李曙芳，黃立群，岳 娟，王永麗，王新鋼，李煒賓，安 全

(中國輻射防護研究院，太原 030006)

國際上將28℃～35℃定義為亞低溫，亞低溫療法已被列為重型顱腦損傷、腦血管疾病的常規(guī)輔助治療方法[1]，近年國內(nèi)外學(xué)者將亞低溫應(yīng)用于心肺復(fù)蘇[2]、新生兒肺損傷[3]、急性膿毒癥[4]和缺血再灌注[5]等方面的實驗研究，通常通過動物冷水浸浴、冰袋降溫、輸注冷的自體動脈血、麻醉藥物協(xié)助降溫等途徑使疾病動物模型處于亞低溫狀態(tài)，但是亞低溫對正常動物本身的作用尚不明確，本研究探討了動物實驗常用的麻醉劑戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的亞低溫對正常雄性BALB/C小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響，以期為亞低溫動物模型的建立及麻醉藥物誘導(dǎo)亞低溫的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

60只清潔級健康雄性BALB/C小鼠，16～18 g，中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2009-0017；中國輻射防護研究院GLP中心動物實驗室飼養(yǎng)管理，實驗動物使用許可證號：SYXK(晉)2008-0004。

1.2 儀器及試劑

法國STAGO半自動四通道血凝儀，所用試劑及質(zhì)控品均由上海太陽生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；AC980電解質(zhì)分析儀，所用試劑由江蘇奧迪康醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn)；日本光電MEK-6318K型三分類全自動血球計數(shù)儀，所用稀釋液、溶血劑均由上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司生產(chǎn)，質(zhì)控品由四川省邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)；HO-3型多通道測溫儀，北京鴻鷗成運科技有限公司生產(chǎn)；戊巴比妥鈉，北京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：061222。

1.3 方法

1.3.1 動物分組：動物檢疫3 d后，按體重隨機分為對照組(15只)、亞低溫組(45只)。實驗組動物均腹腔注射100 mg/kg戊巴比妥鈉，進入麻醉狀態(tài)后，先使其仰臥置于放有冰的金屬臺面上降溫，待其肛溫達(dá)到28～30℃時用電熱毯輔助維持該溫度4 h后自然復(fù)溫；同時對照組腹腔注射0.1 mL/10g生理鹽水，禁食禁水。實驗組在亞低溫干預(yù)后2 h、24 h和72 h分別取15只小鼠乙醚麻醉后拔眼球采血用于以下檢測。

1.3.2 血凝三項的測定：所用血漿由檸檬酸鈉抗凝，經(jīng)3500 r/min離心15 min分離所得，用法國STAGO半自動四通道血凝儀測定凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、及纖維蛋白原濃度(FIB)。

1.3.3 血清電解質(zhì)的測定：所用血清為血液自然凝固后，經(jīng)3500 r/min離心15 min分離所得，用AC980電解質(zhì)分析儀測定血清中K+、Na+、Cl-、Ca2+濃度。

1.3.4 血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)的測定：每只動物取血量為10 μL與2 mL血球稀釋液混勻用日本光電MEK-6318K型三分類全自動血球計數(shù)儀毛細(xì)管模式測定白細(xì)胞總數(shù)(WBC)、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(LY%)、中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(NE%)、單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(MO%)。紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血細(xì)胞比容(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均血紅蛋白量(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)、大血小板比率(P-LCR)。

2 結(jié)果

2.1 動物外觀檢查

實驗組和對照組小鼠均食欲旺盛；眼睛有神，反應(yīng)敏捷；體毛光滑，肌肉豐滿，活動有力；身無傷痕，尾不彎曲，天然孔腔無分泌物，無畸形；糞便呈麥粒狀。

2.2 亞低溫對小鼠體溫的影響

動物亞低溫干預(yù)后2 h、24 h和72 h體溫與對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05)(表1)。表明戊巴比妥鈉對小鼠的整體狀況無大的影響。

2.3 亞低溫對小鼠血凝學(xué)指標(biāo)的影響

由表2可見，實驗組小鼠亞低溫干預(yù)后，其血漿凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、及纖維蛋白原(FIB)含量有一定波動，但與對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05)。

2.4 亞低溫對小鼠電解質(zhì)的影響

實驗組小鼠亞低溫干預(yù)后2 h，其血漿Na+和Ca2+濃度高于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.01，P﹤0.05)；亞低溫干預(yù)后24 h和72 h，實驗組小鼠血清K+和Na+濃度高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.01)(表3)。

2.5 亞低溫對小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

實驗組小鼠亞低溫干預(yù)后，其WBC較對照組降低(P< 0.05或P< 0.01)，其中LY%在亞低溫干預(yù)后2 h低于對照組(P< 0.01)，MO%在亞低溫干預(yù)后較對照組升高(P< 0.01)，NE%在亞低溫干預(yù)后2 h高于對照組(P< 0.01)；另外，實驗組小鼠亞低溫干預(yù)2 h時，RBC、HGB、HCT、MCH、MCHC均較對照組降低(P< 0.01或P< 0.05)，亞低溫干預(yù)后24 h和72 h與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P﹥0.05)。

表1 亞低溫對小鼠體溫的影響

表2 亞低溫對小鼠血凝學(xué)指標(biāo)的影響

表3 亞低溫對小鼠電解質(zhì)的影響

表4 亞低溫對小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

3 討論

目前亞低溫實驗動物模型可通過動物體表降溫、輸注冷的自體動脈血、麻醉藥物協(xié)助降溫等途徑使疾病動物模型處于亞低溫狀態(tài)，這些途徑的共同點是動物均需要麻醉，而有的麻醉劑本身就有抑制體溫中樞神經(jīng)調(diào)節(jié)的作用，如動物實驗常用的戊巴比妥鈉，而它本身對實驗動物即有一定的影響，文獻(xiàn)顯示腹腔注射戊巴比妥鈉20 min后，引起正常雄性SD大鼠MCV、MCH、LY%降低和NE%升高[6]，可引起正常雌性SD大鼠RBC、HGB降低[7]，可見戊巴比妥鈉在較短時間內(nèi)就會對動物造成一定的影響，亞低溫對動物模型的干預(yù)通常需要維持幾個小時，為探討麻醉劑在亞低溫實驗研究中對實驗動物的影響，我們通過戊巴比妥鈉誘導(dǎo)正常雄性BALB/C小鼠亞低溫并維持4 h，自然復(fù)溫后測定其對小鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響。

本研究結(jié)果顯示，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)亞低溫對正常雄性BALB/C小鼠大體身體狀態(tài)、體溫、血凝三項、Cl-、Ca2+、RDW、PLT、PCT、MPV、PDW和P-LCR無明顯影響，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；但可引起K+和Na+濃度升高、WBC和MO%降低，亞低溫干預(yù)后72 h仍未恢復(fù)；可導(dǎo)致LY%、RBC、HGB、MCH和MCHC一過性降低和NE%一過性升高，僅亞低溫干預(yù)后2 h有統(tǒng)計學(xué)差異。實驗結(jié)果提示，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的亞低溫對小鼠電解質(zhì)和白細(xì)胞影響較大。因此在研究亞低溫對疾病動物模型的作用時，對于疾病動物模型本身電解質(zhì)或白細(xì)胞與正常動物偏離的情況(如免疫力低下的動物模型)，應(yīng)考慮到亞低溫及麻醉劑對實驗動物的影響。

另有文獻(xiàn)顯示，在臨床全身降溫過程中可能出現(xiàn)凝血機制障礙、低鉀血癥等并發(fā)癥[8]，但本研究結(jié)果顯示，戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的全身亞低溫對凝血指標(biāo)無顯著影響，而血鉀濃度升高，與上述文獻(xiàn)報道不一致，可能由于亞低溫誘導(dǎo)方法不同，也可能有種屬差異，因此在比較醫(yī)學(xué)外推過程中要多方面考慮。

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[7] 康愛君,張闊,田楓,等. 戊巴比妥鈉、水合氯醛、氨基甲酸乙酯麻醉對雌性SD大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2008,18(4):61-63.

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