張淑梅，韋方劍，鄧建新，賀燕

（1.江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港　222100；2.連云港市畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，江蘇連云港　222001）

禽流感新城疫二聯(lián)重組活疫苗在鵪鶉中的應(yīng)用試驗(yàn)與探討

張淑梅1，韋方劍1，鄧建新1，賀燕2

（1.江蘇省連云港市贛榆區(qū)畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港222100；2.連云港市畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，江蘇連云港222001）

目前國內(nèi)還沒有規(guī)范的用于鵪鶉的禽流感免疫程序，傳統(tǒng)使用禽流感滅活疫苗免疫，而鵪鶉的個(gè)體小，注射免疫困難，導(dǎo)致了免疫密度低，免疫效果差，存在一定的疫情隱患。通過應(yīng)用禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rLH5-6株）在鵪鶉群中進(jìn)行注射、滴鼻、點(diǎn)眼、飲水等不同方式的應(yīng)用試驗(yàn)，制訂科學(xué)的、規(guī)范的免疫程序，以實(shí)現(xiàn)鵪鶉高致病性禽流感、新城疫免疫科學(xué)、經(jīng)濟(jì)、高效目標(biāo)。

鵪鶉；禽流感rLH5；新城疫；免疫；應(yīng)用試驗(yàn)

目前，我國禽流感防控工作取得了重大進(jìn)展。禽流感H5N1亞型滅活苗、H5N1+H9二價(jià)滅活苗日趨完善，以其生物安全、免疫效果穩(wěn)定、免疫副反應(yīng)小的特點(diǎn)被社會接受，并廣泛應(yīng)用于禽流感防控工作，在此基礎(chǔ)上以免疫為主的綜合防控措施的全面實(shí)施，有效地控制了禽流感疫情，家禽禽流感疫情趨于平穩(wěn)。

隨著畜牧業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整的不斷深入，我區(qū)養(yǎng)禽業(yè)有了較大的發(fā)展，規(guī)模養(yǎng)禽已成為當(dāng)今我區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展的突出的亮點(diǎn)。全區(qū)鵪鶉年飼養(yǎng)量從上世紀(jì)80年代中期的1000萬羽增至2014年的3000多萬羽。全區(qū)規(guī)模鵪鶉養(yǎng)殖大戶發(fā)展到800多戶，其中2000羽以上的鵪鶉養(yǎng)殖戶300多家，5000羽以上的鵪鶉養(yǎng)殖戶100多家，1萬羽以上的鵪鶉養(yǎng)殖戶70多家。但目前國內(nèi)還沒有規(guī)范的用于鵪鶉的禽流感免疫程序，傳統(tǒng)使用禽流感滅活疫苗免疫，因滅活疫苗僅能注射免疫，而鵪鶉的個(gè)體小，注射免疫困難，導(dǎo)致了免疫密度低，免疫效果差，存在一定的疫情隱患。

禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rLH5-6株）是哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司研制生產(chǎn)的一種新型疫苗，具有注射、滴鼻、點(diǎn)眼、飲水等免疫方式的多樣性，因此，通過對禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗在鵪鶉群中進(jìn)行注射、滴鼻、點(diǎn)眼、飲水等不同方式的應(yīng)用試驗(yàn)，制訂科學(xué)的、規(guī)范的免疫程序及配套的免疫操作規(guī)范和消毒規(guī)范等，以實(shí)現(xiàn)鵪鶉高致病性禽流感、新城疫免疫科學(xué)、經(jīng)濟(jì)、高效目標(biāo)，我們開展了禽流感、新城疫二聯(lián)活疫苗在鵪鶉中的應(yīng)用試驗(yàn)研究，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下并作相關(guān)探討：

1　試驗(yàn)分組、方法及抗體檢測

1.1試驗(yàn)在3個(gè)養(yǎng)殖場，每場分5組進(jìn)行

第1組：7日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗1羽份滴鼻，22日齡新城疫—禽流感重組二聯(lián)活疫苗2羽份飲水，50日齡禽流感H5N1滅活疫苗0.5mL肌注。

第2組：7日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗1.5羽份滴鼻，22日齡禽流感H5N1滅活疫苗0.5mL肌注。

第3組：7日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗1羽份飲水，22日齡禽流感H5N1滅活疫苗0.5mL肌注。

第4組：15日齡禽流感H5N1滅活疫苗0.3mL肌注，35日齡禽流感H5N1滅活疫苗0.5mL肌注。

第5組：7日齡新城疫Ⅳ系活疫苗1羽份滴鼻，22日齡禽流感、新城疫感重組二聯(lián)活疫苗2羽份飲水。

1.2試驗(yàn)用疫苗

禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rLH5-6株）由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，其批準(zhǔn)文號為：獸藥生字（2012）080012194。重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗由哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，其批準(zhǔn)文號為：獸藥生字（2014）080012228。雞新城疫活疫苗（La Sota株）由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，其批準(zhǔn)文號為：獸藥生字（2011）080072007。

1.3檢測方法

采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）的方法監(jiān)測H5N1禽流感及新城疫免疫抗體。

在試驗(yàn)過程中同時(shí)檢測ND和禽流感H5N1二種抗體，分別選擇一免后的7、14、21、28、35d進(jìn)行抗體監(jiān)測，獲取ND和禽流感H5N1二種抗體消長規(guī)律。進(jìn)行二免的選擇二免后的10、20、30、45、60、80、100d進(jìn)行監(jiān)測，觀察抗體變化情況，獲取ND和禽流感H5N1二種抗體消長規(guī)律。進(jìn)行三次免疫的選擇三免后分別在10、20、35、50、70、90、110、125、140、150d進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測，獲取ND和禽流感H5N1二種抗體消長規(guī)律。

1.4應(yīng)用試驗(yàn)時(shí)間

2015年2月27日～6月2日。

2　試驗(yàn)結(jié)果

每組每次采樣監(jiān)測20羽，檢測的抗體滴度用log2表示。

3　小結(jié)

3.1通過應(yīng)用試驗(yàn)，禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rLH5-6）對鵪鶉的免疫效果不很理想，免疫抗體效價(jià)偏低，同時(shí)說明鵪鶉對禽流感病毒易感性不高。

3.2選擇合理的免疫方式和合理加大免疫劑量，可以縮短免疫保護(hù)空白期，提高免疫抗體滴度和免疫合格率，延長免疫抗體的半衰期，進(jìn)而可以實(shí)現(xiàn)延長免疫保護(hù)期的目的。

3.3在應(yīng)用禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rLH5-6株）對鵪鶉進(jìn)行免疫的過程中，選擇用禽流感滅活苗和新城疫弱毒苗進(jìn)行加強(qiáng)免疫可以提高免疫效果。

3.4根據(jù)上述研究的結(jié)果，建議蛋用鵪鶉禽流感H5N1和新城疫的免疫，按照以下程序進(jìn)行：19日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗1羽份飲水，26日齡禽流感H5N1滅活疫苗0.3mL肌注，90日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗肌肉注射1羽。

肉用鵪鶉禽流感H5N1和新城疫的免疫，按照以下程序進(jìn)行：7日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗1羽份滴鼻，24日齡禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗2羽份飲水。

4　討論

4.1關(guān)于首免日齡選擇問題的探討。農(nóng)業(yè)部推薦禽流感H5N1滅活疫苗首免日齡是7～14日齡。國內(nèi)禽流感H5N1滅活疫苗生產(chǎn)廠家推薦的免疫劑量是7～20日齡0.3mL/羽，21日齡以上是0.5mL/羽。在實(shí)際免疫過程中，雛鵪鶉注射滅活苗非常困難，推廣難度大。根據(jù)試驗(yàn)已得的結(jié)果，本課題組認(rèn)為肉用鵪鶉在7日齡、種鵪鶉和蛋鵪鶉在15～20日齡以后進(jìn)行首免疫是比較好的選擇。

4.2鵪鶉免疫抗滴度維持在多少范圍內(nèi)對鵪鶉的保護(hù)比較安全，這個(gè)問題需進(jìn)行攻毒試驗(yàn)才能得出結(jié)論。

4.3種鵪鶉的免疫抗體滴與同一檢測時(shí)間種蛋出雛的母源抗體之間的差距也是探討內(nèi)容之一。

第1組　免疫抗體檢測結(jié)果

第2組　免疫抗體檢測結(jié)果

第3組　免疫抗體檢測結(jié)果

第4組　免疫抗體檢測結(jié)果

第5組　免疫抗體檢測結(jié)果

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．11.016