宋 琰，倉 婕，孟 蕾，馬福家 (解放軍455醫(yī)院藥劑科，上海 200052)

血小板聚集在血栓形成中起著關(guān)鍵的作用，嚴重威脅人類生命健康的心腦血管疾病多數(shù)與血栓形成和血栓栓塞有關(guān)[1]。二氫噠嗪酮類化合物對抑制血小板聚集有較強的藥理活性，對二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸(AA)、血小板活化因子(PAF)和膠原引起的血小板聚集均有抑制作用[2, 3]。 深入研究二氫噠嗪酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系，尋找高效低毒的藥物，是開發(fā)新型心腦血管系統(tǒng)疾病藥物的重要研究方向之一。

為進一步探討二氫噠嗪酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系，以期尋找藥理活性更強的血小板聚集抑制劑，本課題設(shè)計合成了9個6-(4-取代苯甲酰氨基苯基)-5-甲基-4，5二氫-3(2H)-噠嗪酮類衍生物。 參考文獻方法[2-4]以乙酰苯胺為原料經(jīng)付克?；磻?、氰化、水解、水合肼環(huán)化反應得6-(4-氨基苯基)-5-甲基-4, 5-二氫-3(2H)-噠嗪酮，將其與不同酰鹵反應得目標化合物8，化合物8再與不同的仲胺反應得到目標化合物9a～9i,并測定了其體外由ADP誘導的人血小板聚集的抑制。

1 化合物設(shè)計

由6-(4-取代苯基)-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮類化合物的作用機制及其構(gòu)效關(guān)系可知[4, 5]：二氫噠嗪酮環(huán)中酰胺氮上的氫必須處于游離狀態(tài)，烷基取代后活性降低或消失；二氫噠嗪酮環(huán)6位取代苯基的對位可以為吸電子基，也可以為供電子基，但必須處于對位。本研究以CCI-17810和MCI-154為先導化合物(圖 1)，保留了此類化合物中抗血小板聚集藥理活性的基本結(jié)構(gòu)二氫噠嗪酮，同時保持了二氫噠嗪酮環(huán)中酰胺氮上的氫必須處于游離狀態(tài)。通過對R基團的結(jié)構(gòu)改造, 設(shè)計并合成了9個化合物，以期尋找具有較強抗血小板凝集活性的噠嗪酮類衍生物。其合成路線見圖 2。

2 實驗部分

柳本顯微熔點測定儀，溫度未經(jīng)校正；元素分析用Elementa Varoo ELⅢ測定；紅外光譜用Shimadzu型紅外光譜儀測定；核磁圖譜用Bruker AC-300D型核磁共振儀測定，DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標；G薄層層析(TLC)用硅膠H(10～40 μm)；PAM2-PPP型自動平衡血小板聚集儀。新西蘭大白兔(♂)。ADP(美國Sigma公司)；MCI-154，CCI-17810為6-{4-[(4苯乙?；?哌嗪基]苯基}-5-甲基-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮，由第二軍醫(yī)大學藥學院有機化學教研室合成。

圖1 MCI-154和CCI-17810的結(jié)構(gòu)

圖2 6-(4-取代乙酰氨基苯基)-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的合成路線

2.16-[4-(氯乙酰氨基)苯基]-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備

2.1.16-(4-氨基苯基)-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備 參考王曙東等[2]研究方法由乙酰苯胺合成，mp 194～195 ℃，產(chǎn)率61.3% (王曙東等[4]研究表明，mp 194～195 ℃，收率58.2%)。

2.1.26-[4-(氯乙酰氨基)苯基]-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮的制備 6-(4-氨基苯基)-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮 1.00 g(5.29 mmo1)，加入N, N-二甲基甲酰胺(DMF)15 ml和三乙胺 0.74 ml，于0～5 ℃緩慢滴加氯乙酰氯0.43 ml(5.30 mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(DMF) 2 ml的混合液，加畢，室溫攪拌5 h，TLC(展開劑氯仿:甲醇=20:1)跟蹤反應，反應完畢加適量水，有沉淀析出，過濾，水洗數(shù)次，用無水乙醇重結(jié)晶，干燥得 1.09 g，mp 232～235 ℃,收率 77.6%(文獻[6]報道，mp 233 ℃，收率 70.1%)。

2.26-[4-(環(huán)丙基乙酰氨基)苯基]-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮(9a)的制備 6-[4-(氯乙酰氨基)苯基]-4,5-二氫-3(2H)-噠嗪酮 0.20 g(0.7 mmol)加入8 ml DMF中，室溫條件下滴加環(huán)丙胺0.10 ml(0.9 mmol)，反應4 h，TLC(展開劑氯仿∶甲醇=20∶1)跟蹤，反應畢，將反應液傾入水中，放置3～4 h，過濾得化合物 9a 0.18 g，收率84.2%。合成9個化合物的理化和波譜數(shù)據(jù)詳見表1。

表1 目標化合物的理化和波譜數(shù)據(jù)

2.3藥理實驗 參考Born比濁法[7]，筆者以先導化合物MCI-154，CCI-17 810為陽性對照，測定了所有目標化合物對ADP誘導的新西蘭大白兔血小板聚集的IC50值。取新西蘭大白兔心臟血，離心制備富含血小板的血漿(PRP)和貧含血小板的血漿 (PPP)；用PRP和PPP調(diào)整血小板聚集儀；取200 μl PRP于比色管中，加入1 μl二甲亞砜(DMSO)，37℃溫孵10 min，攪拌40 s 后，分別加入不同劑量的ADP，攪拌下觀察5 min內(nèi)血小板的最大聚集程度，從而摸出誘導

劑的閾劑量；再將供試品10、5、1、0.5、0.25 μmol/L的DMSO溶液，加入到含200 PRP的比色管中， 37 ℃溫孵10 min，攪拌40 s后，加入閾劑量的ADP，攪拌下觀察5 min內(nèi)血小板的最大聚集程度，計算血小板聚集的抑制百分率并用回歸法求出IC50。結(jié)果見表2。

表2 目標化合物的生物活性數(shù)據(jù)(μmol/L)

3 討論

所合成的9個目標化合物均未見文獻報道，其結(jié)構(gòu)經(jīng)元素分析、紅外光譜和核磁共振譜所證實，數(shù)據(jù)見表1。在以乙酰苯胺制備中間體6-(4-氨基苯基)-4, 5-二氫-3(2H)噠嗪酮時，反應中間產(chǎn)物可不經(jīng)精制，直接投入下步反應，簡化了操作。在目標化合物制備過程中，把反應液直接傾入到水中，過濾即得目標化合物，避免了文獻報道的柱層析等復雜的操作。初步的體外藥理結(jié)果表明(表2)，所有目標化合物都有不同程度的體外抑制ADP誘導的新西蘭大白兔血小板聚集作用，且都強于對照化合物MCI-154和CCI-17810。其中化合物 9e 的活性最強，IC50為MCI-154的50倍，是CCI-17810的66倍，此外，化合物 9a、9c、9i也顯示了較強的活性?；衔?9e 等的作用機制及其他藥理作用還有待進一步研究。從上面的藥理活性數(shù)據(jù)來看，R基團引入取代胺基可以增強其血小板聚集的抑制作用，但由于目標化合物的數(shù)目有限，難以得出具體的構(gòu)效關(guān)系的結(jié)論，有待進一步的研究。

【參考文獻】

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