張旭 王喻 李小毛

·臨床醫(yī)學(xué)·

Survivin在正常組織、癌旁組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

張旭 王喻 李小毛

目的 研究正常組織、癌旁組織以及子宮內(nèi)膜癌組織中凋亡抑制基因(Survivin)的表達(dá)情況, 并探討其相應(yīng)的臨床病理意義。方法 應(yīng)用免疫組化檢測(cè)30例正常組織、11例癌旁組織以及30例子宮內(nèi)膜癌組織中Survivin的表達(dá)情況, 并結(jié)合其臨床病理因素進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果 Survivin在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達(dá)率為93.33%(28/30), 顯著高于正常子宮內(nèi)膜(26.67%) (P＜0.001), 但與癌旁組織中的Survivin表達(dá)率(81.82%)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 Survivin在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)上調(diào)在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展有重要意義, 包含Survivin的聯(lián)合檢測(cè)在子宮內(nèi)膜癌的早期診斷方面具有指導(dǎo)意義。

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma, EC)是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤, 近年來其發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。研究表明, 子宮內(nèi)膜的癌變過程與細(xì)胞凋亡減少、過程紊亂密切相關(guān)［1］。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis protein, IAP)的成員之一, 是近來研究比較熱門的基因［2］。目前, 國(guó)內(nèi)外關(guān)于Survivin與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究多有報(bào)道, 尚無統(tǒng)一結(jié)論［3-7］。本研究采用免疫組化檢測(cè)Survivin蛋白在子宮內(nèi)膜癌、正常子宮內(nèi)膜及癌旁組織中的表達(dá)情況, 并結(jié)合相關(guān)臨床病理學(xué)特征及其他臨床指標(biāo), 分析Survivin蛋白在子宮內(nèi)膜癌變過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2005～2013年在中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院婦科診治, 經(jīng)手術(shù)-病理確診為子宮內(nèi)膜癌患者的存檔病理蠟塊30例, 分別行Survivin蛋白檢測(cè)及HE染色。同時(shí)選取同期因子宮肌瘤行全子宮切除手術(shù)的30例正常內(nèi)膜(增生期、分泌期各15例)作對(duì)照, 并于癌組織旁0.4 cm腫瘤與正常組織交界處取癌旁組織11例。所選患者均具有完整的臨床病理學(xué)資料, 年齡44～76歲, 術(shù)前未接受內(nèi)分泌等治療。根據(jù)子宮內(nèi)膜癌手術(shù)-病理分期(FIGO, 2000)劃分：Ⅰ期23例、Ⅱ期3例、Ⅲ期3例、Ⅳ期1例；無肌層浸潤(rùn)6例, 淺肌層浸潤(rùn)(＜1/2)14例, 深肌層浸潤(rùn)(≥1/2)10例,發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者4例；按癌細(xì)胞分化程度分為G1級(jí)22例、G2級(jí)4例、G3級(jí)4例。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑 Survivin一抗購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz公司, SP二抗試劑盒、DAB顯色試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋公司等。

1.2.2 標(biāo)本來源 標(biāo)本來自廣泛子宮或全子宮切除術(shù)后石蠟包埋子宮內(nèi)膜組織。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組化2步SP染色法：離體組織切片制片后, 烤片, 脫蠟, 修復(fù), 山羊血清封閉, 一抗、二抗孵育, DAB顯色, 蘇木素染核, 透明, 封片, 鏡檢。以乳腺癌陽性切片作陽性對(duì)照, PBS緩沖液代替Survivin一抗作陰性對(duì)照。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) Survivin蛋白常見于細(xì)胞漿, 偶見于細(xì)胞核, 以出現(xiàn)棕色顆粒樣沉著為陽性信號(hào)。每例均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野(×400), 以陽性細(xì)胞占百分比率分別記0～4分:≤5%記0分, 6%～25%記1分, 26%～50%記2分, 51%～75%記3分, ＞75%記4分；陽性細(xì)胞染色深淺程度記0～3分：無色0分, 淡黃色1分, 棕黃色2分, 棕褐色3分。兩者所記分?jǐn)?shù)乘積, 陰性(-)為0分, 弱陽性(+)為0～4分,中度陽性(++)為5～8分, 強(qiáng)陽性(+++)為9～12分。過表達(dá)為中度陽性和強(qiáng)陽性(++～+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件, 協(xié)方差分析或單因素方差分析, 檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。以 P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Survivin在正常組織、癌旁組織及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) Survivin在正常子宮內(nèi)膜中的陽性率為26.67%(8/30),其中增生期為13.33%(2/15), 分泌期為40.00%(6/15), 均為弱陽性(+)表達(dá)；在癌旁組織中為81.82%(9/11)；在子宮內(nèi)膜癌中為93.33%(28/30), 弱陽性(+)為26.67%(8/30),中度陽性(++)為50.00%(15/30), 強(qiáng)陽性(+++)為16.67%(5/30), 過表達(dá)率為66.67%(20/30)。以Survivin表達(dá)量作為因變量, 分組因素作為自變量, 年齡、是否絕經(jīng)等作為協(xié)變量進(jìn)行協(xié)方差分析, 發(fā)現(xiàn)控制混雜因素后,子宮內(nèi)膜癌中的Survivin蛋白表達(dá)量高于正常組織, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；而采用單因素方差分析后發(fā)現(xiàn),正常子宮內(nèi)膜中Survivin蛋白表達(dá)量低于子宮內(nèi)膜癌組織及癌旁組織, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但子宮內(nèi)膜癌與癌旁組織中Survivin蛋白的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 見表1。

表1 Survivin在正常組織、癌旁組織、子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá) (n, %)

2.2 Survivin與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示, Survivin的表達(dá)量與臨床分期(I～I(xiàn)V)、組織分化程度(G1～G3)、侵犯肌層(無、淺肌層、深肌層)、是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移、病理類型(腺癌、非腺癌)等經(jīng)典影響預(yù)后的臨床病理學(xué)特征的相關(guān)系數(shù)比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.3 Survivin與其他臨床指標(biāo)的關(guān)系 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示, Survivin 的表達(dá)量與年齡(＜50歲、50～60歲、＞60歲)、是否絕經(jīng)(是、否)、孕次(0次、1次、2次及以上)、產(chǎn)次(0次、1次、2次及以上)、流產(chǎn)次數(shù)(無、有)、CA199(＜35、≥35)、CA125(＜35、≥35)等其他臨床指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族成員, 通過下調(diào)Caspase的活性抑制細(xì)胞凋亡。Survivin過表達(dá)使正常細(xì)胞失去增殖周期中檢查點(diǎn)(checkpoint)的限制, 促進(jìn)細(xì)胞異常增殖, 導(dǎo)致腫瘤發(fā)生［4-7］。本研究顯示, Survivin在正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(26.67%)低于癌旁組織(81.82%)及內(nèi)膜癌組織(93.33%), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但在子宮內(nèi)膜癌(93.33%)與癌旁組織(81.82%)中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。這些結(jié)果均提示, 子宮內(nèi)膜癌中Survivin表達(dá)上調(diào), 推測(cè)Survivin的異常表達(dá)發(fā)生在內(nèi)膜癌發(fā)生癌變的早期；Survivin表達(dá)陽性提示, 正常組織具有早期癌變的傾向, 因而通過檢測(cè)Survivin的表達(dá)具有早期診斷的價(jià)值。另外, 本研究發(fā)現(xiàn), Survivin的表達(dá)與組織分化程度、臨床分期、肌層浸潤(rùn)、是否淋巴轉(zhuǎn)移等影響預(yù)后的臨床病理學(xué)因素?zé)o關(guān), 這同Erkanli、Pallares等［6,7］學(xué)者的研究結(jié)果一致, 但是同Takai、Lehner等［4,5］學(xué)者的研究結(jié)果不相符合, 其內(nèi)部發(fā)生機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。本研究還顯示, Survivin的表達(dá)與年齡、是否絕經(jīng)、流產(chǎn)次數(shù)、孕產(chǎn)次、腫瘤標(biāo)記物數(shù)值的高低等其他臨床相關(guān)因素?zé)o關(guān), 國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道極少見。

綜上所述, 在子宮內(nèi)膜癌高危人群中施行Survivin蛋白表達(dá)的檢測(cè)對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、高危人群的篩查具有重要意義, Survivin蛋白表達(dá)的上調(diào)可能在子宮內(nèi)膜的早期癌變過程中扮演重要的角色, 檢測(cè)其表達(dá)并與正常組織含量對(duì)比具有早期診斷的價(jià)值, 這一相關(guān)性的內(nèi)部分子機(jī)制尚不清楚, 有待進(jìn)一步研究。

［1］ Temkin SM, Fleming G.Current treatment of metastatic endometrial cancer.Cancer Control, 2009, 16(1):38-45.

［2］ 李梅, 陳蕓, 胡早秀, 等.Survivin在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 33(4):2339-2340.

［3］ Mita AC, Mita MM, Nawrocki ST, et al.Survivin:key regulator of mitosis and apoptosis and novel target for cancer therapeutics.Clin Cancer Res, 2008, 14 (16):5000-5005.

［4］ Takai N, Miyazaki T, Nishida M, et al.Survivin expression correlates with clinical stage, histological grade, invasive behavior and survival rate in endometrial carcinoma.Cancer Lett, 2002, 184(1):105-116.

［5］ Lehner R, Enomoto T, Mc Gregor JA, et al.Correlation of survivin mRNA detection with histologic diagnosis in normal endomet rium and endomet rial carcinoma.Acta Obstet Gynecol Scand, 2002, 81(2):162.

［6］ Erkanli S, Bolat F, Kayaselcuk F, et al.COX-2 and survivin are overexp ressed and positively correlated in endometrial carcinoma.Gynecol Oncol, 2007, 104(2):324-325.

［7］ Pallares J, Martínez-Guitarte JL, Dolcet X, et al.Survivin expression

510630 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院