曹開(kāi)進(jìn)， 李自強(qiáng)， 賀英菊， 張 智, 3△， 宋相容△

(四川大學(xué) 1華西藥學(xué)院， 2華西醫(yī)院生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610041； 3四川理工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院，四川 自貢 643000)

血壓是動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)研究中的常用檢測(cè)指標(biāo)之一。目前，動(dòng)物血壓檢測(cè)常用方法主要有偶測(cè)血壓法和24 h動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)法(即植入式遙測(cè)技術(shù))。傳統(tǒng)的血壓偶測(cè)方法如尾套法、頸動(dòng)脈插管法等，易引起動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致血壓、心率和體溫等生理生化參數(shù)的較大波動(dòng)，致使試驗(yàn)數(shù)據(jù)離散度大，且重復(fù)性差[1-4]。而植入式遙測(cè)技術(shù)可減少動(dòng)物因束縛產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，能更準(zhǔn)確地測(cè)定動(dòng)物真實(shí)的血壓值，并可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)血壓，受到廣大研究者的青睞[4-5]。

用植入式遙測(cè)技術(shù)測(cè)定血壓時(shí)，常需24 h連續(xù)采集血壓的實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)，再以24 h的血壓均值作為動(dòng)物的當(dāng)日血壓。因此，就需對(duì)植入子(植入式傳感器)進(jìn)行連續(xù)開(kāi)機(jī)，會(huì)嚴(yán)重耗損植入子電池的電量。植入子價(jià)格較為昂貴，且其電池壽命短，不能達(dá)到長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)血壓的目的[1]。鑒于此，本課題以自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)為模型動(dòng)物，對(duì)其24 h血壓連續(xù)變化規(guī)律進(jìn)行系統(tǒng)分析，旨在建立植入式遙測(cè)技術(shù)偶測(cè)血壓方法，以在保證獲取數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和科學(xué)性基礎(chǔ)上，進(jìn)一步提高植入子的使用壽命和效率。

材 料 和 方 法

1 動(dòng)物

8只20周齡雄性SHR，SPF級(jí)，體重約300 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。大鼠飼養(yǎng)在SPF級(jí)動(dòng)物房，喂以基礎(chǔ)飼料，自由飲水，溫度(20±3)℃，相對(duì)濕度50%～60%。光照周期為晝夜各12 h。

2 主要試劑

戊巴比妥鈉(成都市科龍化工試劑廠)；克林霉素磷酸酯注射液(西安利君制藥有限責(zé)任公司)；纖維貼(DSI)；生物膠(DSI)；替米沙坦(山東平原制藥廠)。

3 主要方法

3.1植入子手術(shù)和信號(hào)采集 本研究所采用的生理參數(shù)遙測(cè)系統(tǒng)為Data Sciences International(DSI)公司生產(chǎn)，它由植入式傳感器(植入子TA11PA-C40)、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換器、數(shù)據(jù)接收器、外界壓力監(jiān)控器、數(shù)據(jù)處理軟件(Dataquest A.R.T. 4.33)，遙感測(cè)壓監(jiān)測(cè)系統(tǒng)等裝置組成。動(dòng)物體內(nèi)的傳感器以無(wú)線的方式將生理信號(hào)傳送給信號(hào)接收裝置。植入子TA11PA-C40可以同時(shí)監(jiān)測(cè)血壓、心率、活動(dòng)度等生理信號(hào)。植入子植入手術(shù)按照DSI公司操作說(shuō)明進(jìn)行，操作如下：按照5 mL/kg劑量注射 1%戊巴比妥鈉麻醉SHR，沿腹中線開(kāi)口以暴露腹腔內(nèi)容物，用棉簽將腸道撥到旁邊推至四周；用棉簽分離腹主動(dòng)脈，在左腎靜脈的交叉處下方和腹主動(dòng)脈尾端的分叉處前方，用彎鑷子繞過(guò)腹主動(dòng)脈引入4-0 的縫線，打一個(gè)松結(jié)后，止血鉗夾持末端；準(zhǔn)備植入子，取5 mL注射器針尖，將針尖端斜面一側(cè)彎折90°，拉緊縫合線末端的止血鉗，用針頭在髂動(dòng)脈分叉前方刺破血管后，立即將植入子壓力導(dǎo)管輕輕插入血管，拔出針頭，推進(jìn)導(dǎo)管至4 cm。吸取少量生物膠，然后輕觸穿刺點(diǎn)左右和導(dǎo)管下方各1 次，待生物膠凝固約15 s后松開(kāi)阻斷主動(dòng)脈血液的縫合線，取出用于阻隔內(nèi)臟的紗棉；將植入子放到腸道的上方，進(jìn)行腹壁肌肉縫合；術(shù)后1～7 d每天給動(dòng)物腿部肌注克林霉素磷酸酯注射液防止感染，并每天用碘酊對(duì)創(chuàng)部進(jìn)行消毒。手術(shù)恢復(fù)2周后開(kāi)始進(jìn)行血壓連續(xù)監(jiān)測(cè)，先以每10 s采集1次的方式連續(xù)采集4 d 的SHR基礎(chǔ)血壓；然后以替米沙坦為藥物，按照3 mg/kg的藥效學(xué)劑量對(duì)SHR進(jìn)行連續(xù)9 d的治療，并對(duì)治療期間的血壓等生理信號(hào)以同樣的方式連續(xù)采集9 d。

3.2SHR動(dòng)態(tài)血壓變化的數(shù)據(jù)處理 采用數(shù)據(jù)處理軟件Dataquest A.R.T. 4.33對(duì)上述連續(xù)4 d間隔10 s采集的血壓生理信號(hào)進(jìn)行處理，獲取相關(guān)的血壓值，繪制SHR基礎(chǔ)血壓動(dòng)態(tài)變化曲線，并研究SHR動(dòng)態(tài)血壓[包括收縮壓(systolic blood pressure， SBP)和舒張壓(diastolic blood pressure， DBP)]的變化規(guī)律。

3.3不同時(shí)段血壓均值變化的分析 SHR每天的血壓信號(hào)進(jìn)行如下處理：分別以30 min、1 h 和3 h為間隔時(shí)段，應(yīng)用軟件計(jì)算該時(shí)段內(nèi)的血壓平均值，再進(jìn)一步計(jì)算8只SHR連續(xù)4 d血壓在不同時(shí)段內(nèi)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，并繪制24 h不同間隔時(shí)段的血壓均值散點(diǎn)圖。

3.4不同時(shí)段血壓均值曲線與24 h血壓均值曲線的相似性分析 取前述用植入式遙測(cè)技術(shù)測(cè)過(guò)血壓的8只SHR，每天早上10時(shí)灌胃給予3 mg/kg替米沙坦，連續(xù)給藥9 d，同時(shí)繼續(xù)用植入式遙測(cè)技術(shù)連續(xù)采集血壓等生理信號(hào)。計(jì)算24 h的血壓均值，形成10個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)(包括治療前1 d的基礎(chǔ)數(shù)據(jù))，繪制24 h血壓均值曲線；并分別計(jì)算每天3:00～3:30、20:00～21:00、2:00～5:00和20:00～23:00時(shí)間段的血壓均值，各形成10個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，繪制相應(yīng)的血壓均值曲線。采用“相似因子比較法”對(duì)血壓均值曲線的相似性進(jìn)行分析，用公式1計(jì)算血壓均值曲線的相似因子(f2)，用公式2計(jì)算每天血壓平均差異，再結(jié)合血壓平均差異與相應(yīng)相似因子f2臨界值的關(guān)系，整體評(píng)價(jià)上述各時(shí)段的血壓均值曲線與24 h血壓均值曲線的相似性。

公式1：

Rt和Tt分別表示2條曲線在第n天時(shí)的血壓均值。

公式2：

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

結(jié) 果

1 24 h SHR動(dòng)態(tài)血壓變化的特點(diǎn)分析

如圖1所示，SHR血壓變化存在一定節(jié)律性，即每天的血壓存在相似變化趨勢(shì)(包括收縮壓和舒張壓)，血壓波形呈現(xiàn)“V”字型變化，上午10時(shí)左右血壓達(dá)到最高后，呈現(xiàn)波動(dòng)下降，下午血壓較低，至次日凌晨血壓開(kāi)始上升。不同天同一時(shí)點(diǎn)的血壓變化較大，重復(fù)性差，不穩(wěn)定，甚至差異達(dá)到20 mmHg以上，提示用某一時(shí)點(diǎn)測(cè)得血壓代表24 h血壓均值不可行。

Figure 1. The dynamic curve of basic blood pressure for consecutive 4 d of SHR.

2 不同時(shí)段動(dòng)態(tài)血壓均值變化分析

如圖2～4所示，間隔時(shí)段越短，SHR不同天同一時(shí)段血壓均值變化波動(dòng)越大，偏離24 h血壓均值線也越大。隨間隔時(shí)段的延長(zhǎng)，血壓均值變化波動(dòng)顯著降低，穩(wěn)定性和重復(fù)性亦顯著提高。在3:00～3:30、20:00～21:00、2:00～5:00和20:00～23:00時(shí)段內(nèi)(圖2～4，箭頭標(biāo)示)，其血壓均值與24 h血壓均值均比較相似，且變化較小，如連續(xù)4 d 20:00～23:00時(shí)間段血壓均值間的標(biāo)準(zhǔn)差僅為1.21 mmHg(圖4)。由此提示，上述4個(gè)時(shí)段內(nèi)獲取的血壓均值能較好代表24 h的血壓均值。

3 不同段血壓均值曲線與24 h血壓均值曲線的相似性分析

采用“相似因子比較法”分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在3:00～3:30、20:00～21:00、2:00～5:00和20:00～23:00時(shí)段分別獲取的血壓均值曲線，與24 h收縮壓均值曲線之間的相似因子f2 分別達(dá)到50. 5、55. 8、72. 3和77. 8，血壓均值之間的最大差異分別為14. 2%、13. 5%、4. 7%和3. 1%; 而與24 h 舒張壓均值曲線之間的相似因子f2 分別達(dá)到50. 7、59. 9、70. 6 和78. 0，血壓均值之間的最大差異分別為22. 4%、17. 4%、9. 7%和4. 3%，見(jiàn)圖5。根據(jù)血壓均值最大差異與相似因子f2 結(jié)果，提示在20: 00 ～ 23: 00 時(shí)段獲取的血壓均值曲線與24 h 血壓均值曲線最為相似，可以更好地評(píng)估SHR 24 h 的血壓均值。

Figure 2. The 24-h dynamic changes of the mean systolic and diastolic pressure at 30-min time interval. The scatter plot represents the mean blood pressure of different time periods at 30-min interval, and the arrow represents the time period of 3:00～3:30, at which the mean blood pressure was the most closest to the mean blood pressure of 24 h and had minimum SD value. The mean blood pressure lines of 4 d represent the mean blood pressure of consecutive 4 d. Mean±SD. n=8.

Figure 3. The 24-h dynamic changes of the mean systolic and diastolic pressure at 1-h time interval. The scatter plot represents the mean blood pressure of different time periods at 1-h interval, and the arrow represents the time period 20:00～21:00, at which the mean blood pressure was the closest to the mean blood pressure of 24 h and had minimum SD value. The lines of mean blood pressure of 4 d represent the mean blood pressure of consecutive 4 d. Mean±SD. n=8.

Figure 4. The 24-h dynamic change of the mean systolic and diastolic pressure at 3 h time interval. The scatter plot represents the mean blood pressure of different time periods at 3-h interval, and the arrows represent the time periods of 20:00～23:00 and 2:00～5:00，at which the mean blood pressure was the most closest to the mean blood pressure of 24 h and had minimum SD value. The mean blood pressure lines of 4 d represent the mean blood pressure of consecutive 4 d. Mean±SD. n=8.

討 論

尾套法和有創(chuàng)頸動(dòng)脈法是常用的傳統(tǒng)血壓測(cè)定方法。尾套法在測(cè)定血壓的時(shí)候需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行限制和加熱；同時(shí)，該法測(cè)定的是外周動(dòng)脈壓，顯著高于植入式遙測(cè)技術(shù)測(cè)定的中心動(dòng)脈壓，因此尾套法測(cè)得的血壓無(wú)法準(zhǔn)確反映出正常的血壓值[2, 6-7]。而有創(chuàng)頸動(dòng)脈法的監(jiān)測(cè)時(shí)間很受限制，通常不宜超過(guò)4 h，且易造成傷害，很難實(shí)現(xiàn)對(duì)SHR的血壓等生理參數(shù)進(jìn)行長(zhǎng)期有效監(jiān)測(cè)[1]。與傳統(tǒng)血壓測(cè)定方法相比，植入式遙測(cè)技術(shù)能最大程度地減少對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的人工干預(yù)和刺激，在動(dòng)物自由活動(dòng)、清醒的情況下進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)記錄血壓等生理參數(shù)，保證數(shù)據(jù)的客觀性和準(zhǔn)確性[7]。目前該技術(shù)采集血壓等生理信號(hào)的方式主要是連續(xù)開(kāi)機(jī)采集法，因此對(duì)植入子電池使用壽命是一個(gè)較大的考驗(yàn)[1,8-9]。本研究提出將植入式遙測(cè)技術(shù)應(yīng)用于偶測(cè)血壓方法，以克服傳統(tǒng)偶測(cè)血壓方法準(zhǔn)確性和重復(fù)性差以及植入子使用壽命有限等缺陷。然而，將植入式遙測(cè)技術(shù)應(yīng)用于偶測(cè)血壓方法時(shí)，如何選擇監(jiān)測(cè)時(shí)段，選擇多長(zhǎng)時(shí)段，其獲取的血壓均值能否代表24 h血壓均值，這些問(wèn)題尚缺乏系統(tǒng)研究。

Figure 5. Similarity analysis of the mean blood pressure curves of 3:00～3:30， 20:00～21:00, 2:00～5:00 and 20:00～23:00 time periods and the mean blood pressure curve of 24 h.Mean±SD. n=8.

本研究首先對(duì)SHR 24 h基礎(chǔ)血壓原始信號(hào)的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行分析，結(jié)果表明雖然SHR血壓存在一定的晝夜變化規(guī)律和波動(dòng)特點(diǎn)，但由于不同天同一時(shí)點(diǎn)的血壓值變化較大，很難直接找到一段變化或波動(dòng)較為平穩(wěn)的時(shí)段(圖1)。因此，我們放棄直接從血壓原始信號(hào)尋找合適監(jiān)測(cè)時(shí)段的方法，改為以30 min、1 h、3 h為間隔時(shí)段，應(yīng)用數(shù)據(jù)分析軟件計(jì)算不同時(shí)段的血壓均值，并通過(guò)觀察不同時(shí)段血壓均值的動(dòng)態(tài)變化特征，來(lái)尋找能代表24 h血壓均值的時(shí)段。結(jié)果表明，分別以30 min、1 h、3 h為間隔時(shí)段時(shí)，均能找到一些與24 h血壓均值相近且標(biāo)準(zhǔn)差較小的時(shí)段，如3:00～3:30、20:00～21:00、2:00～5:00和20:00～23:00(圖2～4，箭頭標(biāo)示)。我們采用“相似因子比較法”對(duì)這些時(shí)段的血壓均值進(jìn)行評(píng)估，通過(guò)對(duì)連續(xù)給予替米沙坦治療9 d SHR在上述時(shí)段的血壓均值曲線與24 h血壓均值曲線的相似度進(jìn)行比較分析，確定了在20:00～23:00時(shí)段獲取的血壓均值能更好的代表24 h血壓均值(圖5)。

本研究首次提出將植入式遙測(cè)技術(shù)應(yīng)用于偶測(cè)血壓方法，并證實(shí)在20:00～23:00時(shí)段進(jìn)行開(kāi)機(jī)監(jiān)測(cè)血壓，能獲得準(zhǔn)確和科學(xué)的血壓數(shù)據(jù)，很好地評(píng)估SHR 24 h的血壓均值。該方法一方面是對(duì)目前植入式遙測(cè)技術(shù)測(cè)定血壓方法的有力補(bǔ)充和擴(kuò)展；另一方面，通過(guò)對(duì)SHR 24 h的血壓均值變化特點(diǎn)的分析，為傳統(tǒng)血壓偶測(cè)方法在血壓監(jiān)測(cè)時(shí)點(diǎn)或時(shí)間段的選擇提供了參考。

[參 考 文 獻(xiàn)]

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