簡(jiǎn)賀君　張明輝　謝俊剛

摘 要：為研究阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的急性毒性作用，采用生物毒性方法，記錄96h內(nèi)斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡情況和觀察其毒性反應(yīng)。結(jié)果表明，阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰96h半數(shù)致死濃度為9.869×10-3mg/L， 95%可信區(qū)間范圍為9.629～10.103×10-3mg/L，安全濃度為2.754×10-3mg/L。本研究結(jié)果說(shuō)明，阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰為劇毒藥物，在其養(yǎng)殖生產(chǎn)中需謹(jǐn)慎使用。

關(guān)鍵詞：斑點(diǎn)叉尾鮰；阿維菌素；急性毒性試驗(yàn)；半致死濃度；安全濃度

中圖分類(lèi)號(hào) S94 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）11-134-03

Abstract：The main aim of this study was to demonstrate the actue toxic effects of avermection for Ietalurus punetaus. In this study， we analysised the death rate and toxicity reaction by biological toxicity test within 96 hours. The results showed that the median lethal concentration of avermectin on Ietalurus punetaus within 96h was 9.869×10-3mg/L， 95% confidence interval range was 9.629～10.103×10-3mg/L， the safe concentration was 2.754×10-3mg/L. These results indicate that avermectin is highly toxic drugs on Ietalurus punetaus. It should be used with caution in Ietalurus punetaus farming.

Key words：Ietalurus punetaus；Avermectin；Acute toxicity；Median lethal concentration；Safe concentration

阿維菌素（abamectin，ABM）是由鏈霉菌中阿維鏈霉菌素自然發(fā)酵產(chǎn)生，由Avermectin B1a和Avermectin B1b組合而成，其中B1a不低于90%、B1b不超過(guò)5%。其具有高脂溶性、低水溶性和廣譜高效殺蟲(chóng)的特點(diǎn)[1]，因此在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)以及生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。阿維菌素是應(yīng)用較為廣泛的一種殺蟲(chóng)驅(qū)蟲(chóng)藥物，但其毒性較大，使用不當(dāng)易造成水生動(dòng)物中毒事件[2]?，F(xiàn)已有阿維菌素對(duì)多種水生動(dòng)物[3-5]的毒性研究報(bào)道。

斑點(diǎn)叉尾鮰（Ietalurus punetaus）又稱溝鯰、鉗魚(yú)，屬于鯰形目、鮰科魚(yú)類(lèi)。原產(chǎn)于北美洲，是一種大型淡水魚(yú)類(lèi)，具有生長(zhǎng)快、食性雜、肉質(zhì)上乘、抗病力強(qiáng)、適應(yīng)性廣等特點(diǎn)。斑點(diǎn)叉尾鮰是農(nóng)業(yè)部推介的主導(dǎo)養(yǎng)殖品種，是具國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展條件的出口創(chuàng)匯水產(chǎn)品種。近年來(lái)，隨著斑點(diǎn)叉尾鮰養(yǎng)殖密度的不斷增加和養(yǎng)殖產(chǎn)量的不斷提高，各種病害問(wèn)題也隨之出現(xiàn)，特別是大范圍暴發(fā)的寄生蟲(chóng)病，對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的養(yǎng)殖危害嚴(yán)重。因此，筆者通過(guò)研究阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的急性毒性作用，以期為斑點(diǎn)叉尾鮰的寄生蟲(chóng)病防治，提供基礎(chǔ)資料，指導(dǎo)臨床合理使用阿維菌素。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用魚(yú) 試驗(yàn)用魚(yú)購(gòu)自肇慶市水產(chǎn)科學(xué)研究所，平均體重（16.2±8.3）g，平均體長(zhǎng)（13.7±2.3）cm。實(shí)驗(yàn)用魚(yú)共1 200尾，暫養(yǎng)14d。

1.1.2 試驗(yàn)用藥 阿維菌素原藥（有效含量為99.5%）購(gòu)于河北萬(wàn)博生物科技有限公司。

1.1.3 試驗(yàn)環(huán)境 暫養(yǎng)池和試驗(yàn)池為7.2m3（4.5m×2.0m×0.8m）水泥池，試驗(yàn)用水為經(jīng)曝氣處理的井水，pH值7.2～7.8，溶氧6mg/L，水溫27.0～30.1℃，氨氮0.2～0.4mg/L，亞硝酸鹽0.05mg/L，試驗(yàn)用水符合漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（GB11607-89）。試驗(yàn)過(guò)程中采用空氣壓縮機(jī)24h連續(xù)充氣增氧，試驗(yàn)全程不進(jìn)行投喂。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)備試驗(yàn)設(shè)計(jì) 先按照急性毒性試驗(yàn)方法進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn)，確定斑點(diǎn)叉尾鮰全死和不死的劑量范圍。

各試驗(yàn)魚(yú)池中隨機(jī)放入試驗(yàn)魚(yú)30尾，暫養(yǎng)1d。將試驗(yàn)用藥進(jìn)行稀釋后全池均勻沷灑，使各池阿維菌素的最終濃度分別為2、4、8、16、32、64×10-3mg/L，并設(shè)空白作為對(duì)照，每個(gè)濃度梯度設(shè)3個(gè)平行組。

試驗(yàn)持續(xù)96h，期間不進(jìn)行投喂食物，試驗(yàn)開(kāi)始后的1～6h內(nèi)，對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的平衡、游動(dòng)、呼吸及體色變化等中毒癥狀進(jìn)行連續(xù)觀察，然后分別記錄24、48，、72、96h各濃度的試驗(yàn)魚(yú)死亡及存活數(shù)，并及時(shí)清除死魚(yú)，每天檢測(cè)魚(yú)池水質(zhì)一次。

1.2.2 急性毒性試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，確定急性毒性試驗(yàn)的濃度梯度。按寇氏法[6]（Karber）設(shè)計(jì)濃度梯度，共設(shè)5個(gè)濃度梯度，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組，每個(gè)濃度梯度及空白對(duì)照組均設(shè)3個(gè)平行組。每個(gè)試驗(yàn)池隨機(jī)放入30尾試驗(yàn)魚(yú)。

試驗(yàn)持續(xù)96h，期間不進(jìn)行投喂食物，試驗(yàn)開(kāi)始后的1～6h內(nèi)，對(duì)試驗(yàn)魚(yú)的平衡、游動(dòng)、呼吸及體色變化等中毒癥狀進(jìn)行連續(xù)觀察，然后分別記錄24、48、72、96h各濃度的試驗(yàn)魚(yú)死亡及存活數(shù)，并及時(shí)清除死魚(yú)，每天檢測(cè)魚(yú)池水質(zhì)一次。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理及分析 采用Excel 2003 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入和數(shù)據(jù)處理。所有數(shù)據(jù)以 X±S 表示。采用 SPSS 17.0 軟件中的 Probit 概率單位分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。求出阿維菌素的24h、48h、72h和96h各死亡概率相對(duì)應(yīng)的濃度和95%可信限等。endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果 0、2、4、8×10-3mg/L試驗(yàn)組的斑點(diǎn)叉尾鮰在試驗(yàn)期間活動(dòng)正常，直到預(yù)備試驗(yàn)結(jié)束均沒(méi)出現(xiàn)死亡。16、32、64×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰在試驗(yàn)開(kāi)始后約2h出現(xiàn)中毒癥狀：魚(yú)浮出水面，靠池邊游；頭部向上，魚(yú)體在水中呈垂直狀態(tài)；打轉(zhuǎn)，失去平衡；或集群，或相互頭部前端碰撞；不斷地張口擴(kuò)鰓，前期呼吸加快，后期呼吸變慢；對(duì)外界刺激不敏感，甚至無(wú)反應(yīng)，活力變差。

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以確定阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰24 h100% 死亡濃度（24hLC100）為16×10-3mg/L，96h無(wú)死亡濃度（96hLC0）為8×10-3mg/L。

2.2 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 急性毒性試驗(yàn)濃度的計(jì)算 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)8×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰沒(méi)有出現(xiàn)死亡，而16×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰24h內(nèi)全死亡，并結(jié)合96h毒性試驗(yàn)結(jié)果的Probit概率單位分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果，選擇死亡率為10%，30%，50%，70%，90%相對(duì)應(yīng)的濃度，即8.13、9.88、11.31、12.95和15.75×10-3mg/L進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。

2.2.2 阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的急性毒性 根據(jù)表1可見(jiàn)，在相同作用時(shí)間條件下，斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡率隨著阿維菌素濃度的升高而增加；在同一濃度的作用條件下，斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡率隨著阿維菌素作用時(shí)間延長(zhǎng)而增加?？瞻讓?duì)照組斑點(diǎn)叉尾鮰無(wú)死亡。

3 結(jié)論與討論

3.1 阿維菌素的中毒癥狀 根據(jù)此次試驗(yàn)過(guò)程中觀察記錄的中毒情況，發(fā)現(xiàn)阿維菌素的中毒癥狀主要有幾大特征：一是分階段表現(xiàn)為前期興奮，后期抑制。例如前期集群游泳，張口擴(kuò)鰓，呼吸加快；后期游泳失衡，頭部向上，魚(yú)體在水中呈垂直狀態(tài)。二是體表外觀形態(tài)正常，無(wú)損傷；體表粘液分泌正常；鰓絲顏色及形態(tài)正常。三是解剖觀察內(nèi)臟器官，無(wú)損傷無(wú)病變。試驗(yàn)觀察的中毒情況符合阿維菌素的作用機(jī)制，是干擾神經(jīng)生理活動(dòng)，刺激釋放γ-氨基丁酸，而氨基丁酸對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)有抑制作用[7]。因此，試驗(yàn)魚(yú)中毒后表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)損傷相關(guān)癥狀，而無(wú)體表及內(nèi)臟的損傷。

3.2 阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性 依據(jù)我國(guó)環(huán)境保護(hù)局制訂的 《生物技術(shù)檢測(cè)規(guī)范（水環(huán)境部分）》[8]將藥物對(duì)水生動(dòng)物的毒性分為5個(gè)等級(jí)：LC50<1mg/L為劇毒，LC50在1～<100mg/L為高毒，LC50在100～<1 000mg/L 為中等毒性，LC50在1 000～10 000mg/L為低毒，LC50>10 000mg/L為微毒或無(wú)毒。因此，阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性為劇毒。

由于阿維菌素在淡水魚(yú)養(yǎng)殖生產(chǎn)中的推薦使用濃度為1.44×10-3mg/L[10]，與試驗(yàn)結(jié)果的安全濃度2.754×10-3mg/L較為接近，所以在斑點(diǎn)叉尾鮰養(yǎng)殖生產(chǎn)時(shí)，如果使用阿維菌素防治寄生蟲(chóng)病，需嚴(yán)格按照推薦濃度準(zhǔn)確計(jì)算藥物的使用份量，防止因施藥濃度過(guò)大而引起魚(yú)類(lèi)中毒事故。

參考文獻(xiàn)

[1] Roth M，Richards RH，Sommerville C . Current practices in the chemotherapeutic control of sea lice infestations in aquaculture：a review[J]. Fish Dis，1993，16：1-26.

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[10]農(nóng)業(yè)部《新編漁藥手冊(cè)》編撰委員會(huì).新編漁藥手冊(cè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005：248-252. （責(zé)編：張長(zhǎng)青）endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果 0、2、4、8×10-3mg/L試驗(yàn)組的斑點(diǎn)叉尾鮰在試驗(yàn)期間活動(dòng)正常，直到預(yù)備試驗(yàn)結(jié)束均沒(méi)出現(xiàn)死亡。16、32、64×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰在試驗(yàn)開(kāi)始后約2h出現(xiàn)中毒癥狀：魚(yú)浮出水面，靠池邊游；頭部向上，魚(yú)體在水中呈垂直狀態(tài)；打轉(zhuǎn)，失去平衡；或集群，或相互頭部前端碰撞；不斷地張口擴(kuò)鰓，前期呼吸加快，后期呼吸變慢；對(duì)外界刺激不敏感，甚至無(wú)反應(yīng)，活力變差。

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以確定阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰24 h100% 死亡濃度（24hLC100）為16×10-3mg/L，96h無(wú)死亡濃度（96hLC0）為8×10-3mg/L。

2.2 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 急性毒性試驗(yàn)濃度的計(jì)算 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)8×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰沒(méi)有出現(xiàn)死亡，而16×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰24h內(nèi)全死亡，并結(jié)合96h毒性試驗(yàn)結(jié)果的Probit概率單位分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果，選擇死亡率為10%，30%，50%，70%，90%相對(duì)應(yīng)的濃度，即8.13、9.88、11.31、12.95和15.75×10-3mg/L進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。

2.2.2 阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的急性毒性 根據(jù)表1可見(jiàn)，在相同作用時(shí)間條件下，斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡率隨著阿維菌素濃度的升高而增加；在同一濃度的作用條件下，斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡率隨著阿維菌素作用時(shí)間延長(zhǎng)而增加?？瞻讓?duì)照組斑點(diǎn)叉尾鮰無(wú)死亡。

3 結(jié)論與討論

3.1 阿維菌素的中毒癥狀 根據(jù)此次試驗(yàn)過(guò)程中觀察記錄的中毒情況，發(fā)現(xiàn)阿維菌素的中毒癥狀主要有幾大特征：一是分階段表現(xiàn)為前期興奮，后期抑制。例如前期集群游泳，張口擴(kuò)鰓，呼吸加快；后期游泳失衡，頭部向上，魚(yú)體在水中呈垂直狀態(tài)。二是體表外觀形態(tài)正常，無(wú)損傷；體表粘液分泌正常；鰓絲顏色及形態(tài)正常。三是解剖觀察內(nèi)臟器官，無(wú)損傷無(wú)病變。試驗(yàn)觀察的中毒情況符合阿維菌素的作用機(jī)制，是干擾神經(jīng)生理活動(dòng)，刺激釋放γ-氨基丁酸，而氨基丁酸對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)有抑制作用[7]。因此，試驗(yàn)魚(yú)中毒后表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)損傷相關(guān)癥狀，而無(wú)體表及內(nèi)臟的損傷。

3.2 阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性 依據(jù)我國(guó)環(huán)境保護(hù)局制訂的 《生物技術(shù)檢測(cè)規(guī)范（水環(huán)境部分）》[8]將藥物對(duì)水生動(dòng)物的毒性分為5個(gè)等級(jí)：LC50<1mg/L為劇毒，LC50在1～<100mg/L為高毒，LC50在100～<1 000mg/L 為中等毒性，LC50在1 000～10 000mg/L為低毒，LC50>10 000mg/L為微毒或無(wú)毒。因此，阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性為劇毒。

由于阿維菌素在淡水魚(yú)養(yǎng)殖生產(chǎn)中的推薦使用濃度為1.44×10-3mg/L[10]，與試驗(yàn)結(jié)果的安全濃度2.754×10-3mg/L較為接近，所以在斑點(diǎn)叉尾鮰養(yǎng)殖生產(chǎn)時(shí)，如果使用阿維菌素防治寄生蟲(chóng)病，需嚴(yán)格按照推薦濃度準(zhǔn)確計(jì)算藥物的使用份量，防止因施藥濃度過(guò)大而引起魚(yú)類(lèi)中毒事故。

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[8]蔡道基. 農(nóng)藥環(huán)境毒理學(xué)研究[M]. 北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社，1999：128-134.

[9]McCracken D J.The potential for avermectins to affect wildlife[J].Vet Parasito1.1993，48：273-280.

[10]農(nóng)業(yè)部《新編漁藥手冊(cè)》編撰委員會(huì).新編漁藥手冊(cè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005：248-252. （責(zé)編：張長(zhǎng)青）endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果 0、2、4、8×10-3mg/L試驗(yàn)組的斑點(diǎn)叉尾鮰在試驗(yàn)期間活動(dòng)正常，直到預(yù)備試驗(yàn)結(jié)束均沒(méi)出現(xiàn)死亡。16、32、64×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰在試驗(yàn)開(kāi)始后約2h出現(xiàn)中毒癥狀：魚(yú)浮出水面，靠池邊游；頭部向上，魚(yú)體在水中呈垂直狀態(tài)；打轉(zhuǎn)，失去平衡；或集群，或相互頭部前端碰撞；不斷地張口擴(kuò)鰓，前期呼吸加快，后期呼吸變慢；對(duì)外界刺激不敏感，甚至無(wú)反應(yīng)，活力變差。

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以確定阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰24 h100% 死亡濃度（24hLC100）為16×10-3mg/L，96h無(wú)死亡濃度（96hLC0）為8×10-3mg/L。

2.2 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 急性毒性試驗(yàn)濃度的計(jì)算 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)8×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰沒(méi)有出現(xiàn)死亡，而16×10-3mg/L試驗(yàn)組的叉尾鮰24h內(nèi)全死亡，并結(jié)合96h毒性試驗(yàn)結(jié)果的Probit概率單位分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果，選擇死亡率為10%，30%，50%，70%，90%相對(duì)應(yīng)的濃度，即8.13、9.88、11.31、12.95和15.75×10-3mg/L進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。

2.2.2 阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的急性毒性 根據(jù)表1可見(jiàn)，在相同作用時(shí)間條件下，斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡率隨著阿維菌素濃度的升高而增加；在同一濃度的作用條件下，斑點(diǎn)叉尾鮰的死亡率隨著阿維菌素作用時(shí)間延長(zhǎng)而增加?？瞻讓?duì)照組斑點(diǎn)叉尾鮰無(wú)死亡。

3 結(jié)論與討論

3.1 阿維菌素的中毒癥狀 根據(jù)此次試驗(yàn)過(guò)程中觀察記錄的中毒情況，發(fā)現(xiàn)阿維菌素的中毒癥狀主要有幾大特征：一是分階段表現(xiàn)為前期興奮，后期抑制。例如前期集群游泳，張口擴(kuò)鰓，呼吸加快；后期游泳失衡，頭部向上，魚(yú)體在水中呈垂直狀態(tài)。二是體表外觀形態(tài)正常，無(wú)損傷；體表粘液分泌正常；鰓絲顏色及形態(tài)正常。三是解剖觀察內(nèi)臟器官，無(wú)損傷無(wú)病變。試驗(yàn)觀察的中毒情況符合阿維菌素的作用機(jī)制，是干擾神經(jīng)生理活動(dòng)，刺激釋放γ-氨基丁酸，而氨基丁酸對(duì)神經(jīng)傳導(dǎo)有抑制作用[7]。因此，試驗(yàn)魚(yú)中毒后表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)損傷相關(guān)癥狀，而無(wú)體表及內(nèi)臟的損傷。

3.2 阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性 依據(jù)我國(guó)環(huán)境保護(hù)局制訂的 《生物技術(shù)檢測(cè)規(guī)范（水環(huán)境部分）》[8]將藥物對(duì)水生動(dòng)物的毒性分為5個(gè)等級(jí)：LC50<1mg/L為劇毒，LC50在1～<100mg/L為高毒，LC50在100～<1 000mg/L 為中等毒性，LC50在1 000～10 000mg/L為低毒，LC50>10 000mg/L為微毒或無(wú)毒。因此，阿維菌素對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性為劇毒。

由于阿維菌素在淡水魚(yú)養(yǎng)殖生產(chǎn)中的推薦使用濃度為1.44×10-3mg/L[10]，與試驗(yàn)結(jié)果的安全濃度2.754×10-3mg/L較為接近，所以在斑點(diǎn)叉尾鮰養(yǎng)殖生產(chǎn)時(shí)，如果使用阿維菌素防治寄生蟲(chóng)病，需嚴(yán)格按照推薦濃度準(zhǔn)確計(jì)算藥物的使用份量，防止因施藥濃度過(guò)大而引起魚(yú)類(lèi)中毒事故。

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