★ 王瑩 楊軍平 邱麗瑛 羅玉芳

(江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 江西 南昌 330006)

應激反應理論著重闡述應激反應中神經、內分泌、免疫系統(tǒng)之間的相互作用和調節(jié)[1]，發(fā)生應激反應時,下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸被激活,直接作用于靶器官，導致其功能改變。已有研究表明[2,3]應激對免疫功能有不同程度的影響，應激引起自然殺傷細胞的數目和活性降低，淋巴細胞增殖能力、單核巨噬細胞吞噬能力下降,效應T淋巴細胞的功能和T淋巴細胞亞群的數目和比值發(fā)生改變，最終導致了免疫功能下降[4]。另外，應激還會引起免疫球蛋白A、免疫球蛋白G和免疫球蛋白M的改變，使機體體液免疫功能也發(fā)生改變。應激引起免疫功能改變的作用機制非常復雜，盡管這方面的研究比較多，但仍需要進一步深入探討。

情緒應激理論與中醫(yī)七情學說有不同之處，但也有共通之處，可以互相補充。情緒應激屬于中醫(yī)的情志異常?？肿鳛橐环N不良的精神刺激，直接損傷腎氣和腎精，擾亂了臟腑功能，影響了機體正常的生理秩序。

通過觀察小鼠的免疫功能的變化，探討“恐傷腎”的免疫機理，為臨床對“恐傷腎”理論的認識提供了實驗依據，并通過分析金匱腎氣丸對情緒應激小鼠的補腎行氣的調節(jié)作用，探討其作用機制，對臨床的診斷和治療具有重要的理論依據，為進一步研究含藥血清的作用打下堅實的基礎。

1 試驗材料

1.1 實驗動物 昆明種小鼠108只，由南昌大學動物中心提供，雌性，體重20±2g，室溫(24±1)℃、濕度55±5%的環(huán)境，自然晝夜節(jié)律光照，適應環(huán)境一周。在此期間，動物均可自由攝食和飲水。觀察一周后開始實驗。

1.2 儀器和試劑 儀器為西班牙biosystem A15特定蛋白分析儀；IgA(免疫球蛋白A)、IgG(免疫球蛋白G)、IgM(免疫球蛋白M)檢測試劑由西班牙Bionsystems S.A.公司生產，批號02159。

2 方法

2.1 造模 選用一種較獨特的應激方法(貓嚇鼠結合空瓶實驗)[4-6]，在固定的時間給小鼠喂水,讓小鼠養(yǎng)成習慣，一周后在相同的時間給予空瓶刺激，引起小鼠情緒應激反應。自制應激箱裝置：貓籠放置成年且兇狠的家貓一只，并置于鼠籠上，貓?zhí)阶陕杂|及小鼠，應激小鼠2小時，中途喂食小鼠一只，予以強化應激。

2.2 動物分組 動物隨機分為9組，按給藥和應激時間分為7、14、21天組，動物稱重后，按組放置不同的實驗間，分組喂養(yǎng)。

2.3 給藥 干預組從應激開始給藥，金匱腎氣丸成人用量為12g/日，按中劑量計算為400mg/100g動物，每天給藥1次，給藥量為0.4mL,濃度為0.2g/mL。

2.4 動物處理 實驗完成后，各組動物稱重后取血，血液于室溫放置2小時，以2500r/min離心20分鐘，吸出血清，放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。在冰面上迅速地取出胸腺、脾臟，濾紙吸干血后，稱取各臟器重量，計算臟器指數。臟器指數計算：臟器指數=臟器重量/動物體重(mg/g)。

2.5 免疫球蛋白測定 免疫球蛋白的檢測采用散射比濁法，測試試劑盒為西班牙Bionsystems S.A.公司生產的專用試劑盒。

3 結果

3.1 應激對小鼠行為的影響 對照組小鼠狀態(tài)佳，運動活潑，毛發(fā)潔白柔軟，攝食飲水均正常。應激組小鼠隨應激時間的延長，性情變的煩躁、易怒，情緒不穩(wěn)定，攻擊性強，灌胃不易配合。而且容易受驚嚇,呼吸急促、神情緊張，常處于警戒狀態(tài)。部分小鼠毛色泛黃，成小縷狀,也出現拱背豎毛及掉毛現象。排尿增多，可能與其腎功能損傷有關。給予金匱腎氣丸干預后，應激小鼠緊張程度有所減輕，呼吸急促有所改善，基本無毛色帶黃情況出現，毛發(fā)大致均勻，少有掉毛現象，實驗后期體能狀況亦較前改善，尿量亦有所減少。

3.2 應激不同時間對小鼠胸腺的影響及中藥調節(jié) 見表1。

表1 應激不同時間對小鼠胸腺重量、胸腺指數的影響及中藥調節(jié) ±s)

表2 應激不同時間對小鼠脾臟重量、脾臟指數的影響及中藥調節(jié) ±s)

3.3 應激不同時間對小鼠脾臟的影響及中藥調節(jié) 見表2。

3.4 應激不同時間對小鼠血清免疫功能的變化及中藥調節(jié) 見表3。

表3 應激不同時間對小鼠血清免疫功能的變化及中藥調節(jié) ±s)

4 討論

表1、2結果顯示：應激組小鼠的胸腺、脾臟重量與指數均低于正常對照組(P<0.05)，有統(tǒng)計學意義。應激引起下丘腦-垂體-腎上腺-靶器官調節(jié)紊亂,影響著機體的免疫功能，表明應激導致了小鼠免疫器官的退化，表現為胸腺、脾臟萎縮[7,8]，隨著應激時間增加，胸腺、脾臟萎縮更為嚴重。胸腺萎縮，影響細胞免疫功能，對體液免疫功能也有間接的影響。金匱腎氣丸可否拮抗胸腺的萎縮，從而延緩衰老過程，將是一個十分有意義的課題。金匱腎氣丸干預組小鼠胸腺、脾臟重量及指數與應激組相比升高，有顯著性差異(P<0.05)；其原因可能是應激引起了免疫器官的退化，而金匱腎氣丸干預其退化過程，從而起到對免疫器官的保護作用。

表3結果顯示：應激組小鼠IgA含量升高、IgG和IgM含量降低,與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)，是因為神經、內分泌、免疫系統(tǒng)這三大系統(tǒng)彼此之間相互平衡協調，使機體在生理或病理狀態(tài)下維持相對穩(wěn)定和平衡的狀態(tài)，并調控著機體的各項生命活動，這不僅體現在系統(tǒng)器官等方面的功能調控，還體現在分子水平的調控。應激組小鼠的IgG和IgM含量下降，引起其下降的原因可能為：(1)胸腺萎縮，分泌胸腺肽，產生T淋巴細胞減少，單核巨噬細胞的吞噬活性降低，機體免疫功能下降，免疫球蛋白水平下降；(2)脾臟萎縮，組織中含有的淋巴細胞和巨噬細胞減少，使機體體液免疫受到抑制，機體發(fā)生免疫應答和產生抗體的過程受到影響,從而引起免疫球蛋白水平降低；(3)體液免疫通過神經遞質、細胞因子等多種物質參與，造成小鼠的免疫功能抑制，免疫球蛋白水平降低。干預組小鼠IgA的水平降低、IgG和IgM含量升高，說明金匱腎氣丸對“恐傷腎”應激小鼠的免疫球蛋白變化、免疫抑制有著較為理想的干預調節(jié)作用。

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