文麗芳+丁進(jìn)進(jìn)

摘 要：通過檢測(cè)HR-HPV感染的宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢中hTERC的表達(dá)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較分析，探討其與宮頸病變的相關(guān)性。對(duì)84例HR-HPV陽性（宮頸活檢結(jié)果為正常及慢性炎 12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例 、SCC 12例）應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)（FISH檢測(cè)），分別檢測(cè)患者的宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢組織中hTERC的表達(dá)；應(yīng)用受試者工作特征曲線（ROC曲線），分別確立細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)中宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變的最佳界值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：①在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對(duì)應(yīng)的宮頸脫落細(xì)胞中，hTERC基因擴(kuò)增的陽性率分別為8.33%（1/12）、15.00%（3/20）、80.00%（16/20）、90.00%（18/20）、100%（12/12），與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)（rs=0.713，p<0.001）。②在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對(duì)應(yīng)的的宮頸活檢中，hTERC基因擴(kuò)增的陽性率分別為16.67%（2/12）、25.00%（5/20）、80.00%（16/20）、95.00%（19/20）、100%（12/12），與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)（rs=0.671，p<0.001）。③宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的擴(kuò)增在預(yù)測(cè)≥CINⅡ病變中的敏感度、特異度，分別為92.00%和82.35%；宮頸活檢組織中hTERC預(yù)測(cè)≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.實(shí)驗(yàn)可以得出：hTERC在HR-HPV陽性宮頸病變患者宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢組織中的表達(dá)具有一致性，hTERC在預(yù)測(cè)HR-HPV陽性且宮頸細(xì)胞學(xué)檢查為異常的宮頸病變的病理結(jié)果中具有重要的意義。

關(guān)鍵詞：hTERC；宮頸；脫落細(xì)胞；活檢

中圖分類號(hào)：R737.33 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：2095-6835（2014）11-0155-02

hTERC（Human Telomerase RNA Component，人端粒酶RNA組成基因）位于人類3號(hào)染色體長臂，其異常擴(kuò)增可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。目前研究證明，hTERC在子宮頸鱗癌或腺癌、食管鱗癌、肺鱗癌等多種惡性腫瘤中存在異常擴(kuò)增，與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。目前研究顯示，hTERC在宮頸活檢和宮頸脫落細(xì)胞中的表達(dá)與宮頸病變具有一定的相關(guān)性。HR-HPV（High-risk Human Papilloma Virus，高危型人乳頭瘤病毒）感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的主要致病原因，這一點(diǎn)已達(dá)成共識(shí)，但在15%～20%HPV持續(xù)感染病例中，只有低于5%發(fā)生宮頸癌。因此，如何從HPV感染者中分流出真正具有癌變風(fēng)險(xiǎn)的人群，是當(dāng)前所面臨的難題。本研究通過檢測(cè)HR-HPV陽性宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢中hTERC的表達(dá)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較分析，探討其在HR-HPV陽性患者宮頸病變中診斷分流的意義。

1 資料來源

選擇2013-07—2014-04就診于山西省汾陽醫(yī)院門診HR-HPV陽性，且均有宮頸活檢結(jié)果的宮頸脫落細(xì)胞學(xué)標(biāo)本84例?；颊吣挲g27～62歲，中位年齡37歲，均為有性生活婦女，其中宮頸活檢結(jié)果為正常12例、CINⅠ20例、CINⅡ20例、CINⅢ20例、SCC12例。用熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢組織中hTERC基因擴(kuò)增情況。

2 實(shí)驗(yàn)方法

應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)，按照參考文獻(xiàn)分別檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢中hTERC基因拷貝數(shù)，hTERC/CSP3DNA雙色熒光探針（購自廣州安必平科技有限公司）。hTERC DNA探針作為檢測(cè)探針，雜交到3號(hào)染色體長臂，熒光信號(hào)為紅色（四甲基羅丹明）；CSP3DNA作為對(duì)照探針，雜交到3號(hào)染色體著絲粒，熒光信號(hào)為綠。正常細(xì)胞為單個(gè)細(xì)胞核中紅綠信號(hào)各2個(gè)，hTERC基因擴(kuò)增異常細(xì)胞為單個(gè)細(xì)胞核中紅信號(hào)>2個(gè)，綠信號(hào)≥2個(gè)。每張片子隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，記錄陽性信號(hào)細(xì)胞的個(gè)數(shù)和信號(hào)模式，繪制ROC曲線，確定高度鱗狀上皮內(nèi)病變（CINⅡ/Ⅲ/SCC）的陽性界值。本實(shí)驗(yàn)宮頸脫落細(xì)胞中驗(yàn)臨界值為6%，宮頸活檢中的臨界值為11%，

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS1 6.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，比較各級(jí)病變中hTERC基因的擴(kuò)增的陽性率；采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05；利用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，分析hTERC的表達(dá)與宮頸病變的相關(guān)性。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 宮頸脫落細(xì)胞中hTERC基因的檢測(cè)結(jié)果

在84例患者中，50例hTERC擴(kuò)增陽性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對(duì)應(yīng)的宮頸脫落細(xì)胞中hTERC基因擴(kuò)增的陽性率分別為8.33%（1/12）、15.00%（3/20）、80.00%（16/20）、90.00%（18/20）、100%（12/12），五組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（x2=48.858，p<0.001）。Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)顯示宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的擴(kuò)增與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)，rs=0.713，p<0.001）。

宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的擴(kuò)增在預(yù)測(cè)≥CINⅡ病變中的敏感度、特異度，分別為92.00%和82.35%.

4.2 宮頸活檢組織中hTERC基因的檢測(cè)結(jié)果

在84例患者中，54例hTERC擴(kuò)增陽性。在正常及慢性炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 、SCC組所對(duì)應(yīng)的的宮頸活檢中hTERC基因擴(kuò)增的陽性率分別為16.67%（2/12）、25.00%（5/20）、80.00%（16/20）、95.00%（19/20）、100%（12/12），五組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（x2=42.332，p<0.001）。Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)顯示宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的擴(kuò)增與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)，rs=0.671，p<0.001）。endprint

宮頸活檢組織中hTERC預(yù)測(cè)≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.

5 討論

hTERC與端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶、端粒酶結(jié)合蛋白等共同參與端粒的組成，在人類端粒酶RNA基因中，在長約450個(gè)堿基的人端粒酶RNA序列中，有一段長11個(gè)核苷酸區(qū)域，發(fā)生在該模板區(qū)域的hTERC突變，將導(dǎo)致端粒酶功能改變，從而出現(xiàn)染色體異常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次從腎癌293細(xì)胞系eDNA文庫中篩選出，定位于3q26區(qū)，是合成端粒重復(fù)序列的模板。其模板序列為5—CUAACCCUAAC—3。雖然大量實(shí)驗(yàn)證明，HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病變患者攜帶HPV癌基因；但在15%～20%HPV持續(xù)感染病例中，只有低于5%發(fā)生宮頸癌。只有當(dāng)病毒持續(xù)感染且整合入宿主細(xì)胞，才會(huì)發(fā)展為宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變。目前研究顯示，hTERC在宮頸病變中的表達(dá)與宮頸病變具有一定的相關(guān)性。本課題較之前的研究不同，主要集中在對(duì)HR-HPV感染的宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢組織中的表達(dá)，通過檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞與宮頸活檢中hTERC基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者的表達(dá)具有很好的一致性，hTERC的表達(dá)與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)，預(yù)測(cè)宮頸高度上皮內(nèi)病變的敏感度和特異度均較高。宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的表達(dá)完全可以替代宮頸活檢組織中hTERC的表達(dá)，對(duì)宮頸病變的活檢結(jié)果提供一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。對(duì)于hTERC擴(kuò)增陽性的宮頸低度病變應(yīng)密切隨訪，對(duì)于hTERC擴(kuò)增陰性的宮頸低度病變可延長隨訪時(shí)間；而對(duì)于hTERC擴(kuò)增陽性的宮頸高度上皮內(nèi)病變，要警惕宮頸浸潤癌的可能，并且及時(shí)治療。

關(guān)于FISH檢測(cè)宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變中hTERC最佳界值的確定，目前主要有兩種方法：一種為均數(shù)加減3倍的標(biāo)準(zhǔn)差；另一種為以宮頸活檢為≥CINⅡ?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn)，繪制受試者特征曲線（ROC曲線），我們?cè)谶@里更推薦后者。該界值的范圍國內(nèi)外報(bào)道多在5%～20%，本研究中應(yīng)用ROC曲線確立宮頸脫落細(xì)胞中和宮頸活檢中高度鱗狀上皮內(nèi)病變界值，分別為6%和11%，二者的誤差考慮為宮頸活檢組織中FISH細(xì)胞雜交的成功率略高于宮頸脫落細(xì)胞。對(duì)于不同文獻(xiàn)報(bào)道中界值的誤差考慮，與樣本含量、是否合并HPV的感染及感染類型具有一定的相關(guān)性?？傊瑢m頸脫落細(xì)胞、宮頸活檢組織中hTERC基因擴(kuò)增與宮頸癌前病變和宮頸癌的發(fā)生相關(guān)，利用FISH技術(shù)檢測(cè)hTERC的擴(kuò)增，可對(duì)HR-HPV陽性患者病理診斷和可能的進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測(cè)，避免宮頸癌前病變的診斷不足、宮頸低度病變的過度治療，對(duì)長期無價(jià)值的隨訪等具有一定的意義。

參考文獻(xiàn)

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

[2]Andersson S，Wallin KL，Hellstrom AC，et a1.Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas[J].Br J cancer，2006（03）.

[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

[4]Bobadilla D，Enriquez EL，Alvarez G，et a1.An interphase fluorescenee in situ hybridization assay for the detection of 3q26.2/EVI，rearrangements in myeloid malignancies[J].Br J Haema—tol，2007（06）.

[5]李靜然，魏麗惠，劉寧，等.應(yīng)用雙色間期FISH技術(shù)中宮頸脫落細(xì)胞取材及制片方法的探討[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2007（06）.

[6]李素紅，劉玲玲，馬海霞，等.宮頸上皮癌變過程中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因擴(kuò)增與人乳頭狀瘤病毒的表達(dá)[J].中華病理學(xué)雜志，2012（02）.

[7]Feng J，F(xiàn)unk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

〔編輯：李玨〕endprint

宮頸活檢組織中hTERC預(yù)測(cè)≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.

5 討論

hTERC與端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶、端粒酶結(jié)合蛋白等共同參與端粒的組成，在人類端粒酶RNA基因中，在長約450個(gè)堿基的人端粒酶RNA序列中，有一段長11個(gè)核苷酸區(qū)域，發(fā)生在該模板區(qū)域的hTERC突變，將導(dǎo)致端粒酶功能改變，從而出現(xiàn)染色體異常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次從腎癌293細(xì)胞系eDNA文庫中篩選出，定位于3q26區(qū)，是合成端粒重復(fù)序列的模板。其模板序列為5—CUAACCCUAAC—3。雖然大量實(shí)驗(yàn)證明，HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病變患者攜帶HPV癌基因；但在15%～20%HPV持續(xù)感染病例中，只有低于5%發(fā)生宮頸癌。只有當(dāng)病毒持續(xù)感染且整合入宿主細(xì)胞，才會(huì)發(fā)展為宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變。目前研究顯示，hTERC在宮頸病變中的表達(dá)與宮頸病變具有一定的相關(guān)性。本課題較之前的研究不同，主要集中在對(duì)HR-HPV感染的宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢組織中的表達(dá)，通過檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞與宮頸活檢中hTERC基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者的表達(dá)具有很好的一致性，hTERC的表達(dá)與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)，預(yù)測(cè)宮頸高度上皮內(nèi)病變的敏感度和特異度均較高。宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的表達(dá)完全可以替代宮頸活檢組織中hTERC的表達(dá)，對(duì)宮頸病變的活檢結(jié)果提供一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。對(duì)于hTERC擴(kuò)增陽性的宮頸低度病變應(yīng)密切隨訪，對(duì)于hTERC擴(kuò)增陰性的宮頸低度病變可延長隨訪時(shí)間；而對(duì)于hTERC擴(kuò)增陽性的宮頸高度上皮內(nèi)病變，要警惕宮頸浸潤癌的可能，并且及時(shí)治療。

關(guān)于FISH檢測(cè)宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變中hTERC最佳界值的確定，目前主要有兩種方法：一種為均數(shù)加減3倍的標(biāo)準(zhǔn)差；另一種為以宮頸活檢為≥CINⅡ?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn)，繪制受試者特征曲線（ROC曲線），我們?cè)谶@里更推薦后者。該界值的范圍國內(nèi)外報(bào)道多在5%～20%，本研究中應(yīng)用ROC曲線確立宮頸脫落細(xì)胞中和宮頸活檢中高度鱗狀上皮內(nèi)病變界值，分別為6%和11%，二者的誤差考慮為宮頸活檢組織中FISH細(xì)胞雜交的成功率略高于宮頸脫落細(xì)胞。對(duì)于不同文獻(xiàn)報(bào)道中界值的誤差考慮，與樣本含量、是否合并HPV的感染及感染類型具有一定的相關(guān)性。總之，宮頸脫落細(xì)胞、宮頸活檢組織中hTERC基因擴(kuò)增與宮頸癌前病變和宮頸癌的發(fā)生相關(guān)，利用FISH技術(shù)檢測(cè)hTERC的擴(kuò)增，可對(duì)HR-HPV陽性患者病理診斷和可能的進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測(cè)，避免宮頸癌前病變的診斷不足、宮頸低度病變的過度治療，對(duì)長期無價(jià)值的隨訪等具有一定的意義。

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[7]Feng J，F(xiàn)unk WD，Wang SS，et a1.The RNA componet of human telomerase [J].Science，1995（522a）.

〔編輯：李玨〕endprint

宮頸活檢組織中hTERC預(yù)測(cè)≥CINⅡ的敏感度、特異度，分別為87.03%和83.33%.

5 討論

hTERC與端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶、端粒酶結(jié)合蛋白等共同參與端粒的組成，在人類端粒酶RNA基因中，在長約450個(gè)堿基的人端粒酶RNA序列中，有一段長11個(gè)核苷酸區(qū)域，發(fā)生在該模板區(qū)域的hTERC突變，將導(dǎo)致端粒酶功能改變，從而出現(xiàn)染色體異常。 hTERC基因由Feng等于1995年首次從腎癌293細(xì)胞系eDNA文庫中篩選出，定位于3q26區(qū)，是合成端粒重復(fù)序列的模板。其模板序列為5—CUAACCCUAAC—3。雖然大量實(shí)驗(yàn)證明，HPV感染是宮頸癌的主要致病因素，甚至95%的癌前病變患者攜帶HPV癌基因；但在15%～20%HPV持續(xù)感染病例中，只有低于5%發(fā)生宮頸癌。只有當(dāng)病毒持續(xù)感染且整合入宿主細(xì)胞，才會(huì)發(fā)展為宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變。目前研究顯示，hTERC在宮頸病變中的表達(dá)與宮頸病變具有一定的相關(guān)性。本課題較之前的研究不同，主要集中在對(duì)HR-HPV感染的宮頸脫落細(xì)胞和宮頸活檢組織中的表達(dá)，通過檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞與宮頸活檢中hTERC基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者的表達(dá)具有很好的一致性，hTERC的表達(dá)與宮頸病變的惡性程度呈正相關(guān)，預(yù)測(cè)宮頸高度上皮內(nèi)病變的敏感度和特異度均較高。宮頸脫落細(xì)胞中hTERC的表達(dá)完全可以替代宮頸活檢組織中hTERC的表達(dá)，對(duì)宮頸病變的活檢結(jié)果提供一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。對(duì)于hTERC擴(kuò)增陽性的宮頸低度病變應(yīng)密切隨訪，對(duì)于hTERC擴(kuò)增陰性的宮頸低度病變可延長隨訪時(shí)間；而對(duì)于hTERC擴(kuò)增陽性的宮頸高度上皮內(nèi)病變，要警惕宮頸浸潤癌的可能，并且及時(shí)治療。

關(guān)于FISH檢測(cè)宮頸高度鱗狀上皮內(nèi)病變中hTERC最佳界值的確定，目前主要有兩種方法：一種為均數(shù)加減3倍的標(biāo)準(zhǔn)差；另一種為以宮頸活檢為≥CINⅡ?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn)，繪制受試者特征曲線（ROC曲線），我們?cè)谶@里更推薦后者。該界值的范圍國內(nèi)外報(bào)道多在5%～20%，本研究中應(yīng)用ROC曲線確立宮頸脫落細(xì)胞中和宮頸活檢中高度鱗狀上皮內(nèi)病變界值，分別為6%和11%，二者的誤差考慮為宮頸活檢組織中FISH細(xì)胞雜交的成功率略高于宮頸脫落細(xì)胞。對(duì)于不同文獻(xiàn)報(bào)道中界值的誤差考慮，與樣本含量、是否合并HPV的感染及感染類型具有一定的相關(guān)性?？傊?，宮頸脫落細(xì)胞、宮頸活檢組織中hTERC基因擴(kuò)增與宮頸癌前病變和宮頸癌的發(fā)生相關(guān)，利用FISH技術(shù)檢測(cè)hTERC的擴(kuò)增，可對(duì)HR-HPV陽性患者病理診斷和可能的進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測(cè)，避免宮頸癌前病變的診斷不足、宮頸低度病變的過度治療，對(duì)長期無價(jià)值的隨訪等具有一定的意義。

參考文獻(xiàn)

[1]Heselmeyer·Haddad K，Sommerfeld K，White NM，et a1.Ge-nomic amplification of the human telomerase gene（TERC）in papsmears predicts the development of cervical cancer[J].Am J Pathol，2005（04）.

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[3]Chen Q，Wang X，Ru Y，et a1.Amplification of the telomcrascRNA component gene in the process of human esophageal carcinogenesis[J].Tohoku J Exp Med，2011（02）.

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〔編輯：李玨〕endprint