李春英等

【摘要】 目的：對皺葉酸模主要藥效成分大黃素在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)進(jìn)行研究，以反映皺葉酸模藥材在大鼠體內(nèi)的作用規(guī)律。方法：采用高效液相色譜法檢測大鼠的血液、心、脾、腎等組織、尿液及糞便中大黃素含量。結(jié)果：大黃素的血藥濃度—時間曲線呈現(xiàn)雙峰形狀；灌胃后大黃素在大鼠心、脾、腎等組織均有分布，且24 h后基本消除；大黃素以原形形式排泄較少。結(jié)論：皺葉酸膜中大黃素在大鼠體內(nèi)吸收入血迅速，并快速分布至各組織，且少數(shù)以原形排泄，該研究有助于闡明皺葉酸膜藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用規(guī)律。

【關(guān)鍵詞】 皺葉酸模提取物； 大黃素； 體內(nèi)過程； 參數(shù)測定

【Abstract】 Objective：To study the vivo pharmacokinetics of the major components of Rumex crispus emodin in rats， to reflect the wrinkle medicinal Ye Suanmo in laws of rats in vivo.Method：The heart， spleen， kidney chromatography of rat tissue， the content of emodin in urine and feces were detected by using high performance liquid blood.Result：Emodin blood drug concentration time curve showed a Shuangfeng shape， after intragastric administration of emodin in heart， spleen， kidney and other tissues in rats after 24 h distribution， and basic elimination， emodin in the base form excreted less.Conclusion：The Savoy acid membrane of emodin in rats in vivo absorption into theblood quickly， and rapid distribution to each organization， and few in the baseexcretion， this research has the material base and action rules help to elucidate the pharmacological effect of folic acid membrane wrinkle.

【Key words】 Rumex crispus extract； Emodin； Pharmacokinetics； Parameter determination

First-authors address：Daqing Medical Junior College，Daqing 163312，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.18.013

皺葉酸模Rumex crispus L.為蓼科（Polygonaceae）酸模屬植物，俗名土大黃。為多年生草本植物，根、根莖、葉及全草入藥，性味苦、寒，具有清熱解毒、瀉火通便、止血、殺蟲等功效。在黑龍江省大慶市區(qū)湖泊沿岸及水溪旁廣泛分布，資源豐富。民間主要用于治療鼻出血、子宮出血、血小板減少性紫癜、腸道積滯、大便秘結(jié)等癥[1]。目前對皺葉酸?；瘜W(xué)成分的研究文獻(xiàn)[2-9]報道的主要為蒽醌類、黃酮類及多糖類成分，其中蒽醌類成分大黃素為重要的藥效成分之一。本文以大黃素為指標(biāo)，應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)，測定大鼠灌胃給予皺葉酸膜提取物后，大黃素在血漿、組織、排泄物中的含量變化，了解其在體內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律，并為臨床合理用藥，制定最佳的給藥方案提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀、BP211D電子天平（sartorius）、RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、KQ5200超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、SHE-D（Ⅲ）型循環(huán)水式真空泵（鞏義市科瑞儀器有限公司）TGL-16C離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 藥品與試劑 大黃素標(biāo)準(zhǔn)品（批號0756-200110）購自中國藥品生物制品檢定所、甲醇（色譜純）、冰醋酸、乙醚、硫酸、乙酸乙酯、氯仿等均為分析純。

1.3 實驗動物 SD大鼠10只，體重（200±20）g，雌雄各半，由大慶醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校動物室提供。

1.4 方法

1.4.1 皺葉酸膜提取物樣品的制備 取皺葉酸膜干燥全草藥材，粉碎，80%乙醇溶液浸泡48 h后，6倍體積回流提取2次，每次2 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮成皺葉酸膜浸膏，干燥。稱取皺葉酸膜浸膏20.3 g，至燒杯中，分次加入0.5%羧甲基纖維素鈉溶液共200 mL，超聲助溶，制成大黃素濃度為5.6 mg/mL的混懸液，備用。

1.4.2 色譜條件 色譜柱：Zorbax SB-C18柱（5 ?m，250 mm×4.6 mm）；流動相冰醋酸（99.9：0.1）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 ?L，采用外標(biāo)法定量測定血漿大黃素濃度。

1.4.3 對照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取大黃素對照品約5.3 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

1.5 皺葉酸模提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)研究endprint

1.5.1 給藥與采血 SD大鼠10只，雌雄各半，給藥前禁食12 h，自由飲水，灌胃皺葉酸模提取物混懸液，劑量1.0 mL/100 g（相當(dāng)于大黃素0.8 mg/100 g），灌胃后眼眶靜脈取血約1 mL，血樣經(jīng)肝素鈉抗凝后分取血漿，按血漿樣品處理后測定。

1.5.2 血漿樣品處理方法 取大鼠血漿200 μL，加入30%硫酸200 μL，旋渦混勻30 s，水浴水解30 min。冷卻，加入乙醚2 mL，漩渦混合提取5 min，3000 r/min離心5 min，傾出乙醚層，水相再用2 mL乙醚同法萃取，合并乙醚液，通氮氣揮干，殘渣用100 μL甲醇溶解，取20 μL進(jìn)樣。

1.5.3 藥代動力學(xué)研究 SD大鼠8只，雌雄各半，灌胃皺葉酸模提取物混懸液后，分別于灌胃后5、15、30 min及1、2、3、4、6、9、12、24 h，眼眶靜脈取血約1 mL，肝素鈉抗凝后分取血漿，按血漿樣品處理后測定。

1.6 皺葉酸模提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)組織分布研究

1.6.1 組織樣品的預(yù)處理 組織剪碎后取0.2 g，加2 mL生理鹽水勻漿后置于具塞離心管中，加入鹽酸0.3 mL，渦旋混合30 s，水浴加熱20 min。放置室溫，加入乙酸乙酯2.5 mL，渦旋混合提取5 min，離心10 min，取乙酸乙酯層，減壓濃縮至干，精密加入乙醇0.5 mL，渦旋混勻，超聲1 min助溶，微孔濾膜濾過，濾液待測。

1.6.2 組織分布研究 SD大鼠，雌雄各半，給藥前禁食12 h，自由飲水，灌胃皺葉酸模提取物混懸液，劑量1.0 mL/100 g，灌胃后5、10、30、60 min，處死大鼠，迅速取腦、心、肝、腎、脾組織，組織用0.9%氯化鈉溶液沖凈表面血液及內(nèi)容物，分別稱量各臟器濕重，裝入自封袋，置于-20 ℃冰箱中保存至分析測定。按組織樣品預(yù)處理方法處理后，測各組織中大黃素含量。

1.7 皺葉酸模提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)的排泄特點研究

1.7.1 大鼠糞便的預(yù)處理方法 取大鼠糞便樣品，混勻，精密稱取約0.5 g，置錐形瓶中，加乙醇2 mL，水浴上回流1 h，放冷，濾過，濾液置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇一鹽酸溶液（10：1）15 mL，水解1 h，立即冷卻，用氯仿強力振搖提取3次，每次15 mL，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘渣用甲醇2.5 mL溶解，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.7.2 大鼠尿樣的預(yù)處理方法 取大鼠尿樣3 mL，加人30%鹽酸3 mL，旋渦混勻，水浴水解30 min。冷卻，氯仿強力振搖提取3次，每次5 mL，合并氯仿液，揮干氯仿，殘渣用甲醇2.5 mL溶解，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.7.3 糞便及尿液大黃素含量測定 SD大鼠按1.0 mL/100 g

劑量給予皺葉酸膜提取物，收集給藥后0～2、2～4、4～6、6～8、8～10、10～12、12～24 h的糞便和尿液，按大鼠糞便樣品和尿液樣品的處理方法進(jìn)行處理，測定大黃素含量。

2 結(jié)果

2.1 皺葉酸模提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)研究

2.1.1 分析方法驗證

2.1.1.1 線性關(guān)系的考察 精密量取不同濃度的大黃素對照品溶液各20 μL，分別加入200 μL空白大鼠血漿中，按血漿樣品的處理方法進(jìn)行處理，取20 μL進(jìn)樣測定，以峰面積A對大黃素血漿含量C（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=0.7485X-0.065，相關(guān)系數(shù)r=0.9991，結(jié)果表明大黃素在0.53～3.71 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.1.2 精密度試驗 取大黃素對照品溶液20 μL，用甲醇稀釋到100 μL，進(jìn)樣分析，連續(xù)進(jìn)樣5次，測得峰面積，計算出大黃素的精密度0.8%。

2.1.1.3 回收率試驗 空白血漿中加入大黃素對照品甲醇溶液，按血漿樣品的處理方法進(jìn)行處理，記錄其峰面積，以測得量與加入量之比計算回收率，為95.9%～107.5%，RSD為1.2%。

2.1.2 藥代動力學(xué)參數(shù) 將測得的血藥濃度數(shù)據(jù)用藥代動力學(xué)程序處理，結(jié)果表明皺葉酸膜提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)的藥代過程符合二房室模型，主要藥代動力學(xué)參數(shù)及統(tǒng)計結(jié)果見表1，其平均血藥濃度-時間（藥-時）曲線呈現(xiàn)雙峰形狀，見圖1。

2.2 皺液酸模提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)組織分布研究

2.2.1 分析方法驗證

2.2.1.1 線性關(guān)系的考察 精密量取不同濃度的大黃素對照品溶液各20 μL，分別加入200 μL空白大鼠組織中，按組織樣品的處理方法進(jìn)行處理，取20 μL進(jìn)樣測定，以峰面積A對大黃素組織含量C進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表2。

2.2.1.2 精密度與回收率試驗 各組織按精密度及回收率實驗方法進(jìn)行試驗，結(jié)果均能滿足生物樣品測定的要求。

2.2.2 大鼠體內(nèi)各臟器組織中大黃素濃度測定 大鼠按1.0 mL/100 g灌胃皺葉酸模提取物混懸液后5、10、30、60 min，處死大鼠，取出組織，進(jìn)行含量測定，發(fā)現(xiàn)大黃素在大鼠心、脾、腎等組織均有分布，且24 h后基本消除，各組織結(jié)果見表3。

2.3 皺葉酸模提取物中大黃素在大鼠體內(nèi)的排泄特點研究

2.3.1 分析方法驗證 按線性關(guān)系、精密度及回收率實驗方法試驗，糞便的回歸方程為Y=0.107X-0.198，R=0.9997，尿液的回歸方程為Y=0.176X-13.14，R=0.9996，尿液和糞便的精密度和回收率試驗結(jié)果均能滿足生物樣品測定的要求。

2.3.2 糞便及尿液中大黃素含量測定 收集大鼠灌胃后0～2、2～4、4～6、6～8、8～10、10～12、12～24 h的糞便和尿液，測定大黃素含量，大黃素以原形形式排泄較少，見表4。endprint

3 討論

本文以研究皺葉酸膜中主要的藥效成分蒽醌類化合物大黃素為著眼點，對大鼠灌胃給予皺葉酸膜提取物，研究大黃素在大鼠體內(nèi)吸收、分布及排泄等特點，全面揭示了皺葉酸膜提取物在大鼠體內(nèi)的吸收、分布及排泄規(guī)律。本文采用高效液相色譜法測定血液、組織及排泄物中大黃素含量，方法驗證結(jié)果表明各方法線性、精密度及回收率均符合要求，且分析時間短、雜質(zhì)干擾少、靈敏度高。

實驗中大黃素的血藥濃度—時間曲線呈現(xiàn)的雙峰形狀，與文獻(xiàn)[10]報道的大黃素藥時曲線相符，這可能是由于大黃屬于通腸利便藥物，灌胃后對胃腸刺激較大，吸收功能迅速下降，經(jīng)一定時間的恢復(fù)之后，胃腸吸收逐漸增加，恢復(fù)正常，因此在藥時曲線中出現(xiàn)兩個峰。

大黃素可通過血腦屏障分布到大鼠腦組織中，給藥后10 min大黃素在腦組織中分布已較豐富，在其他組織中，大黃素的分布由高到低依次為肝、腎、脾、心。大黃素對組織具有較高的親和力，但24 h后，基本消除完全，不易蓄積[11]。

糞便樣本中大黃素的含量遠(yuǎn)低于灌胃給予大鼠的皺葉酸膜提取物中大黃素的量，與結(jié)合蒽醌在腸道被代謝后具有瀉下作用一致，同時可看到大黃素以其原形排泄較少。

參考文獻(xiàn)

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[10]盧永昌，賈麗紅，宋永朋，等.HPLC測定麻花艽地上和地下部分的4種有效成分[J].華西藥學(xué)雜志，2011，23（4）：26-28.

[11]蔣智鋼.利用《藥物代謝動力學(xué)》程序計算藥動學(xué)參數(shù)[J].四川畜牧獸醫(yī)，2004，31（6）：59-60.

（收稿日期：2014-04-24） （本文編輯：蔡元元）endprint

3 討論

本文以研究皺葉酸膜中主要的藥效成分蒽醌類化合物大黃素為著眼點，對大鼠灌胃給予皺葉酸膜提取物，研究大黃素在大鼠體內(nèi)吸收、分布及排泄等特點，全面揭示了皺葉酸膜提取物在大鼠體內(nèi)的吸收、分布及排泄規(guī)律。本文采用高效液相色譜法測定血液、組織及排泄物中大黃素含量，方法驗證結(jié)果表明各方法線性、精密度及回收率均符合要求，且分析時間短、雜質(zhì)干擾少、靈敏度高。

實驗中大黃素的血藥濃度—時間曲線呈現(xiàn)的雙峰形狀，與文獻(xiàn)[10]報道的大黃素藥時曲線相符，這可能是由于大黃屬于通腸利便藥物，灌胃后對胃腸刺激較大，吸收功能迅速下降，經(jīng)一定時間的恢復(fù)之后，胃腸吸收逐漸增加，恢復(fù)正常，因此在藥時曲線中出現(xiàn)兩個峰。

大黃素可通過血腦屏障分布到大鼠腦組織中，給藥后10 min大黃素在腦組織中分布已較豐富，在其他組織中，大黃素的分布由高到低依次為肝、腎、脾、心。大黃素對組織具有較高的親和力，但24 h后，基本消除完全，不易蓄積[11]。

糞便樣本中大黃素的含量遠(yuǎn)低于灌胃給予大鼠的皺葉酸膜提取物中大黃素的量，與結(jié)合蒽醌在腸道被代謝后具有瀉下作用一致，同時可看到大黃素以其原形排泄較少。

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[11]蔣智鋼.利用《藥物代謝動力學(xué)》程序計算藥動學(xué)參數(shù)[J].四川畜牧獸醫(yī)，2004，31（6）：59-60.

（收稿日期：2014-04-24） （本文編輯：蔡元元）endprint

3 討論

本文以研究皺葉酸膜中主要的藥效成分蒽醌類化合物大黃素為著眼點，對大鼠灌胃給予皺葉酸膜提取物，研究大黃素在大鼠體內(nèi)吸收、分布及排泄等特點，全面揭示了皺葉酸膜提取物在大鼠體內(nèi)的吸收、分布及排泄規(guī)律。本文采用高效液相色譜法測定血液、組織及排泄物中大黃素含量，方法驗證結(jié)果表明各方法線性、精密度及回收率均符合要求，且分析時間短、雜質(zhì)干擾少、靈敏度高。

實驗中大黃素的血藥濃度—時間曲線呈現(xiàn)的雙峰形狀，與文獻(xiàn)[10]報道的大黃素藥時曲線相符，這可能是由于大黃屬于通腸利便藥物，灌胃后對胃腸刺激較大，吸收功能迅速下降，經(jīng)一定時間的恢復(fù)之后，胃腸吸收逐漸增加，恢復(fù)正常，因此在藥時曲線中出現(xiàn)兩個峰。

大黃素可通過血腦屏障分布到大鼠腦組織中，給藥后10 min大黃素在腦組織中分布已較豐富，在其他組織中，大黃素的分布由高到低依次為肝、腎、脾、心。大黃素對組織具有較高的親和力，但24 h后，基本消除完全，不易蓄積[11]。

糞便樣本中大黃素的含量遠(yuǎn)低于灌胃給予大鼠的皺葉酸膜提取物中大黃素的量，與結(jié)合蒽醌在腸道被代謝后具有瀉下作用一致，同時可看到大黃素以其原形排泄較少。

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[6] Bakan S，Daut Zdemir A，Günaydln K，et al.Analysis of anthraquinones in Rumex crispus by micellar electrokinetic chromatography[J].Talanta，2007，71（2）：747-750.

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[8]馮素香，徐會平，李建生，等.大鼠血漿中蘆薈大黃素濃度的固相萃取-高效液相色譜法測定及其藥代動力學(xué)研究[J].中國新藥雜志，2012，21（8）：45-46.

[9]徐中海，劉克清，曾棟，等.甘青青蘭揮發(fā)油成分超臨界二氧化碳萃取與氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，14（8）：12-15.

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[11]蔣智鋼.利用《藥物代謝動力學(xué)》程序計算藥動學(xué)參數(shù)[J].四川畜牧獸醫(yī)，2004，31（6）：59-60.

（收稿日期：2014-04-24） （本文編輯：蔡元元）endprint