王姝涵+李玉桃+孫墨瓏

摘要：為考察興安杜鵑（Rhododendron dauricum L.）總黃酮對(duì)·OH、超氧陰離子自由基和亞硝酸鹽的清除作用，以及對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用，采用超聲波提取法，以95%（V/V）乙醇浸提興安杜鵑葉和莖樣品，紫外可見分光光度法測(cè)定興安杜鵑提取物的總黃酮含量。結(jié)果表明，興安杜鵑提取物對(duì)·OH、亞硝酸鹽和超氧陰離子均有清除作用，對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用，且隨著濃度的增大，清除或合成阻斷作用增加。興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除效果優(yōu)于對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除效果，葉提取物的清除作用強(qiáng)于莖提取物的清除作用。

關(guān)鍵詞：興安杜鵑（Rhododendron dauricum L.）；總黃酮；抗氧化活性；清除作用

中圖分類號(hào)：R961．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０14）08－1895-03

Antioxidant Activities of Total Flavonoids from Rhododendron dauricum L.

ＷＡＮＧ Ｓｈｕ－ｈａｎ，ＬＩ Ｙｕ－ｔａｏ，ＳＵＮ Ｍｏ－ｌｏｎｇ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １５００４０， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｄａｕｒｉｃｕｍ Ｌ．ｔｏ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ （·ＯＨ）， ｏｘｙｇｅｎ ｒａｄｉｃａｌ （Ｏ２－）， ｎｉｔｒｉｔｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｔｏ ｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｂｙ ９５％（V／V） ｅｔｈａｎｏｌ ｂｙ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｍｅｔｈｏｄ． ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｄａｕｒｉｃｕｍ Ｌ． ｈａｄ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｎｄ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ． Ａｌｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｒａｄｉｃａｌｓ ａｎｄ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｗｅｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ． Ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｏｘｙｇｅｎ ｒａｄｉｃａｌ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｏ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ａｎｄ ｎｉｔｒｉｔｅ． Ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｆｒｏｍ ｓｔｅｍｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｄａｕｒｉｃｕｍ Ｌ．； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ； ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ

興安杜鵑（Rhododendron dauricum L.）是杜鵑花科（Ericaceae）杜鵑花屬（Rhododendron）的一種常綠灌木，又名映山紅，達(dá)子香，主要分布于我國大小興安嶺、長(zhǎng)白山和完達(dá)山區(qū)［1］。興安杜鵑藥用價(jià)值很高，具有止咳祛痰和抗菌作用，其主要成分為黃酮類化合物和揮發(fā)油成分［2］。葉子含杜鵑素、槲皮素、杜鵑醇、香草酸、丁香酸、原兒茶酸及多種萜類化合物；根中含強(qiáng)心甙、甾醇與三萜化合物、鞣質(zhì)及酚類化合物［3-6］。植物中均含有抗氧化活性成分，抗氧化作用主要表現(xiàn)為清除自由基和螯合金屬離子［7］。本研究考察興安杜鵑總黃酮對(duì)羥自由基、亞硝酸鹽和超氧陰離子的清除及對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用。

1材料與方法

1.1材料、儀器及試劑

1.1.1材料興安杜鵑葉和莖樣品，采于伊春市湯旺河林場(chǎng)。

1.1.2儀器與試劑TU-1800SPC型紫外可見分光光度計(jì)。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（美國SIGMA公司），其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1總黃酮含量的測(cè)定采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法［3］。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，以95%乙醇為溶劑，精確配制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.020、0.040、0.060、0.080、0.100 g/L，測(cè)定各溶液的OD510 nm。

分別稱取2 g興安杜鵑葉和莖樣品，以95%（V/V）乙醇為浸提液，采用超聲波提取法浸提，浸提液體積（mL）與樣品質(zhì)量（g）比為10∶1，在30 ℃時(shí)浸提3次，每次浸提30 min。合并浸提液，定容至100 mL。測(cè)定樣品溶液的OD510 nm。

1.2.2對(duì)·OH清除作用的測(cè)定對(duì)·OH清除作用的測(cè)定方法采用水楊酸法［8］。分別稱取2 g興安杜鵑葉和莖樣品， 95%乙醇超聲浸提，定容至100 mL待用。各取樣品溶液1、2、3、4、5 mL，體系中分別加入10 mmol/L FeSO4溶液1 mL，5 mmol/L水楊酸-乙醇溶液2 mL， 3 % H2O2溶液2 mL，定容至10 mL。37 ℃恒溫反應(yīng)30 min，510 nm處測(cè)定吸光度。以95%乙醇、3% H2O2溶液作為空白溶液，測(cè)定吸光度。根據(jù)所測(cè)樣品吸光度（Am）及空白溶液吸光度（A0），以對(duì) ·OH的清除率E來衡量試樣的抗氧化能力。清除率計(jì)算公式：

E=■×100% （1）

1.2.3對(duì)亞硝酸鹽清除作用的測(cè)定對(duì)亞硝酸鹽清除作用的測(cè)定方法采用重氮偶合比色法［9］。分別稱取2 g興安杜鵑葉和莖樣品， 95%乙醇超聲浸提，定容至100 mL，待用。各取樣品溶液1、2、3、4、5 mL，體系中分別加入5 mg/L NaNO2溶液2 mL，37℃恒溫反應(yīng)20 min。加入0.4%（m/V，下同）的氨基苯磺酸2 mL，靜置5 min，再加入0.2%（m/V，下同）鹽酸萘乙二胺1 mL，定容至10 mL。靜置15 min，540 nm處測(cè)定吸光度。以NaNO2溶液作為空白溶液。按公式（1）計(jì)算清除率。

1.2.4 對(duì)亞硝胺合成阻斷作用的測(cè)定 對(duì)亞硝胺合成阻斷率的測(cè)定方法采用紫外光解法［9］。分別稱取2 g興安杜鵑葉和莖樣品， 95%乙醇超聲浸提，定容至100 mL待用。各取樣品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5 mL，體系中分別加入pH為 3.1的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液10 mL，1 mmol/LNaNO2溶液1 mL，1 mmol/L二甲胺溶液1 mL，去離子水定容至25 mL，37℃恒溫反應(yīng)1 h，獲得亞硝胺溶液。取1 mL亞硝胺溶液，加入0.5%的Na2CO3溶液1 mL，在紫外燈下照射15 min，再加入1%對(duì)氨基苯磺酸溶液1.5 mL， 0.1%的1-萘胺溶液1.5 mL。靜置15 min，525 nm處測(cè)定吸光度。以去離子水代替樣品溶液做空白對(duì)照，合成阻斷率計(jì)算公式同上。

1.2.5對(duì)超氧陰離子清除作用的測(cè)定對(duì)超氧陰離子清除作用的測(cè)定方法采用鄰苯三酚法［8］。稱取2 g興安杜鵑葉樣品， 95%乙醇超聲浸提，定容至100 mL待用。各取樣品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，體系中分別加入pH 為8.2的Tris-HCl緩沖溶液4 mL，定容至9 mL。37℃恒溫20 min，然后加入同溫度1 mmol/L鄰苯三酚溶液1 mL，反應(yīng)5 min，325 nm處測(cè)定吸光度，以去離子水作為空白溶液。按公式（1）計(jì)算清除率。

1.2.6 VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用測(cè)定方法用1 mL 0.02%VC溶液代替興安杜鵑樣品溶液，重復(fù)以上步驟，測(cè)定吸光度，計(jì)算清除率。取樣品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別與1 mL 0.02%VC溶液混合，測(cè)定吸光度，計(jì)算清除率?？疾霽C對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用。

2結(jié)果與分析

2.1 對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用

興安杜鵑總黃酮對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用如表1所示。由表1可知，興安杜鵑提取物對(duì)·OH和亞硝酸鹽均有清除作用。隨著總黃酮濃度的增大，清除作用增強(qiáng)。通過線性回歸分析，對(duì)·OH的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉18.5 mg/L，莖22.5 mg/L。對(duì)亞硝酸鹽的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉17.8 mg/L，莖23.3 mg/L。興安杜鵑葉對(duì)·OH的清除作用強(qiáng)于莖的清除作用。

2.2 對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用

興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用。隨著提取物總黃酮濃度的增大，亞硝胺合成的阻斷作用增加。通過線性回歸分析，對(duì)亞硝胺合成的阻斷率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉8.8 mg/L，莖10.8 mg/L。興安杜鵑對(duì)葉亞硝胺合成的阻斷作用強(qiáng)于莖的合成阻斷作用，相對(duì)而言，葉和莖提取物的對(duì)亞硝胺合成阻斷作用無顯著差異。

在提取物濃度較小時(shí)，興安杜鵑提取物的阻斷率已經(jīng)超過40%，說明興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺的合成的阻斷作用強(qiáng)于其對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用。

2.3對(duì)超氧陰離子的清除作用

興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除作用及VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用如表3。由表3可以看出，興安杜鵑葉提取物對(duì)超氧陰離子有清除作用。隨著提取物總黃酮濃度的增大，清除作用增加。通過線性回歸分析，對(duì)超氧陰離子的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度為葉8.2 mg/L。VC對(duì)清除反應(yīng)有協(xié)同作用。興安杜鵑提取物濃度較低時(shí)，VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用更為明顯，隨著提取物總黃酮濃度上升，協(xié)同作用降低。

總黃酮對(duì)多種自由基均有清除作用，原因是總黃酮通過其分子中的多個(gè)羥基與自由基反應(yīng)，生成穩(wěn)定的半醌式物質(zhì)而終止自由基的鏈反應(yīng)［1０］?？傸S酮的抗氧化活性與羥基的位置和數(shù)目有關(guān)，但主要取決于羥基的相對(duì)位置，而一般情況下，酚羥基數(shù)目越多，抗氧化能力越強(qiáng)［6］。具有色原酮結(jié)構(gòu)的黃酮2、3位上不飽和雙鍵也會(huì)在一定程度上增強(qiáng)其抗氧化活性。與金屬離子的絡(luò)合也是黃酮阻止自由基氧化的途徑之一。黃酮類物質(zhì)在抗氧化反應(yīng)中，不僅可以清除引發(fā)鏈反應(yīng)的活性自由基和起催化作用的金屬離子，還能直接捕捉鏈傳遞階段的過氧自由基，阻斷鏈反應(yīng)，是優(yōu)良的阻斷型抗氧化劑［10］。

3結(jié)論

興安杜鵑提取物對(duì)·OH、亞硝酸鹽和超氧陰離子均有清除作用，對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用。隨著濃度的增大，清除作用或合成阻斷作用增加，兩者之間存在著量效關(guān)系。相比之下，興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除效果優(yōu)于對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除效果，興安杜鵑葉提取物的清除作用強(qiáng)于莖提取物的清除作用，相對(duì)而言，葉和莖提取物的清除作用無顯著差異。興安杜鵑具有抗氧化活性，可以作為天然抗氧化劑進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 任憲威．樹木學(xué)（北方本）［M］．北京：中國林業(yè)出版社，1997．

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［3］ 孫墨瓏，惠宇，王珊珊．興安杜鵑總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)及提取物穩(wěn)定性［J］．東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，38（9）：84-85．

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［8］ 賈長(zhǎng)虹，常麗新，李月，等．月季葉黃酮對(duì)自由基和亞硝酸鹽的清除作用研究［J］．食品工業(yè)科技．2010，31（9）：104-106．

［9］ 崔玨，李超，王乃馨，等.大葉金花草總黃酮的抗氧化活性研究［J］.中國食品添加劑，2011（4）：117-120，129．

［10］ 劉杰，王伯初，彭亮，等．黃酮類抗氧化劑的構(gòu)效關(guān)系［J］．重慶大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，27（2）：120-124．

1.2.5對(duì)超氧陰離子清除作用的測(cè)定對(duì)超氧陰離子清除作用的測(cè)定方法采用鄰苯三酚法［8］。稱取2 g興安杜鵑葉樣品， 95%乙醇超聲浸提，定容至100 mL待用。各取樣品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，體系中分別加入pH 為8.2的Tris-HCl緩沖溶液4 mL，定容至9 mL。37℃恒溫20 min，然后加入同溫度1 mmol/L鄰苯三酚溶液1 mL，反應(yīng)5 min，325 nm處測(cè)定吸光度，以去離子水作為空白溶液。按公式（1）計(jì)算清除率。

1.2.6 VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用測(cè)定方法用1 mL 0.02%VC溶液代替興安杜鵑樣品溶液，重復(fù)以上步驟，測(cè)定吸光度，計(jì)算清除率。取樣品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別與1 mL 0.02%VC溶液混合，測(cè)定吸光度，計(jì)算清除率?？疾霽C對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用。

2結(jié)果與分析

2.1 對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用

興安杜鵑總黃酮對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用如表1所示。由表1可知，興安杜鵑提取物對(duì)·OH和亞硝酸鹽均有清除作用。隨著總黃酮濃度的增大，清除作用增強(qiáng)。通過線性回歸分析，對(duì)·OH的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉18.5 mg/L，莖22.5 mg/L。對(duì)亞硝酸鹽的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉17.8 mg/L，莖23.3 mg/L。興安杜鵑葉對(duì)·OH的清除作用強(qiáng)于莖的清除作用。

2.2 對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用

興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用。隨著提取物總黃酮濃度的增大，亞硝胺合成的阻斷作用增加。通過線性回歸分析，對(duì)亞硝胺合成的阻斷率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉8.8 mg/L，莖10.8 mg/L。興安杜鵑對(duì)葉亞硝胺合成的阻斷作用強(qiáng)于莖的合成阻斷作用，相對(duì)而言，葉和莖提取物的對(duì)亞硝胺合成阻斷作用無顯著差異。

在提取物濃度較小時(shí)，興安杜鵑提取物的阻斷率已經(jīng)超過40%，說明興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺的合成的阻斷作用強(qiáng)于其對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用。

2.3對(duì)超氧陰離子的清除作用

興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除作用及VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用如表3。由表3可以看出，興安杜鵑葉提取物對(duì)超氧陰離子有清除作用。隨著提取物總黃酮濃度的增大，清除作用增加。通過線性回歸分析，對(duì)超氧陰離子的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度為葉8.2 mg/L。VC對(duì)清除反應(yīng)有協(xié)同作用。興安杜鵑提取物濃度較低時(shí)，VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用更為明顯，隨著提取物總黃酮濃度上升，協(xié)同作用降低。

總黃酮對(duì)多種自由基均有清除作用，原因是總黃酮通過其分子中的多個(gè)羥基與自由基反應(yīng)，生成穩(wěn)定的半醌式物質(zhì)而終止自由基的鏈反應(yīng)［1０］?？傸S酮的抗氧化活性與羥基的位置和數(shù)目有關(guān)，但主要取決于羥基的相對(duì)位置，而一般情況下，酚羥基數(shù)目越多，抗氧化能力越強(qiáng)［6］。具有色原酮結(jié)構(gòu)的黃酮2、3位上不飽和雙鍵也會(huì)在一定程度上增強(qiáng)其抗氧化活性。與金屬離子的絡(luò)合也是黃酮阻止自由基氧化的途徑之一。黃酮類物質(zhì)在抗氧化反應(yīng)中，不僅可以清除引發(fā)鏈反應(yīng)的活性自由基和起催化作用的金屬離子，還能直接捕捉鏈傳遞階段的過氧自由基，阻斷鏈反應(yīng)，是優(yōu)良的阻斷型抗氧化劑［10］。

3結(jié)論

興安杜鵑提取物對(duì)·OH、亞硝酸鹽和超氧陰離子均有清除作用，對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用。隨著濃度的增大，清除作用或合成阻斷作用增加，兩者之間存在著量效關(guān)系。相比之下，興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除效果優(yōu)于對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除效果，興安杜鵑葉提取物的清除作用強(qiáng)于莖提取物的清除作用，相對(duì)而言，葉和莖提取物的清除作用無顯著差異。興安杜鵑具有抗氧化活性，可以作為天然抗氧化劑進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用。

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［3］ 孫墨瓏，惠宇，王珊珊．興安杜鵑總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)及提取物穩(wěn)定性［J］．東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，38（9）：84-85．

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［6］ 鄭瑞生，封輝，戴聰杰，等．植物中抗氧化活性成分研究進(jìn)展［J］．中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（9）:85-90．

［7］ 譚榀新，葉濤，劉湘新，等．植物提取物抗氧化成分及機(jī)理研究進(jìn)展［J］．食品科學(xué)，2010，31（15）：288-292．

［8］ 賈長(zhǎng)虹，常麗新，李月，等．月季葉黃酮對(duì)自由基和亞硝酸鹽的清除作用研究［J］．食品工業(yè)科技．2010，31（9）：104-106．

［9］ 崔玨，李超，王乃馨，等.大葉金花草總黃酮的抗氧化活性研究［J］.中國食品添加劑，2011（4）：117-120，129．

［10］ 劉杰，王伯初，彭亮，等．黃酮類抗氧化劑的構(gòu)效關(guān)系［J］．重慶大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，27（2）：120-124．

1.2.5對(duì)超氧陰離子清除作用的測(cè)定對(duì)超氧陰離子清除作用的測(cè)定方法采用鄰苯三酚法［8］。稱取2 g興安杜鵑葉樣品， 95%乙醇超聲浸提，定容至100 mL待用。各取樣品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，體系中分別加入pH 為8.2的Tris-HCl緩沖溶液4 mL，定容至9 mL。37℃恒溫20 min，然后加入同溫度1 mmol/L鄰苯三酚溶液1 mL，反應(yīng)5 min，325 nm處測(cè)定吸光度，以去離子水作為空白溶液。按公式（1）計(jì)算清除率。

1.2.6 VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用測(cè)定方法用1 mL 0.02%VC溶液代替興安杜鵑樣品溶液，重復(fù)以上步驟，測(cè)定吸光度，計(jì)算清除率。取樣品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別與1 mL 0.02%VC溶液混合，測(cè)定吸光度，計(jì)算清除率?？疾霽C對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用。

2結(jié)果與分析

2.1 對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用

興安杜鵑總黃酮對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用如表1所示。由表1可知，興安杜鵑提取物對(duì)·OH和亞硝酸鹽均有清除作用。隨著總黃酮濃度的增大，清除作用增強(qiáng)。通過線性回歸分析，對(duì)·OH的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉18.5 mg/L，莖22.5 mg/L。對(duì)亞硝酸鹽的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉17.8 mg/L，莖23.3 mg/L。興安杜鵑葉對(duì)·OH的清除作用強(qiáng)于莖的清除作用。

2.2 對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用

興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用。隨著提取物總黃酮濃度的增大，亞硝胺合成的阻斷作用增加。通過線性回歸分析，對(duì)亞硝胺合成的阻斷率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度分別為葉8.8 mg/L，莖10.8 mg/L。興安杜鵑對(duì)葉亞硝胺合成的阻斷作用強(qiáng)于莖的合成阻斷作用，相對(duì)而言，葉和莖提取物的對(duì)亞硝胺合成阻斷作用無顯著差異。

在提取物濃度較小時(shí)，興安杜鵑提取物的阻斷率已經(jīng)超過40%，說明興安杜鵑提取物對(duì)亞硝胺的合成的阻斷作用強(qiáng)于其對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除作用。

2.3對(duì)超氧陰離子的清除作用

興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除作用及VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用如表3。由表3可以看出，興安杜鵑葉提取物對(duì)超氧陰離子有清除作用。隨著提取物總黃酮濃度的增大，清除作用增加。通過線性回歸分析，對(duì)超氧陰離子的清除率達(dá)到50%所需提取物總黃酮濃度為葉8.2 mg/L。VC對(duì)清除反應(yīng)有協(xié)同作用。興安杜鵑提取物濃度較低時(shí)，VC對(duì)清除反應(yīng)的協(xié)同作用更為明顯，隨著提取物總黃酮濃度上升，協(xié)同作用降低。

總黃酮對(duì)多種自由基均有清除作用，原因是總黃酮通過其分子中的多個(gè)羥基與自由基反應(yīng)，生成穩(wěn)定的半醌式物質(zhì)而終止自由基的鏈反應(yīng)［1０］?？傸S酮的抗氧化活性與羥基的位置和數(shù)目有關(guān)，但主要取決于羥基的相對(duì)位置，而一般情況下，酚羥基數(shù)目越多，抗氧化能力越強(qiáng)［6］。具有色原酮結(jié)構(gòu)的黃酮2、3位上不飽和雙鍵也會(huì)在一定程度上增強(qiáng)其抗氧化活性。與金屬離子的絡(luò)合也是黃酮阻止自由基氧化的途徑之一。黃酮類物質(zhì)在抗氧化反應(yīng)中，不僅可以清除引發(fā)鏈反應(yīng)的活性自由基和起催化作用的金屬離子，還能直接捕捉鏈傳遞階段的過氧自由基，阻斷鏈反應(yīng)，是優(yōu)良的阻斷型抗氧化劑［10］。

3結(jié)論

興安杜鵑提取物對(duì)·OH、亞硝酸鹽和超氧陰離子均有清除作用，對(duì)亞硝胺的合成具有阻斷作用。隨著濃度的增大，清除作用或合成阻斷作用增加，兩者之間存在著量效關(guān)系。相比之下，興安杜鵑提取物對(duì)超氧陰離子的清除效果優(yōu)于對(duì)·OH和亞硝酸鹽的清除效果，興安杜鵑葉提取物的清除作用強(qiáng)于莖提取物的清除作用，相對(duì)而言，葉和莖提取物的清除作用無顯著差異。興安杜鵑具有抗氧化活性，可以作為天然抗氧化劑進(jìn)行開發(fā)應(yīng)用。

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