金銘等

【摘要】 目的：探討β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠海馬組織及Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。方法：經(jīng)過(guò)敞箱實(shí)驗(yàn)選取得分相近的2～3個(gè)月齡SD大鼠80只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組，每組20只，結(jié)合孤養(yǎng)并給予慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)刺激，復(fù)制抑郁模型，于造模成功第2天開(kāi)始，分別給予氟西汀組和β-細(xì)辛醚組1.2 mg/（kg·d）氟西汀和25 mg/（kg·d）β-細(xì)辛醚灌胃，模型組與正常組給予等體積生理鹽水。于第21天對(duì)大鼠處死取腦，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白相對(duì)含量。結(jié)果：模型組大鼠海馬組織神經(jīng)元數(shù)目減少，散在排列，細(xì)胞核發(fā)生固縮變形，CA1區(qū)，CA3區(qū)變化顯著。與模型組比較，β-細(xì)辛醚組、氟西汀組Bax蛋白表達(dá)均顯著降低（P<0.01）。結(jié)論：β-細(xì)辛醚可以降低大鼠海馬組織Bax蛋白表達(dá)，促進(jìn)Bcl-2蛋白表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 β-細(xì)辛醚； 海馬； B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2； Bax

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of β-assrone on the hippocampus and the expressions of protein Bax and Bcl-2 in the hippocampus of depression model rats.Method：According to the open field test，adult Sprague-Dawley rates with similar scores were randomly divided into 4 groups， each group had 20 cases. Solitary and chronic mild unpredictability stimulation on each one except the normal control group， copy the model of depression. On the second day of a successful model replication， the fluoxetine control group and the β-asarone group were given 1.2 mg/（kg·d） the fluoxetine and 25 mg/（kg·d） the β-asarone. The model control group and the normal control group were given equal volumes of normal saline. On the 21th day， rats were to be put to death and take brain tissue. The protein expression of Bax and Bcl-2 in the hippocampus were tested by immunohistochemical staining method.Result：The numbers of neurons were reduced in the hippocampus of model group， scattered in the arrangement， the nucleus of neurons were pycnosis deformation，especially on the region of CA1 and CA3. Compared with model group， the protein expression of Bax reduced and Bcl-2 increased with statistical significance in the hippocampus in fluoxetine control group and β-asarone group（P<0.01）.Conclusion：β-asarone can reduce the protein expression of Bax， while promote the protein expression of Bcl-2 in the hippocampus of depression model rats.

【Key words】 β-asarone； Hippocampus； B celll ymphoma/leukemis-2； Bcl-2 associated X protein

First-authors address：Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.18.012

抑郁癥（depression）是臨床較為常見(jiàn)的精神疾病性障礙，病因較為復(fù)雜，病程較長(zhǎng)，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1-2]。中藥石菖蒲具有提神醒腦、開(kāi)竅益智的作用，是中醫(yī)治療腦病常用藥物之一，現(xiàn)代藥理學(xué)研究提示，石菖蒲具有較好的抗抑郁作用[3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究石菖蒲主要有效成分β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠海馬區(qū)的作用，探討其對(duì)海馬神經(jīng)元凋亡因子Bax（Bcl-2 associated X protein，Bax）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemis-2，Bcl-2）表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 2～3個(gè)月齡的清潔級(jí)雄性SD大鼠，體重180～200 g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（遼）2008-0002。

1.1.2 藥品 鹽酸氟西汀膠囊（由蘇州俞氏藥業(yè)有限公司提供），β-細(xì)辛醚標(biāo)準(zhǔn)品（由天津一方科技有限公司提供）。endprint

1.1.3 其他材料 試劑兔抗鼠Bax抗體（購(gòu)于Abcam公司）、兔抗鼠Bcl-2抗體（購(gòu)于Abcam公司）。免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑、PBS緩沖液（購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.1.4 儀器 光學(xué)顯微鏡CX11R BSF（Olympus），圖像分析系統(tǒng)DP801（Alphamiager公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由進(jìn)食水。保持環(huán)境干燥，通風(fēng)，溫度18～20 ℃，無(wú)噪聲，無(wú)人為光源。進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)（Open-field-test），選取得分相近的80只大鼠進(jìn)行分組，按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組：正常組、β-細(xì)辛醚組、氟西汀組、模型組，每組20只。

1.2.2 具體方法 除正常組外每籠單只飼養(yǎng)，正常組不給予任何刺激。β-細(xì)辛醚組、氟西汀組、模型組，均接受慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激刺激（Chronic unpredictable mild stress stimulation，CUMS）：每天進(jìn)行一種不可預(yù)知的刺激，持續(xù)21 d，每種刺激使用不超過(guò)4次，避免大鼠適應(yīng)刺激，刺激方法根據(jù)Katz法改進(jìn)。具體方法：搖晃（30 min），傾斜鼠籠（45°，24 h），禁食水（24 h），束縛（24 h），熱刺激（45 ℃，5 min），冰水游泳（4 ℃，5 min），夾尾（3 min），潮濕環(huán)境（100 g墊料中加入200 mL水，24 h）。造模開(kāi)始計(jì)為第1天。第2天起，β-細(xì)辛醚組給予10 g/L的β-細(xì)辛醚組混懸液，按25 mg/（kg·d）灌胃給藥。氟西汀組給予10 g/L的氟西汀混懸液，按1.2 mg/（kg·d）灌胃給藥。模型組給予等量生理鹽水，每天灌胃一次。

1.2.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠海馬組織Bax、Bcl-2蛋白表達(dá) 石蠟切片脫蠟和水化后進(jìn)行抗原修復(fù)。采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶（SP）法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并DAB顯色，經(jīng)過(guò)蘇木素復(fù)染、PBS洗滌、鹽酸乙醇分化后返藍(lán)，常規(guī)脫水、透明、中性樹(shù)膠封片。每一張切片在陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域挑選10個(gè)無(wú)重疊視野，使用Olympus顯微鏡、DP801形態(tài)分析軟件進(jìn)行圖像采集處理，圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，測(cè)出Bax、Bcl-2蛋白抗原表達(dá)的總面積、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和平均吸光度IA，計(jì)算其積分吸光度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠海馬區(qū)Bax蛋白表達(dá) 模型組大鼠海馬區(qū)Bax蛋白表達(dá)較正常組顯著增強(qiáng)，兩組積分光密度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），β-細(xì)辛醚組、氟西汀組與模型組比較積分光密度明顯降低（P<0.05），見(jiàn)圖1、表1。

2.2 各組大鼠海馬區(qū)Bcl-2蛋白表達(dá) 模型組的Bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于正常組，積分光密度顯著降低（P<0.05）。β-細(xì)辛醚組、氟西汀組積分光密度介于兩者之間，與模型組比較明顯升高（P<0.05），見(jiàn)圖2、表1。

3 討論

抑郁癥的發(fā)病率逐年增高，并且呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)。通過(guò)孤養(yǎng)大鼠模擬抑郁癥情境，探討抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展機(jī)制，是目前一種可靠的研究手段。前期大量試驗(yàn)證實(shí)，CMUS結(jié)合孤養(yǎng)模式建立的大鼠抑郁模型，可以穩(wěn)定的模擬抑郁癥行為學(xué)表現(xiàn)[4-5]。并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抑郁癥的發(fā)生與大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[6]。Bcl-2是凋亡蛋白家族中最重要的一種調(diào)控蛋白，和Bax、Bad、Bak等共同構(gòu)成了Bcl-2蛋白家族。有研究證實(shí)，Bax/Bcl-2的比值變化趨勢(shì)更能描述細(xì)胞凋亡發(fā)生[7]。其比值升高，說(shuō)明細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能性增加，反之降低。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組經(jīng)過(guò)21 d造模后，產(chǎn)生明顯抑郁癥狀，HE染色示海馬組織發(fā)生明顯改變，與前期研究結(jié)果一致[8-9]。氟西汀組及β-細(xì)辛醚組經(jīng)過(guò)藥物灌胃后，抑郁癥狀減輕，并且抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增加，促凋亡蛋白Bax表達(dá)降低。

抑郁癥的病理機(jī)理非常復(fù)雜，目前所做的研究基本是基于某一特定通路展開(kāi)的研究，然而其發(fā)生與發(fā)展是多種通路共同協(xié)作產(chǎn)生的結(jié)果，為了更好地結(jié)合現(xiàn)有的研究，需要進(jìn)一步完善各個(gè)通路之間的關(guān)系，以期找到治療抑郁癥的靶向因子，并使其盡早應(yīng)用于臨床治療。

參考文獻(xiàn)

[1]張亞軍，王宏哲.帕金森病患者的抑郁與認(rèn)知功能障礙相關(guān)關(guān)系分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2010，7（30）：1-3.

[2] Palazidou E.The neurobiology of depression[J].Br Med Bull，2012，101（1）：127-145.

[3]李明亞，李娟好，季寧東，等.石菖蒲幾種粗提取物的抗抑郁作用[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，20（2）：141.

[4]孟盼，王宇紅，張秀麗，等.百事樂(lè)膠囊對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2013，19（19）：203-207.

[5]孫玉榮，董海影，王顯艷，等.β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠行為及海馬神經(jīng)元的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（8）：546-549.

[6] Zhou Q G，Hu Y，Wu D L，et al.Hippocampal Telomerase Is Involved in the Modulation of Depressive Behaviors[J].The Journal of Neuroscience，2011，31（34）：12 258-12 269.

[7]白巨利，孟紫強(qiáng).p53、bax和bcl-2基因在SO2染毒大鼠肝中的表達(dá)[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2006，22（4）：343-348.

[8]榮華，董海影，張靜艷，等.β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠海馬CA3區(qū)超微改變及腦組織ERK蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（36）：10-12.

[9] Richard J P，Christopher R B，Jennifer J，et al.Cognitive remediation as a treatment for major depression： a rationale， review of evidence and recommendations for future research[J].Australian and New Zealand Journal of Psychiatry，2013，47（12）：1165-1175.

（收稿日期：2014-04-21） （本文編輯：蔡元元）endprint

1.1.3 其他材料 試劑兔抗鼠Bax抗體（購(gòu)于Abcam公司）、兔抗鼠Bcl-2抗體（購(gòu)于Abcam公司）。免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑、PBS緩沖液（購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.1.4 儀器 光學(xué)顯微鏡CX11R BSF（Olympus），圖像分析系統(tǒng)DP801（Alphamiager公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由進(jìn)食水。保持環(huán)境干燥，通風(fēng)，溫度18～20 ℃，無(wú)噪聲，無(wú)人為光源。進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)（Open-field-test），選取得分相近的80只大鼠進(jìn)行分組，按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組：正常組、β-細(xì)辛醚組、氟西汀組、模型組，每組20只。

1.2.2 具體方法 除正常組外每籠單只飼養(yǎng)，正常組不給予任何刺激。β-細(xì)辛醚組、氟西汀組、模型組，均接受慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激刺激（Chronic unpredictable mild stress stimulation，CUMS）：每天進(jìn)行一種不可預(yù)知的刺激，持續(xù)21 d，每種刺激使用不超過(guò)4次，避免大鼠適應(yīng)刺激，刺激方法根據(jù)Katz法改進(jìn)。具體方法：搖晃（30 min），傾斜鼠籠（45°，24 h），禁食水（24 h），束縛（24 h），熱刺激（45 ℃，5 min），冰水游泳（4 ℃，5 min），夾尾（3 min），潮濕環(huán)境（100 g墊料中加入200 mL水，24 h）。造模開(kāi)始計(jì)為第1天。第2天起，β-細(xì)辛醚組給予10 g/L的β-細(xì)辛醚組混懸液，按25 mg/（kg·d）灌胃給藥。氟西汀組給予10 g/L的氟西汀混懸液，按1.2 mg/（kg·d）灌胃給藥。模型組給予等量生理鹽水，每天灌胃一次。

1.2.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠海馬組織Bax、Bcl-2蛋白表達(dá) 石蠟切片脫蠟和水化后進(jìn)行抗原修復(fù)。采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶（SP）法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并DAB顯色，經(jīng)過(guò)蘇木素復(fù)染、PBS洗滌、鹽酸乙醇分化后返藍(lán)，常規(guī)脫水、透明、中性樹(shù)膠封片。每一張切片在陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域挑選10個(gè)無(wú)重疊視野，使用Olympus顯微鏡、DP801形態(tài)分析軟件進(jìn)行圖像采集處理，圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，測(cè)出Bax、Bcl-2蛋白抗原表達(dá)的總面積、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和平均吸光度IA，計(jì)算其積分吸光度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠海馬區(qū)Bax蛋白表達(dá) 模型組大鼠海馬區(qū)Bax蛋白表達(dá)較正常組顯著增強(qiáng)，兩組積分光密度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），β-細(xì)辛醚組、氟西汀組與模型組比較積分光密度明顯降低（P<0.05），見(jiàn)圖1、表1。

2.2 各組大鼠海馬區(qū)Bcl-2蛋白表達(dá) 模型組的Bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于正常組，積分光密度顯著降低（P<0.05）。β-細(xì)辛醚組、氟西汀組積分光密度介于兩者之間，與模型組比較明顯升高（P<0.05），見(jiàn)圖2、表1。

3 討論

抑郁癥的發(fā)病率逐年增高，并且呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)。通過(guò)孤養(yǎng)大鼠模擬抑郁癥情境，探討抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展機(jī)制，是目前一種可靠的研究手段。前期大量試驗(yàn)證實(shí)，CMUS結(jié)合孤養(yǎng)模式建立的大鼠抑郁模型，可以穩(wěn)定的模擬抑郁癥行為學(xué)表現(xiàn)[4-5]。并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抑郁癥的發(fā)生與大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[6]。Bcl-2是凋亡蛋白家族中最重要的一種調(diào)控蛋白，和Bax、Bad、Bak等共同構(gòu)成了Bcl-2蛋白家族。有研究證實(shí)，Bax/Bcl-2的比值變化趨勢(shì)更能描述細(xì)胞凋亡發(fā)生[7]。其比值升高，說(shuō)明細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能性增加，反之降低。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組經(jīng)過(guò)21 d造模后，產(chǎn)生明顯抑郁癥狀，HE染色示海馬組織發(fā)生明顯改變，與前期研究結(jié)果一致[8-9]。氟西汀組及β-細(xì)辛醚組經(jīng)過(guò)藥物灌胃后，抑郁癥狀減輕，并且抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增加，促凋亡蛋白Bax表達(dá)降低。

抑郁癥的病理機(jī)理非常復(fù)雜，目前所做的研究基本是基于某一特定通路展開(kāi)的研究，然而其發(fā)生與發(fā)展是多種通路共同協(xié)作產(chǎn)生的結(jié)果，為了更好地結(jié)合現(xiàn)有的研究，需要進(jìn)一步完善各個(gè)通路之間的關(guān)系，以期找到治療抑郁癥的靶向因子，并使其盡早應(yīng)用于臨床治療。

參考文獻(xiàn)

[1]張亞軍，王宏哲.帕金森病患者的抑郁與認(rèn)知功能障礙相關(guān)關(guān)系分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2010，7（30）：1-3.

[2] Palazidou E.The neurobiology of depression[J].Br Med Bull，2012，101（1）：127-145.

[3]李明亞，李娟好，季寧東，等.石菖蒲幾種粗提取物的抗抑郁作用[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，20（2）：141.

[4]孟盼，王宇紅，張秀麗，等.百事樂(lè)膠囊對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2013，19（19）：203-207.

[5]孫玉榮，董海影，王顯艷，等.β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠行為及海馬神經(jīng)元的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（8）：546-549.

[6] Zhou Q G，Hu Y，Wu D L，et al.Hippocampal Telomerase Is Involved in the Modulation of Depressive Behaviors[J].The Journal of Neuroscience，2011，31（34）：12 258-12 269.

[7]白巨利，孟紫強(qiáng).p53、bax和bcl-2基因在SO2染毒大鼠肝中的表達(dá)[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2006，22（4）：343-348.

[8]榮華，董海影，張靜艷，等.β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠海馬CA3區(qū)超微改變及腦組織ERK蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（36）：10-12.

[9] Richard J P，Christopher R B，Jennifer J，et al.Cognitive remediation as a treatment for major depression： a rationale， review of evidence and recommendations for future research[J].Australian and New Zealand Journal of Psychiatry，2013，47（12）：1165-1175.

（收稿日期：2014-04-21） （本文編輯：蔡元元）endprint

1.1.3 其他材料 試劑兔抗鼠Bax抗體（購(gòu)于Abcam公司）、兔抗鼠Bcl-2抗體（購(gòu)于Abcam公司）。免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑、PBS緩沖液（購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。

1.1.4 儀器 光學(xué)顯微鏡CX11R BSF（Olympus），圖像分析系統(tǒng)DP801（Alphamiager公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由進(jìn)食水。保持環(huán)境干燥，通風(fēng)，溫度18～20 ℃，無(wú)噪聲，無(wú)人為光源。進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)（Open-field-test），選取得分相近的80只大鼠進(jìn)行分組，按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組：正常組、β-細(xì)辛醚組、氟西汀組、模型組，每組20只。

1.2.2 具體方法 除正常組外每籠單只飼養(yǎng)，正常組不給予任何刺激。β-細(xì)辛醚組、氟西汀組、模型組，均接受慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激刺激（Chronic unpredictable mild stress stimulation，CUMS）：每天進(jìn)行一種不可預(yù)知的刺激，持續(xù)21 d，每種刺激使用不超過(guò)4次，避免大鼠適應(yīng)刺激，刺激方法根據(jù)Katz法改進(jìn)。具體方法：搖晃（30 min），傾斜鼠籠（45°，24 h），禁食水（24 h），束縛（24 h），熱刺激（45 ℃，5 min），冰水游泳（4 ℃，5 min），夾尾（3 min），潮濕環(huán)境（100 g墊料中加入200 mL水，24 h）。造模開(kāi)始計(jì)為第1天。第2天起，β-細(xì)辛醚組給予10 g/L的β-細(xì)辛醚組混懸液，按25 mg/（kg·d）灌胃給藥。氟西汀組給予10 g/L的氟西汀混懸液，按1.2 mg/（kg·d）灌胃給藥。模型組給予等量生理鹽水，每天灌胃一次。

1.2.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)大鼠海馬組織Bax、Bcl-2蛋白表達(dá) 石蠟切片脫蠟和水化后進(jìn)行抗原修復(fù)。采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶（SP）法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，并DAB顯色，經(jīng)過(guò)蘇木素復(fù)染、PBS洗滌、鹽酸乙醇分化后返藍(lán)，常規(guī)脫水、透明、中性樹(shù)膠封片。每一張切片在陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域挑選10個(gè)無(wú)重疊視野，使用Olympus顯微鏡、DP801形態(tài)分析軟件進(jìn)行圖像采集處理，圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，測(cè)出Bax、Bcl-2蛋白抗原表達(dá)的總面積、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和平均吸光度IA，計(jì)算其積分吸光度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠海馬區(qū)Bax蛋白表達(dá) 模型組大鼠海馬區(qū)Bax蛋白表達(dá)較正常組顯著增強(qiáng)，兩組積分光密度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），β-細(xì)辛醚組、氟西汀組與模型組比較積分光密度明顯降低（P<0.05），見(jiàn)圖1、表1。

2.2 各組大鼠海馬區(qū)Bcl-2蛋白表達(dá) 模型組的Bcl-2蛋白表達(dá)明顯低于正常組，積分光密度顯著降低（P<0.05）。β-細(xì)辛醚組、氟西汀組積分光密度介于兩者之間，與模型組比較明顯升高（P<0.05），見(jiàn)圖2、表1。

3 討論

抑郁癥的發(fā)病率逐年增高，并且呈現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)。通過(guò)孤養(yǎng)大鼠模擬抑郁癥情境，探討抑郁癥的發(fā)生與發(fā)展機(jī)制，是目前一種可靠的研究手段。前期大量試驗(yàn)證實(shí)，CMUS結(jié)合孤養(yǎng)模式建立的大鼠抑郁模型，可以穩(wěn)定的模擬抑郁癥行為學(xué)表現(xiàn)[4-5]。并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抑郁癥的發(fā)生與大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[6]。Bcl-2是凋亡蛋白家族中最重要的一種調(diào)控蛋白，和Bax、Bad、Bak等共同構(gòu)成了Bcl-2蛋白家族。有研究證實(shí)，Bax/Bcl-2的比值變化趨勢(shì)更能描述細(xì)胞凋亡發(fā)生[7]。其比值升高，說(shuō)明細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能性增加，反之降低。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組經(jīng)過(guò)21 d造模后，產(chǎn)生明顯抑郁癥狀，HE染色示海馬組織發(fā)生明顯改變，與前期研究結(jié)果一致[8-9]。氟西汀組及β-細(xì)辛醚組經(jīng)過(guò)藥物灌胃后，抑郁癥狀減輕，并且抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增加，促凋亡蛋白Bax表達(dá)降低。

抑郁癥的病理機(jī)理非常復(fù)雜，目前所做的研究基本是基于某一特定通路展開(kāi)的研究，然而其發(fā)生與發(fā)展是多種通路共同協(xié)作產(chǎn)生的結(jié)果，為了更好地結(jié)合現(xiàn)有的研究，需要進(jìn)一步完善各個(gè)通路之間的關(guān)系，以期找到治療抑郁癥的靶向因子，并使其盡早應(yīng)用于臨床治療。

參考文獻(xiàn)

[1]張亞軍，王宏哲.帕金森病患者的抑郁與認(rèn)知功能障礙相關(guān)關(guān)系分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2010，7（30）：1-3.

[2] Palazidou E.The neurobiology of depression[J].Br Med Bull，2012，101（1）：127-145.

[3]李明亞，李娟好，季寧東，等.石菖蒲幾種粗提取物的抗抑郁作用[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，20（2）：141.

[4]孟盼，王宇紅，張秀麗，等.百事樂(lè)膠囊對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2013，19（19）：203-207.

[5]孫玉榮，董海影，王顯艷，等.β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠行為及海馬神經(jīng)元的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（8）：546-549.

[6] Zhou Q G，Hu Y，Wu D L，et al.Hippocampal Telomerase Is Involved in the Modulation of Depressive Behaviors[J].The Journal of Neuroscience，2011，31（34）：12 258-12 269.

[7]白巨利，孟紫強(qiáng).p53、bax和bcl-2基因在SO2染毒大鼠肝中的表達(dá)[J].中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2006，22（4）：343-348.

[8]榮華，董海影，張靜艷，等.β-細(xì)辛醚對(duì)抑郁模型大鼠海馬CA3區(qū)超微改變及腦組織ERK蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（36）：10-12.

[9] Richard J P，Christopher R B，Jennifer J，et al.Cognitive remediation as a treatment for major depression： a rationale， review of evidence and recommendations for future research[J].Australian and New Zealand Journal of Psychiatry，2013，47（12）：1165-1175.

（收稿日期：2014-04-21） （本文編輯：蔡元元）endprint