★ 陳浩 何小女 徐歡 張莉艷

(1.江西省中醫(yī)院 南昌330006；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌330004)

肛腸疾病術(shù)后傷口疼痛、出血等并發(fā)癥是臨床上一大常見(jiàn)難題。筆者在《新疆中草藥單方驗(yàn)方選編》基礎(chǔ)上研發(fā)出的復(fù)方止血消炎軟膏可用于保護(hù)術(shù)后肛腸患者創(chuàng)面及黏膜，減輕術(shù)后肛腸疾病疼痛及出血，減輕肛門(mén)墜脹及排便，作為肛腸外科手術(shù)后的局部用藥臨床效果良好。本文對(duì)處方中五倍子中的成分沒(méi)食子酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，為該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器)，超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司)，微型植物試樣粉碎機(jī)KN-500型(長(zhǎng)沙康寧電子科技有限公司)，恒溫鼓風(fēng)干燥箱DHG-9070A 型(海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 試劑 對(duì)照品：沒(méi)食子酸(110831-201204中國(guó)藥品生物制品檢定所)，色譜甲醇：西隴化工股份有限公司(130106)，水為超純水，其余實(shí)驗(yàn)所用化學(xué)試劑均為分析純?cè)噭?/p>

1.3 色譜條件 儀器：安捷倫1260，色譜柱：C-18安捷倫液相色譜柱4.6mm×150mm，流動(dòng)相：甲醇∶ 0.1%磷酸(5∶95)，檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm，流速：1mL/分，柱溫：25℃。

2 含量的測(cè)定[1-5]

2.1 沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品17mg于100mL量瓶中，加適量50%甲醇使溶解定容至刻度，搖勻，超聲10分鐘，過(guò)微孔濾頭于小瓶，即得儲(chǔ)備液。

2.2 供試品溶液的制備 稱(chēng)取抗炎止血軟膏10g于研缽中研勻，精密稱(chēng)取0.4g于圓底燒瓶中，精密加入4mol/L鹽酸溶液50mL，稱(chēng)定重量，水浴加熱3.5小時(shí)，放冷，補(bǔ)重，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，加50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，過(guò)微孔濾頭，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，加50%的甲醇制成每1mL含102μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密取儲(chǔ)備液1、2、3、5、7mL，溶解于5個(gè)10mL量瓶中，取50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10分鐘，以?xún)?chǔ)備液及稀釋的5個(gè)濃度的沒(méi)食子酸溶液建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，每次進(jìn)樣量10μL，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，求得回歸方程：Y=197 35X-5.808 3r=0.999 1(n=6)。結(jié)果表明：沒(méi)食子酸在進(jìn)樣量0.17-1.7μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.4 陰性干擾試驗(yàn) 取陰性樣品適量，按2.2供試品方法制成陰性對(duì)照溶液。按照上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL注入色譜儀中，記錄色譜圖(見(jiàn)下圖1-3)。結(jié)果表明：在與沒(méi)食子酸對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)色譜峰出現(xiàn)，方中其他組分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。

圖1 沒(méi)食子酸對(duì)照品

圖2 抗炎止血軟膏樣品

圖3 抗炎止血軟膏陰性樣品

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.2項(xiàng)的對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)得精密度RSD% =1.87%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察 取同一批號(hào)樣品6份，按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液，各進(jìn)樣10μL記錄峰面積，結(jié)果RSD%為1.33%，說(shuō)明本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液10uL分別于0、1、3、5、7、10小時(shí)注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積積分值，結(jié)果其RSD為1.42%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的同批抗炎止血軟膏樣品各0.2g，分別在6份樣品中加入沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品14.96mg，按“供試品溶液的制備”法處理，按設(shè)定的方法測(cè)定，平均回收率為99.6%，RSD為1.66%，結(jié)果良好。

2.9 樣品測(cè)定 取本品3批樣品(20121115、20121219、20130103)，按2.2供試品方法制備溶液，按含量測(cè)定方法測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算供試品沒(méi)食子酸的含量，結(jié)果分別為71.85mg/g、71.68mg/g、71.10mg/g。

3 討論

取樣品在200-350 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，在270 nm處有最大吸收，故選擇270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在供試品取樣中軟膏研細(xì)的均勻度決定著樣品含量測(cè)定的精確性，樣品在鹽酸水浴中提取性質(zhì)穩(wěn)定且高效液相測(cè)定中無(wú)陰性干擾。通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，本文建立了抗炎止血軟膏中沒(méi)食子酸含量的HPLC測(cè)定法。該方法簡(jiǎn)單并具有良好的準(zhǔn)確性與重現(xiàn)性，有利于藥品質(zhì)量控制的下一步完善。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：62.

[2]于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004.

[3]侯惠嬋，梁前，盧迅聰.五倍子、沒(méi)食子酸的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6(3)：38-39.

[4]陶淑娟，邵太麗，畢開(kāi)順.高效液相色譜法測(cè)定蒙藥那如-3丸中沒(méi)食子酸的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(1)：2-3.

[5]照日格圖，其樂(lè)木格.HPLC法測(cè)定蒙藥巴特日七味丸中沒(méi)食子酸的含量[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，24(1)：79-81.