ivkovi'c T，Joki'c M，et al.The association between proinflammatory cytokine polymorphisms and cerebral palsy in very preterm infants［J］.Cytokine，2012，58（1）:57－64.

［8］Welser J V，Li L，Milner R.Microglial activation state exerts a biphasic influence on brain endothelial cell proliferation by regulating the balance of TNF and TGF－β1［J］.J Neuroinflammation，2010，7:89.

［9］劉 琳.腫瘤壞死因子－α對(duì)神經(jīng)血管單元影響的研究進(jìn)展［J］.卒中與神經(jīng)疾病，2012，19（5）:320－2.

［10］Nishioku T，Matsumoto J，Dohgu S，et al.Tumor necrosis factor－alpha mediates the blood－brain barrier dysfunction induced by activated microglia in mouse brain microvascular endothelial cells［J］.J Pharmacol Sci，2010，112（2）:251－4.

［11］Falahati S，Breu M，Waickman A T，et al.Ischemia－induced neuroinflammation is associated with disrupted development of oligodendrocyte progenitors in a model of periventricular leukomalacia［J］.Dev Neurosci，2013，35（2－3）:182－96.

The dysregulated expression of TNF-α for spastic cerebral palsy

Lin Xueming，Wu Jianxian
（Dept of Rehabilitation，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei230601）

82 spastic cerebral palsy and normal children were selected，including 27 younger and 27 older spastic cerebral palsy（observation group），and 14 younger and older normal children（control group）.The tumor necrosis factor α（TNF－α）levels were measured in the serum with ELISA.The TNF－α levels in the serum of the younger and older spastic CP groups were higher than those of the control groups（P＜0.01）.In observation groups，the TNF－α levels of younger spastic cerebral palsy were higher than those of the older（P＜0.01）.On the contrary，the normal children in the control group of different ages had no difference of TNF－α.TNF－α expression was significantly higher in the serum of the spastic CP group than that in the control group（P＜0.01）.TNF－α expressed continuouslyin vivoof children with spastic cerebral palsy involve subsequent brain injury.

cerebral palsy;immune factor;tumor necrosis factor－alpha

R 742.3;R 392

A

1000－1492（2014）05－0692－03

2014－02－24接收

安徽省高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào):KJ2010A194）;

安徽省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào):2012zy57）

安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科，合肥 230601

李雪明，女，碩士研究生;