陳月霞 王俊 洪麗萍 蔡亞蘭 曹冬梅 朱佳麗

柏艾膠囊是一種純中藥制劑, 由側(cè)柏葉、荷葉、艾葉等多味中藥組成。能夠滋陰涼血、泄火平肝。柏艾膠囊中主藥為側(cè)柏葉,其中側(cè)柏葉中含有的槲皮苷, 具有涼血止血, 泄火平肝的作用, 同為側(cè)柏葉中有效成分的槲皮素同樣具有此功效。但本公司柏艾膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只對(duì)槲皮苷的含量進(jìn)行了測(cè)定, 未對(duì)槲皮素的含量進(jìn)行測(cè)定, 也未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為了有效評(píng)價(jià)藥物質(zhì)量, 本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)柏艾膠囊中槲皮素進(jìn)行含量測(cè)定, 方法快速簡(jiǎn)便, 可以為柏艾膠囊的質(zhì)量控制提供借鑒。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀；昆山市超聲儀器有限公司KQ-500B型超聲波清洗器；瑞士梅特勒XS205型電子分析天平。

槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院, 批號(hào)：100081-200907), 甲醇為色譜純, 其他試劑均為分析純, 水為超純水。

本實(shí)驗(yàn)所用柏艾膠囊與柏艾膠囊陰性樣品均來(lái)自揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司, 柏艾膠囊批號(hào)：13090341、13102341、13102541；柏艾膠囊陰性對(duì)照樣品批號(hào)：YXDZ-13112011。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 柱溫30℃, 流動(dòng)相為甲醇-0.2 mol/L磷酸溶液(50:50), 流速1.0 ml/min, 檢測(cè)波長(zhǎng)256 nm。進(jìn)樣量為10 μl,此條件下, 槲皮素與其他色譜峰能達(dá)到基線分離, 陰性對(duì)照無(wú)干擾, 理論板數(shù)按槲皮素計(jì)算不低于4000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取槲皮素對(duì)照品適量, 用甲醇溶解并稀釋至刻度制成每1 ml中含槲皮素16 μg的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品約0.1 g, 精密稱定, 置具塞錐形瓶中, 精密加入甲醇20 ml, 密塞, 稱定重量, 超聲處理30 min, 取出, 放冷, 再稱定重量, 用甲醇補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò), 取續(xù)濾液, 即得。

2.4 陰性對(duì)照樣品溶液的制備 精密量取裝量差異項(xiàng)下的柏艾膠囊陰性對(duì)照樣品約0.1 g, 按“2.3”項(xiàng)下的方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.5 干擾試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照樣品溶液, 按上述色譜條件測(cè)定, 記錄色譜圖。結(jié)果顯示, 陰性對(duì)照樣品對(duì)槲皮素的測(cè)定無(wú)干擾。

2.6 線性關(guān)系考察 精密量取2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液(17.136 μg/ml)1、5、8、1、12、15 μl注入液相色譜儀 , 按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定槲皮素峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μl)為橫坐標(biāo)(X), 槲皮素峰面積為縱坐標(biāo)(Y), 求得回歸方程為Y=4.8354X+5.0914,r2=0.9996。

結(jié)果表明槲皮素在0.017136～0.25704 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μl, 按“2.1”項(xiàng)下條件, 連續(xù)進(jìn)樣6次, 結(jié)果槲峰面積的RSD為0.1%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液, 在配制后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 h分別進(jìn)樣測(cè)定。按上述色譜條件測(cè)定槲皮素峰面積, 計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差, RSD為0.38%(n=14), 表明供試品溶液在13 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取柏艾膠囊(批號(hào)：13102341)6份, 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 分別進(jìn)樣測(cè)定, 結(jié)果槲皮素的平均含量為0.031 mg/mg, 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.8%(n=6)。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知槲皮素平均含量為0.0356 mg/mg的樣品6份, 分別精密加入0.4284 mg/ml的槲皮素對(duì)照品溶液10 ml, 按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 再按“2.1”項(xiàng)下方法分別測(cè)定, 計(jì)算得平均回收率為99.89%, RSD為0.8%。

2.11 樣品含量測(cè)定 取3個(gè)批次的樣品各兩份, 按2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液, 依法平行測(cè)定兩次。按外標(biāo)法計(jì)算槲皮素的含量, 樣本1、2、3含量的精密度分別為0.4%、1.1%、0.6%。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取槲皮素對(duì)照品用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在256 nm處有最大吸收, 且遠(yuǎn)離溶劑的吸收峰, 故選擇256 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 提取溶劑的選擇 參考《中國(guó)藥典》(2010年版)一部［1］及相關(guān)文獻(xiàn)［2］, 對(duì)不同濃度的甲醇作為提取溶劑進(jìn)行驗(yàn)證分析, 結(jié)果發(fā)現(xiàn), 采用純甲醇提取時(shí), 槲皮素的提取率最高, 故選定純甲醇作為提取溶劑。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部).2010年版.北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010:200-201.

［2］ 汪繼峰, 孫巖, 楊玉華.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方平喘膠囊中槲皮素的含量.甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012.29(4):61～64.