張 昀，胡海廷，劉 欣

(河南大學 藥學院,河南 開封 475004)

板藍根為目前最常用的預(yù)防感冒藥物之一，具有一定的抗病毒性。2010年版《中國藥典》[1]表明其具有清熱解毒、涼血利咽之功效。而板藍根的主要抗病毒活性成分為告依春，因此，告依春含量的高低，決定了板藍根抗病毒效果的好壞，2010版中國藥典[1]將其作為板藍根藥材質(zhì)量控制的指標。關(guān)于板藍根藥材及其制劑中告依春含量的測定方法文章比較多，但貯存條件對板藍根藥材及其制劑的影響未見報道。因此，我們以告依春含量為指標，考察不同溫度對板藍根藥材及其制劑中告依春含量的影響，為板藍根藥材及其制劑的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

TEMI880藥物穩(wěn)定試驗箱(上海蘇盈試驗儀器有限公司)；高效液相色譜儀Agilent1260；分析電子天平(BAS224S 賽多利斯科學儀器有限公司)；超聲儀(TP300天鵬電子技術(shù)(北京)有限公司)。

告依春對照品(中國藥品生物檢定所，批號111753-201103)；板藍根藥材購于開封市樂仁堂總店(批號110923)；板藍根顆粒(白云山制藥廠，批號F2F034)；板藍根含片(洛陽新春都生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號110901)；板藍根糖漿(李時珍醫(yī)藥集團有限公司，批號111001)；甲醇、乙腈為色譜純(天津四友精細化學品有限公司)；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Aglient TC-C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相乙腈-0.2 g/L磷酸溶液(9∶91)；檢測波長245 nm；流速:1 mL/min；柱溫30 ℃；進樣量20 μL。高效液相色譜圖,見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

按中國藥典[1]板藍根含量測定項下，對照品溶液的制備操作。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 藥材 按中國藥典[1]板藍根含量測定項下，供試品溶液的制備操作。

2.3.2 顆粒制劑 取樣品各5袋，混勻，研細，稱取0.500 3 g置10 mL容量瓶中，用超純水溶解，超聲提取10 min，冷卻，搖勻，定容，用0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 糖漿制劑 取樣品5瓶，混勻，移取2.00 mL置10 mL容量瓶中，用超純水溶解，定容，超聲提取10 min，冷卻，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 含片制劑 取樣品10片，研細，混勻，稱取0.399 9 g置10 mL容量瓶中，用超純水溶解，超聲提取10 min，冷卻，定容，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

A.對照品 B.藥材 C.板藍根顆粒 D.復(fù)方板藍根顆粒 E.板藍根含片 F.板藍根糖漿 1.告依春

2.4 線性關(guān)系考察

分別取濃度為0.4、1.2、2.4、3.2、4.8 mg/mL的告依春對照品溶液各20 μL，按2.1色譜條件進行測定，以峰面積(Y)對照品質(zhì)量(X)進行線性回歸，回歸方程為Y=6157.4X+270.09 (r=1.000 0)。表明，告依春在8～96 μg與峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實驗

精密吸取2.4 mg/mL告依春對照品溶液20 μL，同一條件下重復(fù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果，告依春RSD為1.5%，精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗

精密吸取2.4 mg/mL告依春對照品溶液20 μL，分別于0、4、8、12、16、20、24 h進樣，測定峰面積。結(jié)果，告依春峰面積RSD為3.9%，在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率實驗

按2.3項下取已知含量的藥材及各個制劑，按2.3項下取樣量分別減半，各精密稱定6份，分別加入一定量的告依春對照品，按2.3項下，制備供試品溶液。結(jié)果，藥材平均回收率為98.06%，RSD1.39%；單方顆粒平均回收率為97.28%，RSD1.03%；復(fù)方顆粒平均回收率為97.12%，RSD2.57%；含片平均回收率為98.24%，RSD3.06%；糖漿平均回收率為97.41%，RSD2.78%。

2.8 樣品測量

分別將藥材及各制劑置于5 ℃冰箱，30 ℃±5 ℃(相對濕度65%±5%)和40 ℃±2 ℃(相對濕度75%±5%)的穩(wěn)定性試驗箱中，于0，1，2，3，6個月取樣。用外標法一點法計算各樣品中告依春的含量，測定結(jié)果見表1。

表1 不同溫度樣品中告依春含量(n=3)

3 討論

由表1可知，不同溫度對板藍根藥材及其制劑中告依春含量有影響。5℃時，告依春在藥材及各種制劑中都很穩(wěn)定，放置6 mon后未見明顯變化。而在40 ℃(相對濕度75%±5%)時，放置6 mon后，藥材中的含量相對0個月平均下降約15%，顆粒制劑均下降約40%，含片下降約50%，糖漿劑下降約45%；在30 ℃±5 ℃(相對濕度65%±5%)時，放置6 mon后，藥材中的含量相對0個月平均下降約3%，變化不大，顆粒制劑均下降約35%，含片下降約48%，糖漿劑下降約38%。說明告依春在藥材中相對比較穩(wěn)定，一般的貯存條件對其影響不大。而含片制劑下降較多是因為含片出現(xiàn)了吸潮現(xiàn)象，其他劑型外觀未見明顯變化。因此，高溫不利于板藍根的保存，告依春會隨溫度升高而變得不穩(wěn)定。因此，對不同廠家、不同產(chǎn)地板藍根及其制劑中告依春含量的考察，應(yīng)注意貯存溫度對含量帶來的影響[2-4]，否則沒有任何對比的意義。 我們對不同流動相和不同色譜柱的分離效果也進行了考察。篩選的流動相有甲醇-0.2 g/L磷酸溶液(7∶93)[1]，甲醇-0.115 /L磷酸溶液(11∶89)[5]，乙腈-水-磷酸-三乙胺(8.50∶90.72∶0.73∶0.05)[6-15]，甲醇-水(15∶85)[15]，乙腈-0.02%磷酸(9:91)等，復(fù)方板藍根顆粒中干擾成分較多，不易分離，只有流動相為乙腈-0.2 g/L磷酸(9∶91)，可以將全部劑型中的告依春很好的分離出來，故將其定為本實驗所用流動相。對于色譜柱，考察了Aglient TC-C18(2) (4.6 mm×250 mm，5 μm)、Aglient HC-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)、Agilent Eclipse Plus C18 (4.6 mm×150 mm，5 μm)、Thermo C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Aglient HC-C18 (4.6 mm×150 mm，5 μm)等不同型號色譜柱的分離效果，發(fā)現(xiàn)在我們實驗色譜條件下，色譜柱型號為(4.6 mm×250 mm，5 μm)的告依春均能達到完全分離，而Aglient HC-C18 (4.6 mm×150 mm，5 μm)，分離度略差。因此應(yīng)選用規(guī)格為(4.6 mm×250 mm，5 μm)的色譜柱。

藥材的提取方法按中國藥典[1]板藍根項下操作。對于其他制劑，因為告依春易溶解于水，故采用水為提取溶劑。另外，由于三種制劑都溶于水，故采用水提超聲10 min，使其快速溶解均勻。

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