劉艷麗 王永艷 孔增科

(河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 邯鄲 056002)

制劑與質(zhì)量控制

太行山區(qū)柴胡品質(zhì)分析研究※

劉艷麗 王永艷1孔增科△

(河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 邯鄲 056002)

柴胡；柴胡皂甙；色譜法,薄層；色譜法,高壓液相；中藥鑒定

柴胡為傘形科植物柴胡BepleurumchineseDC.或狹葉柴胡BepleurumscorzonerifoliumWild.的干燥根，收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部，是一種常用的中藥材。性味辛、苦、微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功效，主要用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛等癥。太行山區(qū)為柴胡主產(chǎn)地，藥材資源豐富，品質(zhì)優(yōu)良。本研究對(duì)流通市場(chǎng)柴胡及太行山不同產(chǎn)地采集的柴胡進(jìn)行質(zhì)量比較研究分析，結(jié)果如下。

1 薄層定性分析

1.1 儀器與試藥 ZF-2型三用紫外儀(上海電子儀器廠)。硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠)；5批藥材(產(chǎn)地：甘肅；涉縣栽培；武安石河灣；山西吉縣；武安瑯礦)；柴胡皂苷a對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110777-200507)；柴胡皂苷d對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110778-200506)；柴胡對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120992-201108)；乙酸乙酯、乙醇,甲醇均為分析純，水為純化水。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 供試品溶液的制備 分別取各樣品柴胡粉末(過四號(hào)篩)約0.5g，加甲醇20mL，超聲處理10min，濾過，濾液濃縮至5mL，作為供試品溶液。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取柴胡皂苷a對(duì)照品與柴胡皂苷d對(duì)照品，加甲醇制成每mL各含0.5mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

1.2.3 對(duì)照藥材溶液的制備 同“1.2.1供試品溶液的制備”制成對(duì)照藥材溶液。

1.2.4 薄層定性 按照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》一部 附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水(8∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)。 見封3，圖1。

2 柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的定量分析

2.1 儀器與試藥 Waters e2695高效液相色譜儀(美國(guó))；Empower工作站；waters 2498型紫外檢測(cè)器；XS105型電子天平(瑞士梅特勒)。甲醇、濃氨均為分析純，乙腈為色譜純，水為純化水，柴胡皂苷a對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所， 批號(hào)：110777-200507)；柴胡皂苷d對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110778-200506)；5批藥材(產(chǎn)地：甘肅；涉縣栽培；武安石河灣；山西吉縣；武安瑯礦)。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 色譜條件及系統(tǒng)性試驗(yàn) 以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，0～50min，A：25%～75%，B：90%～10%；50～55min，A：25%；B為75%，延時(shí)10min，Sunfire C18(250mm×4.6mm,5μm)為固定相，波長(zhǎng)為210nm，柱溫：30℃，進(jìn)樣量：20μL。在上述色譜條件下，對(duì)照品和供試品的色譜圖見圖2。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品0.01053g與柴胡皂苷d對(duì)照品0.01323g，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 分別取各樣品柴胡細(xì)粉(過四號(hào)篩)約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入5%濃氨試液的甲醇溶液25mL，密塞，30℃水溫超聲處理30min，濾過，用甲醇20mL分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.4 線性關(guān)系的考察 取上述混合對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5、10、20、30、50μL于高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行峰面積測(cè)定，以對(duì)照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，柴胡皂苷d回歸方程：Y=5E+06X+36462,r=0.999 9，結(jié)果表明柴胡皂苷d在0.1323mg/mL～1.323mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。柴胡皂苷a回歸方程：Y=9E+06X+509 48,r=0.999 9，結(jié)果表明柴胡皂苷d在0.1053mg/mL～1.053mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 柴胡高效液相色譜圖

0柴胡皂苷a、d標(biāo)準(zhǔn)品；1膜緣柴胡(甘肅)；2柴胡(涉縣栽培)；3柴胡(武安石河灣)；4柴胡(山西吉縣)；5柴胡(武安瑯礦)

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述混合對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.2%、0.2%。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品5份按上述供試品溶液制備方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量分別為1.211mg/g、2.842mg/g。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液20μL，每隔2h進(jìn)樣，共測(cè)定5次，其RSD為1.2%。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知含量的供試品細(xì)粉約0.25g，再分別精密加混合對(duì)照品溶液1mL，按供試品溶液的制備方法和色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，柴胡皂苷a、d平均回收率為97.26%、97.83%，RSD分別為0.9%、0.7%。結(jié)果見表1。

2.2.9 樣品含量測(cè)定 取樣品,按上述供試品溶液制備方法制備，精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液20μL,注入高效液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果見表2。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 根據(jù)薄層色譜發(fā)現(xiàn)，與柴胡對(duì)照藥材、混合對(duì)照品比較，5批柴胡在相應(yīng)的位置上均含有有效活性成分柴胡皂苷a、d，其中山西吉縣產(chǎn)柴胡斑點(diǎn)清晰，顏色深，其次是武安石河灣產(chǎn)柴胡、涉縣產(chǎn)栽培柴胡、武安瑯礦產(chǎn)柴胡、甘肅產(chǎn)膜緣柴胡，其他色斑比較深淺有所不同，說明5批柴胡藥材所含成分有所差異。

3.2 通過采用液相色譜法定量測(cè)定柴胡皂苷a、d含量比較發(fā)現(xiàn)，涉縣栽培柴胡比甘肅產(chǎn)膜緣柴胡中柴胡皂苷a、d的含量高出幾倍，太行山區(qū)產(chǎn)柴胡皂苷a、d含量比《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定含量普遍偏高，說明太行山區(qū)產(chǎn)柴胡品種優(yōu)良，質(zhì)量上乘。

3.3 近年來藥品流通市場(chǎng)上出售的柴胡甘肅產(chǎn)膜緣柴胡占較大份額，本研究通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析比較，其所含柴胡皂苷a、d的量低于《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定，應(yīng)引起藥品生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、使用機(jī)構(gòu)和藥品監(jiān)督單位的重視。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010: 263-264.

[2]李競(jìng),高英，李海龍，等.太行山區(qū)柴胡中總皂苷及柴胡皂苷a、d的含量測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,10(8):124-126，129.

[3]李競(jìng),高英，王振華，等.柴胡的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[J].北方藥學(xué),2013， 10(6):8-10.

[4]付正良，孔增科.涉縣野生柴胡資源與品質(zhì)研究報(bào)告[C]//第二屆全國(guó)中藥商品學(xué)術(shù)大會(huì)論文集.隴西：中國(guó)商品研究編輯委員會(huì)，2011：171-175.

(本文編輯：董軍杰)

※ 項(xiàng)目來源：河北省邯鄲市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：1113108018)

劉艷麗(1973—)，女，副主任藥師,學(xué)士。從事藥品檢驗(yàn)及標(biāo)準(zhǔn)研究工作。

R282.5;R282.71;R284.1

A

1002-2619(2014)11-1698-03

2014-04-08)

△ 通訊作者： 河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 邯鄲 056002

1 河北省邯鄲市第一醫(yī)院藥劑科，河北 邯鄲 056001