趙泓翔, 郭 可, 崔亞迪, 吳曉光, 商亞珍

(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北省中醫(yī)藥抗癡呆重點(diǎn)研究室，河北 承德 067000)

半枝蓮黃酮對復(fù)合Aβ25-35引起線粒體膜Bcl-2、Bax、Bcl-xL及Bak異常的干預(yù)作用*

趙泓翔, 郭 可, 崔亞迪, 吳曉光, 商亞珍△

(承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北省中醫(yī)藥抗癡呆重點(diǎn)研究室，河北 承德 067000)

目的： 探討半枝蓮黃酮(SBF)對大鼠腦室注射β-淀粉樣蛋白25-35(Aβ25-35)結(jié)合三氯化鋁(AlCl3)及重組人轉(zhuǎn)化生長因子β1(rhTGF-β1)(復(fù)合Aβ25-35)引起的皮層細(xì)胞線粒體膜凋亡相關(guān)蛋白異常的干預(yù)作用。方法: 雄性SD大鼠手術(shù)當(dāng)天腦室注射10 ng rhTGF-β1，手術(shù)第2天開始腦室分別于上午注射Aβ25-35(4 μg/d，連續(xù)注射14 d)、下午注射1% AlCl3(3 μL/d ，連續(xù)注射5 d)建立神經(jīng)損傷模型。術(shù)后第49天模型成功大鼠隨機(jī)分為模型對照組和3個(gè)劑量SBF組。藥物組大鼠分別連續(xù)灌胃 SBF (35、70和140 mg/kg)36 d，每日1次。大鼠末次給藥60 min后斷頭處死，蛋白印跡法測定各組大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果: 大鼠腦室注射復(fù)合Aβ25-35可使大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜Bcl-2和Bcl-xL蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)，使Bax和Bak蛋白表達(dá)水平明顯增加(P<0.01)。然而，35、70和140 mg/kg SBF灌胃36 d，可以不同程度地逆轉(zhuǎn)復(fù)合Aβ25-35所致上述改變。結(jié)論: 腦室注射Aβ25-35聯(lián)合AlCl3和rhTGF-β1可引起線粒體膜凋亡因子Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak異常改變，SBF能夠逆轉(zhuǎn)上述凋亡因子異常改變。

半枝蓮黃酮； β-淀粉樣蛋白25-35； 三氯化鋁； 重組人類轉(zhuǎn)化生長因子-β1； 線粒體凋亡通路

目前，神經(jīng)退行性疾病已成為臨床上常見的疾病，神經(jīng)細(xì)胞凋亡的加劇被認(rèn)為是該病主要的現(xiàn)象之一[1]。細(xì)胞凋亡是機(jī)體正常細(xì)胞在受到生理或病理刺激后出現(xiàn)的自發(fā)性死亡，是一個(gè)高度有序的、主動的、由基因控制和多種酶參與的程序化死亡過程[2]。研究表明，異常的細(xì)胞凋亡與很多疾病如炎癥、腫瘤和神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[3]。根據(jù)細(xì)胞凋亡的啟動，細(xì)胞凋亡分為線粒體凋亡通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡通路和死亡受體通路。線粒體凋亡通路是細(xì)胞凋亡中一條非常重要的通路，凋亡刺激通過線粒體膜上的一系列凋亡因子產(chǎn)生級聯(lián)反應(yīng)，引起細(xì)胞凋亡，特別是Bcl-2家族中抑凋亡因子Bcl-2、Bcl-xL及促凋亡因子Bax、Bak異常表達(dá)在疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[4-5]。

經(jīng)過長期的研究發(fā)現(xiàn)，Aβ具有較強(qiáng)的神經(jīng)毒性，腦室投放Aβ肽段可以誘發(fā)動物神經(jīng)病理學(xué)改變，包括神經(jīng)細(xì)胞凋亡[6]。如果結(jié)合鋁和重組人轉(zhuǎn)化生長因子β1(recombinant human transforming growth factor β1, rhTGF-β1)建立多因素神經(jīng)損傷，更能較全面模擬臨床神經(jīng)病變病人的病理生理特征[7-8]。半枝蓮黃酮(Scutellariabarbataflavonoids，SBF)是從半枝蓮(ScutellariabarbataD. Don)地上部分分離的黃酮類化合物，以野黃芩苷為主。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，SBF具有解熱、抗菌、抗突變和抗氧化等多種功效，對去勢大鼠記憶障礙、神經(jīng)內(nèi)分泌及腦內(nèi)自由基異常變化以及Aβ25-35對星形膠質(zhì)細(xì)胞的損害具有明顯的治療作用[9-11]，但對Aβ25-35聯(lián)合AlCl3和rhTGF-β1(復(fù)合Aβ25-35)引起動物神經(jīng)損害、特別是線粒體凋亡通路中線粒體膜上的凋亡因子的影響尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用大鼠腦室注射Aβ25-35聯(lián)合AlCl3和rhTGF-β1建立神經(jīng)損害模型，探討SBF對復(fù)合Aβ模型大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜凋亡因子Bcl-2、Bax、Bak和Bcl-xL異常變化的干預(yù)結(jié)果。

材 料 和 方 法

1 實(shí)驗(yàn)動物與藥品

清潔級健康Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(合格證編號：90912)體重300～350 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。飼養(yǎng)于承德醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，手術(shù)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由進(jìn)食，12 h光照明/暗交替。半枝蓮黃酮由本實(shí)驗(yàn)室制備；兔抗大鼠Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak多克隆抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供；Aβ25-35由上海強(qiáng)耀生物科技有限公司提供；線粒體/胞漿制備試劑盒 C1260購于北京普利來基因技術(shù)有限公司，其它試劑購于試劑商店。

2 方法

2.1 動物模型的建立 300～350 g健康雄性SD大鼠，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，術(shù)前禁食12小時(shí)。腹腔注射10%水合氯醛 (300 mg/kg) 麻醉,常規(guī)消毒，固定于大鼠腦立體定位儀，顱頂正中矢狀切開，暴露硬腦膜，標(biāo)記前鹵點(diǎn)位置。參照包新民編著《大鼠腦立體定位圖譜》，以前鹵點(diǎn)為坐標(biāo)原點(diǎn)，于前鹵點(diǎn)后2.0 mm、矢狀縫右側(cè)旁開1.4 mm、深4.6 mm確認(rèn)丘腦背側(cè)核位置。于前鹵點(diǎn)后1.2 mm、矢狀縫左側(cè)旁開2.0 mm、深4.0 mm確認(rèn)側(cè)腦室位置，三棱錐鉆一直徑為0.2 mm孔，埋置導(dǎo)管,用硫酸鋅水門汀固定導(dǎo)管。模型對照組側(cè)腦室給藥Aβ25-3514 d，AlCl35 d，給藥速度為1 μL/min，假手術(shù)對照組給予等體積生理鹽水，首次注射時(shí)在丘腦前背側(cè)核注入rhTGF-β110 ng?？p合傷口，常規(guī)飼養(yǎng)。術(shù)后3 d內(nèi)肌肉注射青霉素每日1次，1次1×105U。歸籠飼養(yǎng)，在手術(shù)第45天利用Morris水迷宮進(jìn)行4 d的大鼠記憶障礙模型篩選，以第4天水迷宮篩選成績計(jì)算，模型對照組大鼠篩選率大于0.2，即為模型成功大鼠，本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统晒β?94.7%。有關(guān)大鼠學(xué)習(xí)、記憶研究將另文報(bào)道。

2.2 實(shí)驗(yàn)動物分組、給藥及樣品制備 在手術(shù)第 49 天，模型成功大鼠隨機(jī)分4組，模型對照組和3劑量藥物組，藥物組大鼠連續(xù)用SBF灌胃(每日劑量為35、70和140 mg/kg)36 d，模型對照組和假手術(shù)對照組大鼠給予等體積的生理鹽水。大鼠手術(shù)第85天，即給藥第36天，所有大鼠在給藥60 min后乙醚麻醉，斷頭處死，冰上分離大腦皮層放在1.5 mL無RNA酶的EP管中，凍存于-80 ℃超低溫冰柜中備用。

2.3 Western blotting檢測大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak的測定 200 mg皮層組織與1.5 mL Mito Solution反復(fù)研磨，800 ×g4℃ 離心5 min，取上清12 000×g4 ℃ 再離心10 min，此時(shí)上清液為細(xì)胞的胞液成分，在管底的沉淀即為線粒體。

將得到的線粒體加入0.2 mL Mito Solution進(jìn)行洗滌，12 000×g4 ℃ 離心10 min，棄上清，沉淀加RIPA裂解液，得到線粒體液，利用BCA法測定線粒體蛋白濃度。樣品與上樣buffer混勻，95 ℃ 加熱使蛋白變性，根據(jù)測定的蛋白濃度每孔上樣50 μg，10% SDS-PAGE分離蛋白約1.5 h，轉(zhuǎn)移至PVDF膜封閉2 h。在Ⅰ抗Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak稀釋液中孵育PVDF膜2 h，TBST洗后置于Ⅱ抗稀釋液孵育1 h，TBST洗后蛋白印跡顯影，膠片掃描后，采用Quantity One 軟件對顯影條帶進(jìn)行分析，計(jì)算Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak條帶與β-actin條帶的體積比和光密度比值，作為它們的蛋白相對表達(dá)量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 半枝蓮黃酮對復(fù)合Aβ25-35所致大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2蛋白表達(dá)的影響

圖1顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.01)。然而劑量為35、70和140 mg/kg的SBF不同程度地增加了大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2的蛋白表達(dá)，與模型組相比，SBF 70和140 mg/kg組的Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著增加(P<0.05或P<0.01)。

Figure 1.The effect of SBF on Bcl-2 protein relative expression level in the cerebral cortex cell mitochondria of the rats treated with composite Aβ25-35.Mean±SD.n=3.##P<0.01vssham;*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

圖1 SBF對注射復(fù)合Aβ25-35大鼠的皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2蛋白表達(dá)的影響

2 半枝蓮黃酮對復(fù)合Aβ25-35所致大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bax蛋白表達(dá)的影響

圖2顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bax的蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01)。然而，劑量為 35、70和140 mg/kg的SBF能顯著降低復(fù)合Aβ25-35所致的大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bax蛋白表達(dá)量的升高(P<0.05或P<0.01)。

Figure 2.The effect of SBF on Bax protein relative expression level in the cerebral cortex cell mitochondria of the rats treated with composite Aβ25-35. Mean±SD.n=3.##P<0.01vssham;*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

圖2 SBF對注射復(fù)合Aβ25-35大鼠的皮層細(xì)胞線粒體膜上Bax蛋白表達(dá)的影響

3 半枝蓮黃酮對復(fù)合Aβ25-35所致大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-xL蛋白表達(dá)異常的影響

圖3顯示，與假手術(shù)組相比，(P<0.01)。然而，劑量為 35、70和140 mg/kg的SBF能顯著增加注射復(fù)合Aβ25-35大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-xL蛋白的表達(dá)量(P<0.05或P<0.01)。

4 半枝蓮黃酮對復(fù)合Aβ25-35所致大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bak蛋白表達(dá)異常的影響

與假手術(shù)組相比，模型組大鼠皮層中Bak蛋白的表達(dá)明顯增加(P<0.01)。然而，劑量為35、70和140 mg/kg的SBF顯著降低注射復(fù)合Aβ25-35大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bak蛋白的表達(dá)量(P<0.01)，見圖4。

討 論

流行病調(diào)查顯示，隨著全球人類的老齡化，神經(jīng)退行性病人日益增多，而神經(jīng)細(xì)胞凋亡性病理改變是這些病人神經(jīng)病變主要的特征性改變之一[12]。細(xì)胞凋亡又稱為細(xì)胞程序化死亡，是一個(gè)高度主動有序、多個(gè)基因和蛋白因子參與調(diào)控的正常的生理活動過程[13]。然而，當(dāng)細(xì)胞遭受病理性刺激后，細(xì)胞凋

Figure 3.The effect of SBF on Bcl-xL protein relative expression level in the cerebral cortex cell mitochondria of the rats treated with composite Aβ25-35. Mean±SD.n=3.##P<0.01vssham;*P<0.05,**P<0.01vsmodel.

圖3 SBF對注射復(fù)合Aβ25-35大鼠的皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-xL蛋白表達(dá)的影響

Figure 4.The effect of SBF on Bak protein relative expression level in the cerebral cortex cell mitochondria of the rats treated with composite Aβ25-35. Mean±SD.n=3.##P<0.01vssham;**P<0.01vsmodel.

圖4 SBF對注射復(fù)合Aβ25-35大鼠的皮層細(xì)胞線粒體膜上Bak蛋白表達(dá)的影響

亡就會異常加劇，而異常的細(xì)胞凋亡與一系列疾病包括神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14-15]。

在神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)細(xì)胞凋亡是神經(jīng)元丟失的重要原因，Aβ蛋白可以引起神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子失衡，而鈣離子超載與線粒體途徑凋亡有密切關(guān)系。線粒體凋亡路徑為Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的主要途徑，其中Aβ可引起線粒體的損害和相關(guān)凋亡蛋白的改變。眾所周知，線粒體是機(jī)體能量的動力工廠，線粒體的狀態(tài)是否正常直接調(diào)控著細(xì)胞的死亡模式，而線粒體通路中相關(guān)凋亡因子在疾病發(fā)生、發(fā)展以及藥物作用研究中發(fā)揮重要作用。線粒體膜上存在著多種與細(xì)胞凋亡相關(guān)的重要蛋白因子，Bcl-2家族成員Bcl-2、Bax、Bak、Bcl-xL等嚴(yán)格控制著線粒體外膜的通透性，調(diào)控細(xì)胞色素C(cytochrome C，Cyt-C)的釋放和細(xì)胞凋亡[16]。Bcl-2和Bax是線粒體外膜上一對相互拮抗的細(xì)胞凋亡因子，Bcl-2是抗細(xì)胞凋亡因子，它能夠降低線粒體膜的通透性，抑制Cyt-C的釋放；Bax是促細(xì)胞凋亡因子，正常情況下Bax是以單體形式存在于線粒體膜上，當(dāng)細(xì)胞接受凋亡信號時(shí)，Bax則形成二聚體促進(jìn)Cyt-C的釋放，同時(shí)Bcl-2能夠抑制Bax的構(gòu)象改變，阻止Bax二聚體的形成而減少Cyt-C 的釋放。Bak與Bcl-xL是線粒體外膜上又一對互相拮抗的凋亡因子，Bak促進(jìn)細(xì)胞凋亡，Bcl-xL抑制細(xì)胞凋亡，Bak和Bcl-xL也是通過影響線粒體外膜的通透性來調(diào)節(jié)Cyt-C釋放，當(dāng)Bak占優(yōu)勢時(shí)Cyt-C自線粒體釋放。當(dāng)細(xì)胞色素C一旦從線粒體釋放到胞液中，Cyt-C則與凋亡蛋白酶激活因子1(apoptosis protease-activated factor-1，Apaf-1)和caspase-9相互作用，從而激活caspase-3,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[17]。

在細(xì)胞線粒體凋亡通路中，DNA被降解為片段也是細(xì)胞凋亡常見的結(jié)果[18]。有人認(rèn)為在神經(jīng)退行性病人中最初可能是DNA損傷，然后出現(xiàn)Bcl-2和Bax調(diào)控的改變，直至細(xì)胞死亡丟失。更有報(bào)道在神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)Bax的表達(dá)，表明Bax可能是神經(jīng)元死亡的早期事件[19]。體外研究發(fā)現(xiàn)，Aβ能上調(diào)Bak的表達(dá)，下調(diào)Bcl-xL的表達(dá)；體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Aβ使腦內(nèi)Bak表達(dá)增強(qiáng)，使Bcl-xL的表達(dá)減少或者沒有明顯影響[20]，故推測Aβ可能通過促進(jìn)Bak的表達(dá)來改變Bak/Bcl-xL之間的平衡，而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在內(nèi)源性凋亡途徑中，Bcl-2和Bcl-xL可直接在線粒體外膜上形成一種陽離子通道和穩(wěn)定的膜電位，該通道抑制Cyt-C的釋放。Bax和Bak在線粒體外膜上通過空間構(gòu)象的改變形成的通道是一種陰離子通道，而該通道促進(jìn)Cyt-C的釋放，這樣抗凋亡因子和促凋亡因子在線粒體膜上形成的通道對Cyt-C的釋放起相反的調(diào)控作用[21]。進(jìn)一步實(shí)質(zhì)性的研究發(fā)現(xiàn)，線粒體Cyt-C的釋放是通過膜滲透性轉(zhuǎn)變孔道復(fù)合物(permeability transition pore complex, PTPC)來完成的，Bcl-2家族的凋亡因子直接調(diào)節(jié)著PTPC，而PTPC是一種大分子多蛋白復(fù)合體，其大部分組件是電壓依從性陰離子通道，線粒體膜上促凋亡因子Bax和Bak能夠直接打開脂質(zhì)體電壓依從性陰離子通道，消除線粒體膜電位，促進(jìn)Cyt-C的釋放；線粒體膜上抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL能夠穩(wěn)定膜電位，阻止Cyt-C的釋放[22]。釋放的Cyt-C進(jìn)一步激活其下游凋亡因子，直至激活最終效應(yīng)因子caspase-3而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

細(xì)胞凋亡特別是線粒體凋亡通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡直接參與了神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展，因此，任何能夠抑制細(xì)胞凋亡的手段，都有利于這些疾病的治療。本研究利用腦室注射Aβ25-35聯(lián)合AlCl3和rhTGF-β1建立多因素神經(jīng)損傷模型，探討大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak的變化以及SBF干預(yù)的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)大鼠相比，腦室注射復(fù)合Aβ25-35大鼠皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2和Bcl-xL的蛋白表達(dá)明顯降低、Bax和Bak的蛋白表達(dá)明顯增加。Bcl-2/Bax和Bcl-xL/Bak這兩對作用相反的細(xì)胞凋亡因子共同促進(jìn)Cyt-C的釋放，激活其下游的一系列凋亡因子，引發(fā)細(xì)胞凋亡。然而，SBF灌胃模型大鼠36 d明顯翻轉(zhuǎn)由復(fù)合Aβ25-35所致皮層細(xì)胞線粒體膜上Bcl-2、Bcl-xL、Bax和Bak蛋白表達(dá)的異常，穩(wěn)定線粒體凋亡通路相關(guān)凋亡因子，抑制Cyt-C的釋放，從而抑制細(xì)胞凋亡。

本實(shí)驗(yàn)室以往的研究已經(jīng)證明，SBF能顯著改善去卵巢大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙及免疫、內(nèi)分泌異常，調(diào)節(jié)腦內(nèi)自由基系統(tǒng)，SBF這些作用源于它是黃酮類化合物，具有多羥基結(jié)構(gòu)和較強(qiáng)的還原性，可通過自身氧化阻止膜脂質(zhì)結(jié)構(gòu)過氧化，保證了包括線粒體在內(nèi)膜結(jié)構(gòu)的完整性和通透性。結(jié)合以往的研究，本實(shí)驗(yàn)提示，SBF改善復(fù)合Aβ25-35所致皮層細(xì)胞線粒體膜Bcl-2、Bax、Bcl-xL和Bak蛋白異常表達(dá)與其對線粒體膜結(jié)構(gòu)的保護(hù)密切相關(guān)，而線粒體結(jié)構(gòu)與功能以及線粒體凋亡通路的正常調(diào)節(jié)都參與了SBF 抗細(xì)胞凋亡的過程。本研究為SBF可用于神經(jīng)退行性疾病的治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Effect ofScutellariabarbataflavonoids on abnormal changes of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bak protein expression in mitochondrial membrane induced by composite Aβ25-35

ZHAO Hong-xiang, GUO Ke, CUI Ya-di, WU Xiao-guang, SHANG Ya-zhen

(InstituteofTraditionalChineseMedicine,ChengdeMedicalCollege,HebeiProvinceKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicineResearchandDevelopment,HebeiProvincialResearchOfficeofTraditionalChineseMedicineAgainstDementia,Chengde067000,China.E-mail:shangyz1018@sina.com)

AIM: To study the abnormalities of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bax in the cell mitochondrial membrane of cerebral cortex in the rats injected with β-amyloid beta protein 25-35 (Aβ25-35) in combination with aluminum trichloride (AlCl3) and recombinant human transforming growth factor β1(rhTGF-β1) (composite Aβ25-35) into lateral cerebral ventricle, and to explore the intervention ofScutellariaBarbataflavonoids (SBF). METHODS: The male SD rats were used to establish the neuronal damaged model by receiving injection of rhTGF-β1 1 μL (10 ng) on day 1 of operation, and then from day 2 of operation, intracerebroventricular injection of Aβ25-35(4 μg/d， consecutive 14 d) in the morning and 1% AlCl3in the afternoon (3 μL/d， consecutive 5 d). On the day 49 of operation, the successful model rats were randomly divided into model control and 3 doses of SBF groupss. The rats in SBF groups were daily orally administered with SBF at doses of 35, 70 and 140 mg/kg for 36 d. All the rats were decapitated 60 min after the last administration. The protein expression of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bak in rat cerebral cortex cell mitochondrial membrane was detected by Western blotting. RESULTS: The composite Aβ25-35dramatically caused decreases in Bcl-2 and Bcl-xL (P<0.05), and increases in Bax and Bak (P<0.01) in rat cerebral cortex cell mitochondrial membrane. However, oral treatment with SBF for 36 d reversed the above disorders induced by composite Aβ25-35. CONCLUSION: The composite Aβ25-35induces the expression abnormalities of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bak in mitochondrial membrane and SBF reverses the above disturbances of apoptotic factors.

Scutellariabarbata flavonoids; β-Amyloid beta protein 25-35; Aluminum trichloride; Recombinant human transforming growth factor β1; Mitochondrial apoptosis pathway

1000- 4718(2014)12- 2262- 05

2014- 06- 23

2014- 09- 17

河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. C2009001007； No. H2014406048)；河北省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(No. 05027)；河北省高校重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2014.12.026

△通訊作者Tel: 0314-2290616; E-mail: shangyz1018@sina.com