先小樂 趙肖凡 牛家瑜 高 黎 肖相如

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

·研究報(bào)告·

基于“整體功能代償療法”探討增強(qiáng)脾的代償功能對(duì)慢性腎衰大鼠的干預(yù)作用*

先小樂 趙肖凡 牛家瑜 高 黎 肖相如△

（北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

目的 基于“整體功能代償療法”探討增強(qiáng)脾的代償功能對(duì)慢性腎衰大鼠的干預(yù)作用。方法 將40只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組，即模型組、空白組、香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組，并將給藥后的香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組與模型組進(jìn)行對(duì)照，觀察其24 h尿蛋白定量、腎功能及腎臟病理的變化。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)第8周末香砂六君丸加大黃粉組與模型組比較，2 h尿蛋白定量、血清肌酐 （Scr）、尿素氮（BUN）水平降低（P<0.05），并對(duì)受損腎臟具有一定的保護(hù)作用。結(jié)論 基于“整體功能代償療法”增強(qiáng)脾的代償功能可明顯降低腺嘌呤致慢性腎衰模型大鼠24 h尿蛋白定量及血清Scr、BUN水平，減輕腺嘌呤對(duì)腎臟組織的損害作用，有效改善腎臟功能。

“慢性腎衰整體功能代償療法” 慢性腎衰 脾代償功能 腺嘌呤 大鼠

慢性腎功能衰竭（CRF）是發(fā)生在各種慢性腎臟疾病基礎(chǔ)上緩慢出現(xiàn)的腎功能減退直至衰竭的臨床綜合征［1］。本病影響患者生活質(zhì)量且預(yù)后不良，是危害人類健康的重大疾?。?］。本實(shí)驗(yàn)基于“整體功能代償療法”探討增強(qiáng)脾的代償功能對(duì)腺嘌呤所致慢性腎衰模型大鼠24 h尿蛋白定量（24 h UPro）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）以及腎臟病理的影響，進(jìn)而基于“慢性腎衰整體功能代償療法”探討增強(qiáng)脾的代償功能對(duì)CRF模型大鼠腎臟功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠40只，體質(zhì)量（200±30）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2009-0004。于北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院普通級(jí)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑及儀器 中成藥香砂六君丸，中藥大黃（粉）均由北京同仁堂有限責(zé)任公司提供。蒙諾（福辛普利鈉片）（批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H19980197）。腺嘌呤（分子式C5H5N5，分子量135.13）（純度≥98%）、尿液分析試條（化學(xué)分析法）、尿微量白蛋白試劑盒及校準(zhǔn)品、血肌酐測(cè)定試劑盒 （除蛋白法）（100T）、BUN測(cè)試盒、水合氯醛、10%中性甲醛等，均由北京百諾威生物科技有限公司提供。使用的全自動(dòng)生化分析儀GLYMPUS、LD25-2低溫自動(dòng)平衡離心機(jī)等，均由北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心提供。

1.3 模型制備 將40只大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組，每組10只。本實(shí)驗(yàn)參考Yokozawa［3］提出的造模方法，將1 g腺嘌呤溶于40 mL生理鹽水中制成混懸液，濃度為2.5%，按200 mg/（kg·d）劑量，每日定時(shí)給30只大鼠（模型組、香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組）灌胃。空白組大鼠灌胃等體積生理鹽水。全部大鼠自由攝取普通飼料、飲水，造模周期共4周。第4周末每組隨機(jī)處死2～3只大鼠進(jìn)行指標(biāo)對(duì)比，判斷造模是否成功。

1.4 分組與給藥 采用隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行完全隨機(jī)化分組。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，模型組、香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組采用臨時(shí)性標(biāo)記法（3%～5%苦味酸溶液涂染法），同時(shí)進(jìn)行稱質(zhì)量、目測(cè)蛋白試紙進(jìn)行尿液中蛋白質(zhì)的初步檢測(cè)。于實(shí)驗(yàn)第5周開始，參照藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥方法，香砂六君丸加大黃粉組給予中成藥香砂六君丸加大黃粉懸濁液灌胃，福辛普利組給予福辛普利鈉片懸濁液灌胃，空白組每日灌胃等劑量生理鹽水，模型組不給藥、不干預(yù)治療。給藥至第8周末結(jié)束。在此過程中，根據(jù)大鼠的體質(zhì)量變化調(diào)整給藥劑量。

1.5 標(biāo)本采集與檢測(cè) 于實(shí)驗(yàn)第4周、第8周末分別將各組大鼠單個(gè)置于清潔代謝籠中做平行對(duì)照 （限制飲食，不限飲水），每個(gè)接尿瓶中滴入甲苯0.2 mL防腐，進(jìn)行蛋白質(zhì)定性及24 h尿蛋白測(cè)量。于實(shí)驗(yàn)第8周末，水合氯醛麻醉40只大鼠后，腹主動(dòng)脈取血3 mL。血液收集后立即以3000 r/min低溫高速離心15 min，移液槍分離血清，全自動(dòng)生分析儀測(cè)血清Scr、BUN等生化指標(biāo)。并在取血后迅速剝離腎臟周圍結(jié)締組織，距腎門1 mm處摘除腎臟腎，沿矢狀面剖開殘腎，生理鹽水沖洗，無菌紗布輕輕吸干組織表面水分，置于10%中性甲醛溶液中固定，留做腎臟病理切片備用。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（s）表示，組間比較采用方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 第4、8周末各組大鼠24 h UPro結(jié)果 見表1。實(shí)驗(yàn)第4周末，模型組與正常組比較，大鼠24 h尿蛋白定量明顯升高（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎衰大鼠造模成功。實(shí)驗(yàn)第8周末，香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組與模型組比較，24 h UPro差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。香砂六君丸加大黃粉組與福辛普利組24 h UPro水平相當(dāng)。

表1 各組第4、8周末各組大鼠24 h UPro水平比較（mg/24 h，s）

表1 各組第4、8周末各組大鼠24 h UPro水平比較（mg/24 h，s）

與模型組比較，*P＜0.05；與空白組比較，△P＜0.05。下同。

組別 n 第4周末 第8周末空白組 10 0 0模型組 10 3.25±1.63△4.04±1.50△香砂六君丸加大黃粉組 10 3.32±1.53△2.06±0.61*△福辛普利組 10 3.55±1.32△1.91±0.50*△

2.2 第8周末各組大鼠血清BUN、Scr結(jié)果 見表2。實(shí)驗(yàn)第8周末，香砂六君丸加大黃粉組、福辛普利組與模型組比較，血清Scr、BUN水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。香砂六君丸加大黃粉組與福辛普利組BUN、Scr水平相當(dāng)。

表2 各組第8周末各組大鼠BUN、Scr水平比較（s）

表2 各組第8周末各組大鼠BUN、Scr水平比較（s）

組 別 n BUN（mmol/L） Scr（μmol/L）空白組 10 6.30±0.53 44.04±3.29模型組 10 30.33±10.57△163.27±27.09△香砂六君丸加大黃粉組 10 13.32±3.53*△80.96±9.61*△福辛普利組 10 14.55±4.52*△82.01±21.50*△

2.3 形態(tài)學(xué)結(jié)果 第8周末模型組大鼠腎臟顯著腫大，經(jīng)腎臟病理HE染色光鏡下可見部分腎小球萎縮消失，殘余腎小球結(jié)構(gòu)不清，主要表現(xiàn)為球囊變??；部分可見間質(zhì)纖維化。香砂六君丸加大黃粉組與福辛普利組腎小球大部分存在，結(jié)構(gòu)欠清。見圖1。

圖1 各組腎臟病理切片（HE染色，400倍）

3 討 論

CRF屬難治病，既沒有明確其病因病機(jī)，也找不到特效藥物。據(jù)國(guó)際腎臟病學(xué)會(huì)統(tǒng)計(jì)，CRF發(fā)病率約占自然人群的50/100萬～100/100萬［1］。我國(guó)80年代17省市的普查資料表明，每年死于CRF者達(dá)3～5萬。2010年我國(guó)維持血液透析的患者大約占終末期腎病的45%［4］。雖然腎臟移植手術(shù)和血液凈化技術(shù)給CRF患者帶來了生存的曙光，但由于其費(fèi)用昂貴、技術(shù)復(fù)雜，難以普遍推廣，嚴(yán)重危害國(guó)民健康與經(jīng)濟(jì)發(fā)展，廣大的CRF患者仍將依賴于內(nèi)科非透析治療［5］。導(dǎo)師肖相如教授早在1989年便提出了“慢性腎功能衰竭的整體功能代償療法”，筆者從師于肖相如教授，耳濡目染老師平素運(yùn)用“整體功能代償療法”治療CRF。CRF雖是各種腎臟疾病發(fā)展至終末期的危重綜合征，但因健存部分的腎臟在一定時(shí)期內(nèi)可以繼續(xù)代償其受損部分，使病損部位得以修復(fù)，生命活動(dòng)得以延續(xù)，故西醫(yī)將保護(hù)殘存腎單位、維護(hù)腎臟代償能力、改善腎功能作為治療CRF的重要手段和最終目標(biāo)。然而，長(zhǎng)期慢性的腎臟損害具有不可逆性，腎臟自身代償能力終究有限。既往對(duì)CRF的中醫(yī)治療也因局限于腎臟或某一臟腑，進(jìn)而忽略了臟腑之間整體的功能代償?！奥阅I衰整體功能代償療法”是中醫(yī)整體觀念、治未病養(yǎng)生論、臟腑相關(guān)學(xué)說與西醫(yī)代償理論相結(jié)合的產(chǎn)物，其核心是將CRF時(shí)腎臟自身的功能代償擴(kuò)展成臟腑間整體的功能代償［5］。這一治療體系，突破了以往單方單藥及被動(dòng)分型論治的思維定勢(shì)。

人體是一個(gè)以五臟為中心的有機(jī)整體，任何生理功能的實(shí)現(xiàn)均要在機(jī)體各臟腑的共同調(diào)節(jié)參與下完成。根據(jù)“慢性腎衰整體功能代償療法”相關(guān)理論，就參與代償?shù)捻樞蚨?，脾最先參與代償，肺次之，肝再次之，心最后［5］。CRF大部分臨床癥狀是由尿素、肌酐、胍類、草酸及多胺等毒素引起。由腎臟降解排泄的毒素在體內(nèi)潴留，彌散進(jìn)入腸腔后被轉(zhuǎn)化為氨和碳酸銨，從而導(dǎo)致消化、血液等系統(tǒng)等異常［6-7］。而CRF總是伴隨明顯的消化系統(tǒng)癥狀，其中惡心、厭食、間斷性嘔吐、呃逆和腹瀉最常見。Benzo［8］觀察了47例CRF患者，32例有上消化道病變，嚴(yán)重影響患者的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和生活質(zhì)量。根據(jù)“整體功能代償”的規(guī)律，凡是腎功能損害的患者，都應(yīng)在補(bǔ)腎的同時(shí)積極健脾［5］，在沒有脾虛證時(shí)健脾比出現(xiàn)脾虛證時(shí)才健脾對(duì)維護(hù)腎功能更有意義。因脾居于中焦，職司運(yùn)化、升清，與人體氣化功能關(guān)系密切，故CRF脾臟最早參與代償，所受影響也最直接。當(dāng)腎臟受損，氣化失司，濕濁內(nèi)留，除外腎臟本身殘存單位繼續(xù)進(jìn)行代償性氣化功能外，脾臟也參與運(yùn)化及升清降濁等重要的氣化功能，幫助腎臟代謝廢物與毒素。若CRF治療或調(diào)護(hù)不周均可導(dǎo)致腎臟進(jìn)行性損害且不可逆，故當(dāng)體內(nèi)潴留之濕濁毒邪超過脾胃代償?shù)臍饣δ軜O限，可致脾腎同病。因此CRF時(shí)重視調(diào)脾對(duì)維護(hù)腎臟功能有積極的意義。在臨床上虛實(shí)夾雜者多見，特別是脾氣虛弱挾濁邪者較多，故本實(shí)驗(yàn)以香砂六君子湯加大黃為主方，以益氣健脾、通腑瀉濁。

本實(shí)驗(yàn)選用香砂六君丸加大黃粉為干預(yù)手段，以觀察對(duì)腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭模型大鼠24 h尿蛋白定量、腎功能等生化指標(biāo)的影響，進(jìn)而初步證實(shí)基于“整體功能代償療法”增強(qiáng)脾的代償功能可減輕腺嘌呤對(duì)腎臟組織的損害作用，有效改善腎臟功能。因此，在今后有效運(yùn)用內(nèi)科非透析療法防治CRF，延緩病程進(jìn)展，增強(qiáng)腎衰患者腎臟保護(hù)作用，仍是臨床研究的重要課題。

［1］ 王自敏，呂宏生，劉玉寧，等．中西醫(yī)臨床腎病學(xué)［M］．北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1997：479．

［2］ Coresh J，Astor BC，Greene T，et al．Prevalence of chronic kidney disease and decreased kidney function in the adult US population：Third Nation Healthand Nutrition Examination Survey［J］．Am J Kidney Dis，2003，41（1）：1-12．

［3］ Yokozaws T.Animal model of adenine-induced chronic renal failure in rats［J］.Nephron，1986，44：230-234.

［4］ Zou L，Wang M.Chinese association of blood purification management of Chinese hospital association.Current burden and probable increasing incidence of ESRD in China［J］.Clin Nephrol，2010，74（suppl 1）：S20-22.

［5］ 肖相如.慢性腎功能衰竭的治療思路研究［J］.中醫(yī)雜志，1994，35（12）：746.

［6］ Gallice P，Lai E，Bruent P，et，al.In vivo accumulation of sodium pump inhibitor by normal and uremic erythrocytes［J］. Int J Artif Organs，1993，16（3）：120.

［7］ Motojima M，Nishijima F，Ikoma M，et al.Role for“mic toxin”in the progressive loss of intact nephrons in chronic renal failure［J］.Kidney Int，1991，40（3）：461.

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Discussion on Intervention of Enhancing Spleen′s Compensation to Rats Suffering from Chronic Renal Failure on Account of Integrated Functional Compensation Therapy for Chronic Renal Failure

XIAN Xiaole，ZHAO Xiaofan，NIU Jiayu，et al.Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective：To discuss on intervention of enhancing spleen′s compensation to rats suffering from chronic renal failure on account of integrated functional compensation therapy for chronic renal failure.Methods：40 healthy male wistar rats were selected and randomly divided into 4 groups，model group，blank group，Xiangshaliujunzi Pills with rheum officinale group，fosinopril sodium group.Compared with model group，24-hour urine protein，renal function and renal pathological behavior in Xiangshaliujunzi Pills with rheum officinale group after administration will be observed.Results：Compared with model group in eighth weekend of the experience，24-hour urine protein，creatinine and usea nitrogen in serum of Xiangshaliujunzi Pills with rheum officinale group reduced（P<0.05），which can protect disabled kidney.Conclusion：Enhancing spleen′s compensation to rats suffering from chronic renal failure on account of integrated functional compensation therapy for chronic renal failure can reduce 24-hour urine protein，creatinine and usea nitrogen in serum of rats given adenine，which can achieve the better renal function by relieving pathological proceeding.

Integrated functional compensation therapy for chronic renal failure；Chronic renal failure；Spleen′s compensation；Adenine；Rats

R285.5

A

1004-745X（2014）11-2009-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.11.018

2014-07-26）

北京中醫(yī)藥大學(xué)科研課題（2013-JYBZZ-XS-034）

△通信作者