★ 王瑩 楊軍平 邱麗瑛 羅玉芳

(江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 江西 南昌 330006)

應(yīng)激反應(yīng)理論著重闡述應(yīng)激反應(yīng)中神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)之間的相互作用和調(diào)節(jié)[1]，發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)時(shí),下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸被激活,直接作用于靶器官，導(dǎo)致其功能改變。已有研究表明[2,3]應(yīng)激對(duì)免疫功能有不同程度的影響，應(yīng)激引起自然殺傷細(xì)胞的數(shù)目和活性降低，淋巴細(xì)胞增殖能力、單核巨噬細(xì)胞吞噬能力下降,效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的功能和T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)目和比值發(fā)生改變，最終導(dǎo)致了免疫功能下降[4]。另外，應(yīng)激還會(huì)引起免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的改變，使機(jī)體體液免疫功能也發(fā)生改變。應(yīng)激引起免疫功能改變的作用機(jī)制非常復(fù)雜，盡管這方面的研究比較多，但仍需要進(jìn)一步深入探討。

情緒應(yīng)激理論與中醫(yī)七情學(xué)說有不同之處，但也有共通之處，可以互相補(bǔ)充。情緒應(yīng)激屬于中醫(yī)的情志異常?？肿鳛橐环N不良的精神刺激，直接損傷腎氣和腎精，擾亂了臟腑功能，影響了機(jī)體正常的生理秩序。

通過觀察小鼠的免疫功能的變化，探討“恐傷腎”的免疫機(jī)理，為臨床對(duì)“恐傷腎”理論的認(rèn)識(shí)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并通過分析金匱腎氣丸對(duì)情緒應(yīng)激小鼠的補(bǔ)腎行氣的調(diào)節(jié)作用，探討其作用機(jī)制，對(duì)臨床的診斷和治療具有重要的理論依據(jù)，為進(jìn)一步研究含藥血清的作用打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠108只，由南昌大學(xué)動(dòng)物中心提供，雌性，體重20±2g，室溫(24±1)℃、濕度55±5%的環(huán)境，自然晝夜節(jié)律光照，適應(yīng)環(huán)境一周。在此期間，動(dòng)物均可自由攝食和飲水。觀察一周后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 儀器和試劑 儀器為西班牙biosystem A15特定蛋白分析儀；IgA(免疫球蛋白A)、IgG(免疫球蛋白G)、IgM(免疫球蛋白M)檢測(cè)試劑由西班牙Bionsystems S.A.公司生產(chǎn)，批號(hào)02159。

2 方法

2.1 造模 選用一種較獨(dú)特的應(yīng)激方法(貓嚇鼠結(jié)合空瓶實(shí)驗(yàn))[4-6]，在固定的時(shí)間給小鼠喂水,讓小鼠養(yǎng)成習(xí)慣，一周后在相同的時(shí)間給予空瓶刺激，引起小鼠情緒應(yīng)激反應(yīng)。自制應(yīng)激箱裝置：貓籠放置成年且兇狠的家貓一只，并置于鼠籠上，貓?zhí)阶陕杂|及小鼠，應(yīng)激小鼠2小時(shí)，中途喂食小鼠一只，予以強(qiáng)化應(yīng)激。

2.2 動(dòng)物分組 動(dòng)物隨機(jī)分為9組，按給藥和應(yīng)激時(shí)間分為7、14、21天組，動(dòng)物稱重后，按組放置不同的實(shí)驗(yàn)間，分組喂養(yǎng)。

2.3 給藥 干預(yù)組從應(yīng)激開始給藥，金匱腎氣丸成人用量為12g/日，按中劑量計(jì)算為400mg/100g動(dòng)物，每天給藥1次，給藥量為0.4mL,濃度為0.2g/mL。

2.4 動(dòng)物處理 實(shí)驗(yàn)完成后，各組動(dòng)物稱重后取血，血液于室溫放置2小時(shí)，以2500r/min離心20分鐘，吸出血清，放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｔ诒嫔涎杆俚厝〕鲂叵佟⑵⑴K，濾紙吸干血后，稱取各臟器重量，計(jì)算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)計(jì)算：臟器指數(shù)=臟器重量/動(dòng)物體重(mg/g)。

2.5 免疫球蛋白測(cè)定 免疫球蛋白的檢測(cè)采用散射比濁法，測(cè)試試劑盒為西班牙Bionsystems S.A.公司生產(chǎn)的專用試劑盒。

3 結(jié)果

3.1 應(yīng)激對(duì)小鼠行為的影響 對(duì)照組小鼠狀態(tài)佳，運(yùn)動(dòng)活潑，毛發(fā)潔白柔軟，攝食飲水均正常。應(yīng)激組小鼠隨應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，性情變的煩躁、易怒，情緒不穩(wěn)定，攻擊性強(qiáng)，灌胃不易配合。而且容易受驚嚇,呼吸急促、神情緊張，常處于警戒狀態(tài)。部分小鼠毛色泛黃，成小縷狀,也出現(xiàn)拱背豎毛及掉毛現(xiàn)象。排尿增多，可能與其腎功能損傷有關(guān)。給予金匱腎氣丸干預(yù)后，應(yīng)激小鼠緊張程度有所減輕，呼吸急促有所改善，基本無毛色帶黃情況出現(xiàn)，毛發(fā)大致均勻，少有掉毛現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)后期體能狀況亦較前改善，尿量亦有所減少。

3.2 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠胸腺的影響及中藥調(diào)節(jié) 見表1。

表1 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠胸腺重量、胸腺指數(shù)的影響及中藥調(diào)節(jié) ±s)

表2 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠脾臟重量、脾臟指數(shù)的影響及中藥調(diào)節(jié) ±s)

3.3 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠脾臟的影響及中藥調(diào)節(jié) 見表2。

3.4 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠血清免疫功能的變化及中藥調(diào)節(jié) 見表3。

表3 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠血清免疫功能的變化及中藥調(diào)節(jié) ±s)

4 討論

表1、2結(jié)果顯示：應(yīng)激組小鼠的胸腺、脾臟重量與指數(shù)均低于正常對(duì)照組(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)激引起下丘腦-垂體-腎上腺-靶器官調(diào)節(jié)紊亂,影響著機(jī)體的免疫功能，表明應(yīng)激導(dǎo)致了小鼠免疫器官的退化，表現(xiàn)為胸腺、脾臟萎縮[7,8]，隨著應(yīng)激時(shí)間增加，胸腺、脾臟萎縮更為嚴(yán)重。胸腺萎縮，影響細(xì)胞免疫功能，對(duì)體液免疫功能也有間接的影響。金匱腎氣丸可否拮抗胸腺的萎縮，從而延緩衰老過程，將是一個(gè)十分有意義的課題。金匱腎氣丸干預(yù)組小鼠胸腺、脾臟重量及指數(shù)與應(yīng)激組相比升高，有顯著性差異(P<0.05)；其原因可能是應(yīng)激引起了免疫器官的退化，而金匱腎氣丸干預(yù)其退化過程，從而起到對(duì)免疫器官的保護(hù)作用。

表3結(jié)果顯示：應(yīng)激組小鼠IgA含量升高、IgG和IgM含量降低,與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.01)，是因?yàn)樯窠?jīng)、內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)這三大系統(tǒng)彼此之間相互平衡協(xié)調(diào)，使機(jī)體在生理或病理狀態(tài)下維持相對(duì)穩(wěn)定和平衡的狀態(tài)，并調(diào)控著機(jī)體的各項(xiàng)生命活動(dòng)，這不僅體現(xiàn)在系統(tǒng)器官等方面的功能調(diào)控，還體現(xiàn)在分子水平的調(diào)控。應(yīng)激組小鼠的IgG和IgM含量下降，引起其下降的原因可能為：(1)胸腺萎縮，分泌胸腺肽，產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞減少，單核巨噬細(xì)胞的吞噬活性降低，機(jī)體免疫功能下降，免疫球蛋白水平下降；(2)脾臟萎縮，組織中含有的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞減少，使機(jī)體體液免疫受到抑制，機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答和產(chǎn)生抗體的過程受到影響,從而引起免疫球蛋白水平降低；(3)體液免疫通過神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子等多種物質(zhì)參與，造成小鼠的免疫功能抑制，免疫球蛋白水平降低。干預(yù)組小鼠IgA的水平降低、IgG和IgM含量升高，說明金匱腎氣丸對(duì)“恐傷腎”應(yīng)激小鼠的免疫球蛋白變化、免疫抑制有著較為理想的干預(yù)調(diào)節(jié)作用。

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