許泳清

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 350013)

?

巴西牽牛組織培養(yǎng)技術(shù)初探

許泳清

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所 350013)

以巴西牽牛試管苗的莖尖為外殖體，對(duì)巴西牽牛組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行研究，結(jié)果表明：巴西牽牛組培苗腋芽生長(zhǎng)增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+NAA 0.5mg/L。

巴西牽牛；組織培養(yǎng)；組培苗；技術(shù)

病毒病已成為甘薯生產(chǎn)上的毀滅性病害，嚴(yán)重的可造成甘薯減產(chǎn)60%～80%。當(dāng)前甘薯病毒病尚無(wú)特別有效的化學(xué)防治方法，加之甘薯屬于無(wú)性繁殖作物，極易造成病毒繼代傳染及傳播擴(kuò)散。目前，通過(guò)莖尖組織培養(yǎng)獲得脫毒種苗是防治甘薯病毒病最為有效的措施，而病毒檢測(cè)是不可或缺的一環(huán)。甘薯病毒病多數(shù)是由多種病毒復(fù)合侵染造成的，目前最簡(jiǎn)單有效并且可以一次檢查多種病毒的方法就是用指示植物——巴西牽牛嫁接法，巴西牽牛對(duì)多種侵染甘薯的病毒都很敏感，受病毒侵染后葉片上產(chǎn)生系統(tǒng)性癥狀，如明脈、脈帶、產(chǎn)生褪綠斑點(diǎn)、中脈扭曲、整株枯死等[1]。巴西牽牛雖然能產(chǎn)生大量的種子，但在繁殖過(guò)程中易受甘薯病毒的侵染，若通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)在試管中繁殖巴西牽牛試管苗則能夠克服用種子繁苗的缺點(diǎn)[2]。為此，本試驗(yàn)對(duì)巴西牽牛組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行研究，旨在通過(guò)在試管中培養(yǎng)組培苗的方式，獲得大量生長(zhǎng)一致的巴西牽牛組培苗用于甘薯病毒病的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

巴西牽牛種子(上一年收獲的種子，已經(jīng)通過(guò)休眠期)。

1.2試驗(yàn)處理設(shè)計(jì)

催芽處理設(shè)：處理1、種子用濃硫酸液泡1.5h；處理2、種子用刀破殼后經(jīng)次氯酸鈉消毒。

種子萌發(fā)培養(yǎng)基MS，組培苗擴(kuò)繁繼代培養(yǎng)基設(shè)3個(gè)處理：處理A、MS；處理B、MS+NAA 0.5mg/L；處理C、MS+NAA 0.5mg/L +6-BA 1.0mg/L。培養(yǎng)基制備后，均經(jīng)121℃、1.5個(gè)大氣壓滅菌20min。

1.3試驗(yàn)方法

在超凈工作臺(tái)上，將巴西牽牛種子進(jìn)行催芽，處理1的種子用濃硫酸浸泡1.5h，無(wú)菌水清洗后接于MS培養(yǎng)基；處理2將種子用刀破殼后經(jīng)次氯酸鈉消毒處理后接于MS培養(yǎng)基。兩個(gè)處理均于3d后觀察發(fā)芽率與污染率。種子發(fā)芽后每天進(jìn)行2000lx的光照10h，培養(yǎng)7d后，在超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌剪刀、鑷子剪掉子葉，然后切取0.5～1.0mm長(zhǎng)的莖尖接種到莖尖啟動(dòng)培養(yǎng)基上，每瓶接種1個(gè)莖尖，置于25℃、2000lx、每天光照10h的條件下培養(yǎng)。待莖尖生長(zhǎng)成健壯的巴西牽牛試管植株后，剪成單莖節(jié)段，將單莖節(jié)段斜插入繼代培養(yǎng)基上，腋芽位于培養(yǎng)基表面進(jìn)行擴(kuò)繁，每瓶接3株。20d后觀察組培苗的生長(zhǎng)情況，包括株高、莖節(jié)數(shù)和根長(zhǎng)等。

2 結(jié)果與分析

2.1不同催芽處理對(duì)巴西牽牛種子萌發(fā)的影響

由于巴西牽牛種子具有堅(jiān)硬光滑的種皮，其種子萌發(fā)比較困難，且萌發(fā)時(shí)間參差不齊，因此應(yīng)進(jìn)行催芽處理。從表1中可以看出，兩個(gè)處理巴西牽牛種子的發(fā)芽率較高，均達(dá)到了90%以上，且出苗時(shí)間短，說(shuō)明這兩種催芽處理的方式都是有效的。但兩種處理均發(fā)生污染，處理2的污染率較低，僅為2%。綜合上述表現(xiàn)，巴西牽牛種子宜用刀破殼后經(jīng)次氯酸鈉消毒處理，有利于減少污染率，提高發(fā)芽率。

表1 巴西牽牛種子不同催芽處理的萌發(fā)情況

2.2不同培養(yǎng)基對(duì)巴西牽牛組培苗生長(zhǎng)的影響

從表2中可以看出，3種培養(yǎng)基對(duì)巴西牽牛試管苗的生長(zhǎng)情況均有影響。從生長(zhǎng)勢(shì)看，巴西牽牛試管苗的單莖節(jié)段在MS培養(yǎng)基和MS+NAA 0.5mg/L培養(yǎng)基中，苗生長(zhǎng)正常、葉色綠、根系發(fā)達(dá)，表明MS和MS+NAA 0.5mg/L兩種培養(yǎng)基均適合于巴西牽牛試管苗的生長(zhǎng)；但巴西牽牛試管苗的單莖節(jié)段在MS+NAA 0.5mg/L培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，其生長(zhǎng)20d后的株高、莖節(jié)數(shù)、生根數(shù)量及根長(zhǎng)都較MS培養(yǎng)基上的試管苗高；MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L培養(yǎng)基中的苗生長(zhǎng)受到抑制，株高矮，不長(zhǎng)根，根部出現(xiàn)愈傷。試驗(yàn)結(jié)果表明，MS+NAA 0.5mg/L培養(yǎng)基最適合巴西牽牛試管苗單莖節(jié)段繼代增殖培養(yǎng)。

表2 巴西牽牛單莖節(jié)在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況

注：處理A為MS；處理B為MS+NAA 0.5mg/L；處理C為MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L。

3 小結(jié)與討論

巴西牽牛種子最適宜的催芽方式是采用破殼的方法，經(jīng)消毒處理后接于MS培養(yǎng)基中，發(fā)芽率可達(dá)100%。本研究得出了巴西牽牛組培苗擴(kuò)繁的最適宜培養(yǎng)基為MS+NAA 0.5mg/L，繁殖系數(shù)可達(dá)到5。通過(guò)組織培養(yǎng)的方式，可以不受季節(jié)影響在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的巴西牽牛組培苗[3]，通過(guò)移栽，進(jìn)行大量甘薯病毒檢測(cè)。

本試驗(yàn)已經(jīng)篩選出適宜巴西牽牛組培苗單莖節(jié)段繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基，能夠大量擴(kuò)繁出無(wú)病毒生長(zhǎng)一致的組培苗。下一步將研究將在試管中利用巴西牽牛和甘薯試管苗進(jìn)行試管微嫁接來(lái)檢測(cè)甘薯試管苗是否帶有病毒。

[1]張希太，李俊玲，宋九英，等.巴西牽牛的組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，34(1)：41-44.

[2]張希太，張彥波，肖磊，等.利用巴西牽牛試管苗檢測(cè)甘薯組培苗病毒技術(shù)研究[J].農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2013，3(12)：16-22.

[3]王蒂．植物組織培養(yǎng)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004.

(責(zé)任編輯：林玲娜)

Preliminaryprobetotissueculturetechnologyforipomoeasetosa

XU Yong-qing

(InstituteofCropsciences,FujianAcademyofAgricultureSciences,FujianProvince350013)

With shoot tip of Ipomoea setosa plantlet as explants,tissue culture technology for Ipomoea setosa was studied. The results showed that the best culture medium for axillary bud growth of Ipomoea setosa was MS+NAA 0.5mg/L.

Ipomoea setosa; tissue culture; tissue culture seedling; technology

2014-10-13

許泳清，女，1980年生，助理研究員。

國(guó)家甘薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-11-B-10-2013)；福建省財(cái)政專項(xiàng)—福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(CXTD-1-1301)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2014.12.002