張麗萍 (溫州市藥品檢驗(yàn)所，浙江 溫州 325028)

安坤顆粒是由牡丹皮、梔子、白術(shù)、白芍、當(dāng)歸、茯苓等中藥組成的中藥制劑，具有滋陰清熱，健脾養(yǎng)血的功效，主要用于放環(huán)后引起的出血，月經(jīng)提前、量多或月經(jīng)紊亂，腰骶酸痛，下腹墜痛，心煩易怒，手足心熱[1]。其執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為我國衛(wèi)生部頒布的標(biāo)準(zhǔn)中藥成分制劑第十九冊(cè)，除了幾個(gè)鑒別及常規(guī)的檢查項(xiàng)目之外，沒有含量測(cè)定一項(xiàng)對(duì)樣品進(jìn)行量的控制。雖然目前國內(nèi)已有文獻(xiàn)報(bào)道了HPLC法測(cè)定安坤顆粒中梔子苷或芍藥苷的含量，但都是對(duì)單一組分的測(cè)定，同時(shí)測(cè)定安坤顆粒中的梔子苷和芍藥苷的含量的方法尚未見報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)參考有關(guān)文獻(xiàn)，用高效液相色譜(HPLC)法同時(shí)測(cè)定主藥梔子和白芍中的有效成分梔子苷和芍藥苷含量。本方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于安坤顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1儀器 安捷倫高效液相色譜儀Agilent1200(包括自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測(cè)器、柱溫箱)；Mettler TOLEDO XS205DU電子天平。

1.2試藥 梔子苷(批號(hào)：110749-200714，用前在五氧化二磷減壓器中減壓干燥12 h以上)和芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201035，含量96.5%，使用前無須干燥)均由中國藥品生物制品檢定所提供；安坤顆粒(西安自力中藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20111017、20120205、20120305)；乙腈、甲醇均為色譜純，水為超純水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：安捷倫Eclipse XDB C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相∶乙腈-水(14∶86)，檢測(cè)波長：230 nm，流速：1.0 ml/min，柱溫：35℃。

2.2溶液的制備 對(duì)照品溶液：精密稱取梔子苷對(duì)照品11.92 mg、芍藥苷對(duì)照品12.43 mg，分別置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述兩種對(duì)照品溶液各l ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即制成含梔子苷和芍藥苷分別為23.84、23.99 μg/ml的混合對(duì)照品溶液。

2.2.1供試品溶液 取安坤顆粒適量，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉1.0 g，置50 ml容量瓶中，加甲醇適量，用超聲波處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2陰性樣品溶液 按處方比例分別稱取除白芍和梔子以外的其余藥味，按制備工藝制成相應(yīng)的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，制成不含梔子和白芍的陰性樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 取供試品，在上述色譜條件下進(jìn)樣10 μl，梔子苷、芍藥苷的保留時(shí)間分別為9.5、15.6 min，理論塔板數(shù)均>5 000，兩色譜峰的分離度為4.85，達(dá)到較好的分離效果，且陰性對(duì)照無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 安坤顆粒HPLC色譜圖

2.4線性關(guān)系考察 分別吸取濃度為0.238 4 mg/ml的梔子苷對(duì)照品溶液0.50、0.75、1.25、2.00、2.50、3.75 ml，濃度為0.239 9 mg/ml的芍藥苷對(duì)照品溶液0.50、0.75、1.25、2.00、2.50、3.75 ml，置于同一25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 ml含梔子苷分別為4.768、7.152、11.920、19.072、23.840、35.760 μg，含芍藥苷分別為4.798、7.197、11.995、19.192、23.990、35.985 μg的對(duì)照品混合溶液。各取10 μl進(jìn)樣，以上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,記錄峰面積。以梔子苷、芍藥苷的進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積Y為縱坐標(biāo)，得到梔子苷的回歸方程為：Y=899.08X+35.677，r=0.999 8，芍藥苷的回歸方程為：Y=1 143.8X+20.426，r=0.999 2。結(jié)果表明，梔子苷、芍藥苷分別在0.071 52～0.357 6 μg，0.071 97～0.359 85 μg范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液進(jìn)樣10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，按峰面積計(jì)算，梔子苷的RSD為0.65%，芍藥苷的RSD為0.68%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)20111017的樣品按照樣品測(cè)定方法，重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果梔子苷的含量為2.34 mg/g，RSD=0.63%；芍藥苷含量為0.82 mg/g，RSD=1.01%。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 同一供試品溶液分別于0、1、2、5、8、10 h測(cè)定，梔子苷的峰面積RSD為0.86%，芍藥苷峰面積的RSD=1.05%，表明供試品溶液在室溫下放置10 h穩(wěn)定。

2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別稱取已測(cè)知含量的樣品(批號(hào)：20111017)6份，研細(xì)，各精密稱定樣品約0.5 g，置50 ml量瓶中，分別精密加入濃度為0.238 4 mg/ml的梔子苷對(duì)照品溶液5 ml和濃度為0.239 9 mg/ml的芍藥苷對(duì)照品溶液1.7 ml，加入甲醇適量，用超聲波處理30 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率，見表1。

表1 安坤顆粒中梔子苷和芍藥苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品的測(cè)定 取安坤顆粒樣品，按照供試品溶液的制備方法，進(jìn)樣測(cè)定，每批平行測(cè)定2份，分別按外標(biāo)法計(jì)算梔子苷及芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 安坤顆粒中梔子苷和芍藥苷含量(mg/g，n=3)

3 討論

3.1優(yōu)化提取方法 本實(shí)驗(yàn)在優(yōu)化樣品的前處理方法時(shí)，比較了索氏提取、加熱回流提取和超聲提取3種方法。結(jié)果顯示，回流提取法樣品液色譜中雜質(zhì)干擾較多、提取時(shí)間較長，而索氏提取所得樣品雖然雜質(zhì)干擾少，但提取時(shí)間長，提取效率不高，唯有用超聲波提取效率最高，可以在較短的時(shí)間內(nèi)使得所測(cè)成分提取完全，雖有雜質(zhì)，但對(duì)被測(cè)成分的檢出無干擾，故而選擇用超聲波提取方式來對(duì)樣品進(jìn)行前處理。

3.2流動(dòng)相的選擇 對(duì)甲醇-水-冰醋酸[2]、甲醇-1%冰醋酸水溶液-四氫呋喃[3]以及乙腈-1%磷酸[4]等系統(tǒng)進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，乙腈-水[5]兩者比例為14∶86時(shí)，安坤顆粒中梔子苷和芍藥苷的分離完全，峰形對(duì)稱，其他成分不干擾。

本法測(cè)定了安坤顆粒中梔子和白芍中梔子苷和芍藥苷的含量，結(jié)果準(zhǔn)確，測(cè)定過程樣品處理操作簡便，僅為甲醇超聲溶解，且樣品取樣量少，精密度與重現(xiàn)性較好，流動(dòng)相組分簡單，適用于安坤顆粒的質(zhì)量控制。

【參考文獻(xiàn)】

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