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        分光光度法測定云芝發(fā)酵浸膏中總三萜含量

        2014-09-01 07:29:27李雨婷李萌金周雨吳雷宋慧
        新媒體研究 2014年11期

        李雨婷+李萌+金周雨+吳雷+宋慧

        摘要采用分光光度法對云芝發(fā)酵浸膏中總三萜化合物含量進行測定。結果表明:5%香草醛-冰醋酸用量為0.3 mL,高氯酸用量為0.8 mL,反應溫度為70℃,反應時間為20 min,加冰醋酸5 mL,搖勻,在570 nm處測定其吸光值,效果最佳。標準曲線方程為Y=0.0092x-0.0447,R2=0.9991,吸光值與齊墩果酸含量在13 μg~91 μg范圍內呈良好的線性關系;三萜類化合物的質量分數(shù)為0.564%,RSD=0.7%。齊墩果酸加樣回收率98.60%~101.88%,平均加樣回收率為99.93%,RSD為1.12%;在反應結束0~40 min內,吸光值相對穩(wěn)定。該方法具有簡便、快速、靈敏、重復性好。

        關鍵詞云芝發(fā)酵浸膏;總三萜化合物;分光光度法

        中圖分類號:O657.3 文獻標識碼:A 文章編號:1671-7597(2014)11-0092-02

        云芝為多孔菌科云芝屬,是腐生真菌,生于多種闊葉樹木樁、倒木和枝上。世界各地森林中均有分布[1]。云芝含有多種活性物質,其含有的三萜類化合物具有抗炎、保肝、止痛[2]等功能,還具有顯著的抗腫瘤和促進免疫、降低血壓作用[3],在功能性食品的應用上具有一定的前景。但有關云芝發(fā)酵浸膏中的三萜類化合物含量卻少有報道。本文參照目前廣泛使用的三萜類化合物測定的方法[4-6],對采用乙醇浸泡的常規(guī)方法提取云芝發(fā)酵浸膏中的三萜類化合物進行含量測定,以期為云芝發(fā)酵浸膏中的三萜類化合物的開發(fā)和利用提供依據(jù)。并旨在為云芝的進一步開發(fā)和綜合利用提供科學參考。

        1材料與方法

        1.1 材料與試劑

        齊墩果酸標準品購于成都曼思特生物有限責任公司,冰醋酸、高氯酸、香草醛、乙醇、甲醇均為分析純。

        1.2 儀器與設備

        7530G紫外分光光度計(上海分析儀器廠);

        HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋、(金壇市富華儀器有限公司);

        SHB-B95型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 試劑的配置

        1)香草醛-冰醋酸的配制:精密稱取0.5 g香草醛,加入10 mL冰醋酸,即得5%香草醛-冰醋酸溶液。

        2)供試樣品溶液的制備:室溫下,精密稱取云芝發(fā)酵浸膏10 g,3倍體積95%乙醇浸泡24小時(不斷攪拌),取上清液,三次重復,合并提取液,過濾濃縮,95%乙醇定容至100 mL,搖勻備用。

        3)標準品溶液的制備:精密稱取齊墩果酸標準品13 mg,定容于100 mL甲醇中,即得齊墩果酸標準品溶液的濃度為130 μg/mL。

        1.3.2 測定條件的選擇

        選擇不同的波長、香草醛用量、高氯酸用量、反應溫度和時間,分別測定吸光值,用于選擇最佳的比色條件。

        1)波長的選擇:準確稱取齊墩果酸標準品溶液0.2 mL于具塞試管中,水浴加熱揮去溶劑,加入0.2 mL 5%的香草醛-冰醋酸溶液,0.8 mL的高氯酸溶液,密封,于70℃水浴加熱20 min,取出后迅速冷水冷卻,加5 mL冰醋酸,搖勻,對顯色體系在200 nm-600 nm波長下掃描,結果表明:在570 nm處有最大吸收,且空白無干擾,故選擇570 nm為測定波長。

        2)香草醛-冰醋酸用量的選擇:精確稱取標準品溶液0.2 mL于具塞試管中,水浴加熱揮去溶劑,加新鮮配制的5%的香草醛-冰醋酸0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL,高氯酸0.8 mL,密封。于70℃水浴加熱20 min,取出后迅速冷水冷卻,加5 mL冰醋酸,搖勻,在570 nm處測定其吸光值。

        結果得出看出,香草醛-冰醋酸的用量在0.3 mL時,吸光值較大,繼續(xù)增加香草醛-冰醋酸的用量對吸光值的影響不大,故選擇香草醛-冰醋酸的用量為0.3 mL。

        3)高氯酸用量的選擇:精確吸取標準品溶液0.2 mL于具塞試管中,水浴加熱揮去溶劑,加新鮮配制的5%的香草醛-冰醋酸0.3 mL,高氯酸分別為0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL,密封。于70℃水浴加熱20 min,取出后迅速冷水冷卻,加5 mL冰醋酸,搖勻,在570 nm處測定其吸光值。

        結果得出,高氯酸用量在0.8 mL時,吸光值最大,繼續(xù)增加高氯酸用量對吸光值的影響不大,故選擇高氯酸的用量為0.8 mL。

        4)反應時間的選擇:精確稱取標準品溶液0.2 mL于具塞試管中,在上述實驗的基礎上,改變反應時間(min),分別測定其吸光值。

        結果得出在15 min~25 min內,吸光值比較穩(wěn)定,故選擇20 min為反應時間。

        5)反應溫度的選擇:精確稱取標準品溶液0.2 mL于具塞試管中,在上述實驗的基礎上,改變反應溫度(℃),分別測定其吸光值。

        結果得出,溫度在60℃~80℃范圍內相對穩(wěn)定,故選擇70℃為反應溫度。

        1.3.3 標準曲線的制作

        準確吸取齊墩果酸標準品溶液0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL于八支具塞試管中,水浴加熱揮去溶劑。按上述優(yōu)選條件及步驟在570 nm波長下測定吸光值。以吸光度A為縱坐標,齊墩果酸質量(μg)為橫坐標,制作標準曲線。得回歸方程為:Y=0.0092x-0.0447,R2=0.9991。表示吸光值與齊墩果酸含量在13 μg~91 μg范圍內呈良好的線性關系。

        2結果與分析

        2.1 加樣回收率

        精確吸取齊墩果酸標品0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL于具塞試管中,按標準曲線方法操作,測定吸光值,計算含量,并計算回收率和RSD。

        結果為:齊墩果酸加樣回收率98.60%~101.88%,平均加樣回收率為99.93%,RSD為1.12%,均符合數(shù)學統(tǒng)計,表明本法能滿足對樣品三萜類化合物含量的測定,且測定結果準確可靠。

        2.2 穩(wěn)定性實驗

        將樣品溶液按標準曲線繪制的各點分別在0~60 min內進行測定,在反應結束0~40 min內,吸光值相對穩(wěn)定,所以應該在顯色后40 min內進行測定。

        2.3 精密度實驗

        準確吸取標樣品溶液0.2 mL于具塞試管中,按標準曲線方法操作,五次重復。按制備標準曲線項下操作,測得吸收值并計算含量,經計算RSD為1.79%,以齊墩果酸測定云芝發(fā)酵浸膏中總三萜含量具有良好的重現(xiàn)性,表明儀器精密度良好。

        2.4 樣品含量測定

        準確吸取待測樣品0.1 mL于具塞試管中,共做5次重復,按標準曲線方法操作,測定其中三萜含量。結果為:云芝中的三萜類化合物的質量分數(shù)為0.564%,RSD為0.7%。

        3結論與討論

        1)本實驗采用分光光度法,以齊墩果酸為標準品,用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸為顯色劑,在波長570 nm處用分光光度法首次測定了云芝發(fā)酵浸膏中總三萜類化合物的含量。最佳反應條件:5%香草醛-冰醋酸0.3 mL,高氯酸0.8 mL,反應溫度為70℃,反應時間為20 min,加冰醋酸5 mL,搖勻,在570 nm處測定其吸光值得標準曲線方程為Y=0.0092x-0.0447,R2=0.9991,標準曲線在13 μg~91 μg范圍內呈良好的線性關系,加樣回收率98.60%~101.88%,平均加樣回收率為99.93%,RSD為1.12%,精密度實驗RSD為1.79%,測定過程中樣品顯色后在0~40 min吸光值相對穩(wěn)定,精密度、加樣回收率試驗結果表明該法簡便可靠、結果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。

        2)該法簡便、快速、靈敏、測定結果穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,且對儀器要求不高,實際可行,適合云芝發(fā)酵浸膏中三萜類化合物的含量測定。

        參考文獻

        [1]林志彬.靈芝的現(xiàn)代研究[M].北京:北京醫(yī)科大學出版社,2001.

        [2]王明宇,劉強,車慶明,等.靈芝三萜類化合物對3種小鼠肝損傷模型的影響[J].藥學學報,2000,35(5):326-329.

        [3]曾祥麗,包海鷹,等.靈芝三萜類成分及藥理學研究進展[J].菌物究,2004,2(1):68-77.

        [4]王文祥,顧振綸.比色法測定山楂總三萜酸的含量[J].中國野生植物資源,2001,20(5):47-48.

        [5]帕里達,堵年生,等.比色法測定瑣瑣葡萄中總三萜類成分的含量[J].華西藥學雜志,2002,17(6):475.

        [6]姚松君,黃生權,陳壯耀,等.超聲輔助提取靈芝三萜的工藝研究[J].現(xiàn)代食品科技,2009,25(10):1120-1223.

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