高凱 黃春林

·短篇論著·

附子提取物的大鼠生殖毒性研究

高凱 黃春林

目的 探討附子提取物對(duì)雌性大鼠生殖毒性的影響。方法 附子提取物給大鼠連續(xù)灌胃30 d, 考察臟器指數(shù)、動(dòng)情期觀察、生殖激素含量變化。結(jié)果 附子提取物造成雌性大鼠動(dòng)情周期紊亂 ,臟器指數(shù)明顯下降 , 性激素 ：卵泡刺激素 (FSH)、黃體生成素 (LH)、雌二醇 (E2)、孕酮 (P)含量較陰性對(duì)照組均顯著下降。結(jié)論 附子提取物的生殖毒性作用可能與 FSH、LH、E2、P 含量下降有關(guān) , 提示提高性激素水平 , 可有助于降低附子提取物的生殖毒性。

附子；生殖毒性 ；動(dòng)情周期；性激素

附子是傳統(tǒng)的有毒性的中藥 , 本研究擬通過(guò)連續(xù) 30 d 給予附子提取物后大鼠產(chǎn)生的生殖毒性的反應(yīng) , 探討其可能的生殖系統(tǒng)毒性的作用機(jī)制 , 為附子臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 材料與試劑 附子提取物 , 藥粉 , 規(guī)格 ：16 g 藥材 /g ；促性腺激素釋放激素 (GnRH)試劑盒、卵泡刺激素 (FSH)試劑盒、黃體生成素 (LH)試劑盒、雌二醇 (E2)試劑盒、孕酮 (P)試劑盒 , 均購(gòu)自大連泛邦試劑公司。SD 大鼠購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1. 2 實(shí)驗(yàn)方法 動(dòng)物購(gòu)進(jìn)后適應(yīng)性觀察 7 d, 雌性大鼠按體重隨機(jī)分為四組 , 每組 24 只 ；分別是陰性對(duì)照組、附子提取物低劑量組 (3.0 g/kg)、附子提取物中劑量組 (6.0 g/kg)、附子提取物高劑量 (18.0 g/kg)。觀察時(shí)間點(diǎn)分別設(shè)置在給藥 15、30 d 及停藥 60 d(即實(shí)驗(yàn)第 75 天 ), 剖解各劑量組動(dòng)物 8 只 ,檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差 ( x-±s)表示 , 采用 t檢驗(yàn) ；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2. 1 附子提取物對(duì)雌性大鼠臟器指數(shù)的影響 雌性大鼠給藥 15 d 附子提取物高劑量組的卵巢和給藥 60 d 附子提取物低劑量組的子宮的臟器指數(shù)明顯低于陰性對(duì)照組 (P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2. 2 附子提取物對(duì)雌性大鼠動(dòng)情周期的影響 試驗(yàn)期間發(fā)現(xiàn)給藥組大鼠動(dòng)情周期紊亂 , 具體表現(xiàn)為各期不連續(xù)、不規(guī)律、發(fā)情后期缺失。與陰性對(duì)照組比較 , 附子提取物高劑量組雌性大鼠的發(fā)情期明顯延長(zhǎng) (P＜0.05), 發(fā)情后期明顯縮短(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

2. 3 附子提取物對(duì)生殖激素的影響 在雌性大鼠中 , 附子提取物各劑量組 FSH、LH、E2、P 含量與陰性對(duì)照組比較均明顯下降 (P＜0.05 或 P＜0.01), 而 GnRH 含量無(wú)顯著性變化。見(jiàn)表3。

表1 附子提取物對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響

表1 附子提取物對(duì)大鼠臟器系數(shù)的影響

注 ：與陰性對(duì)照組比較 ,aP＜0.05

實(shí)驗(yàn)時(shí)間 ( d ) 組別 陰性對(duì)照組 附子提取物低劑量 附子提取物中劑量 附子提取物高劑量1 5 卵巢 0 . 0 5 4 ± 0 . 0 1 2 0 . 0 5 0 ± 0 . 0 1 4 0 . 0 5 1 ± 0 . 0 1 7 0 . 0 4 1 ± 0 . 0 2 1a子宮 0 . 3 2 1 ± 0 . 0 5 0 0 . 3 0 6 ± 0 . 1 1 1 0 . 3 1 5 ± 0 . 0 8 6 0 . 3 2 4 ± 0 . 0 4 3 3 0 卵巢 0 . 0 5 1 ± 0 . 0 1 8 0 . 0 5 0 ± 0 . 0 1 2 0 . 0 4 9 ± 0 . 0 1 0 0 . 0 4 2 ± 0 . 0 1 1子宮 0 . 3 1 4 ± 0 . 1 2 7 0 . 3 6 4 ± 0 . 0 7 8 0 . 3 7 1 ± 0 . 0 8 8 0 . 2 5 8 ± 0 . 1 0 0 6 0 卵巢 0 . 0 5 5 ± 0 . 0 1 3 0 . 0 5 1 ± 0 . 0 1 1 0 . 0 5 3 ± 0 . 0 2 2 0 . 0 5 0 ± 0 . 0 1 2子宮 0 . 3 6 2 ± 0 . 1 0 6 0 . 3 3 6 ± 0 . 0 7 2a 0 . 3 8 7 ± 0 . 0 6 8 0 . 3 6 6 ± 0 . 0 9 2

表2 附子提取物對(duì)雌性大鼠動(dòng)情周期的影響

表2 附子提取物對(duì)雌性大鼠動(dòng)情周期的影響

注 ：與陰性對(duì)照組比較 ,aP＜0.05

組別 發(fā)情前期 發(fā)情期 發(fā)情后期 發(fā)情間期陰性對(duì)照組 1 6 . 4 ± 2 . 1 1 3 . 6 ± 1 . 8 1 1 . 1 ± 2 . 9 1 7 . 2 ± 3 . 2附子提取物低劑量 1 3 . 7 ± 2 . 1 1 7 . 4 ± 2 . 5 1 0 . 1 ± 2 . 8 1 8 . 5 ± 3 . 1附子提取物中劑量 1 5 . 8 ± 3 . 2 1 7 . 8 ± 1 . 5 9 . 1 ± 1 . 3 1 7 . 6 ± 2 . 5附子提取物高劑量 1 4 . 9 ± 2 . 0 2 0 . 3 ± 3 . 2a 8 . 8 ± 2 . 1a 1 8 . 2 ± 1 . 8

表3 附子提取物對(duì)雌性大鼠生殖激素的影響

表3 附子提取物對(duì)雌性大鼠生殖激素的影響

注 ：與陰性對(duì)照組比較 ,aP＜0.05,bP＜0.01

實(shí)驗(yàn)天數(shù) ( d ) 組別 G n R H ( m I U / m l ) F S H ( I U / L ) L H ( m I U / m l ) E2( p m / m l ) P ( n g / m l )陰性對(duì)照組 1 4 . 3 4 ± 2 . 3 5 1 . 5 8 ± 0 . 3 2 9 . 6 8 ± 2 . 1 2 3 1 . 1 4 ± 4 . 1 1 4 . 3 0 ± 0 . 8 2 3 0 附子提取物低劑量 1 2 . 3 3 ± 2 . 6 4 0 . 6 7 ± 0 . 2 8b 7 . 3 2 ± 1 . 7 8a 1 6 . 5 2 ± 6 . 8 7b 1 . 6 1 ± 0 . 6 8b附子提取物中劑量 1 6 . 3 3 ± 1 . 4 7 0 . 7 1 ± 0 . 1 3b 7 . 4 2 ± 0 . 9 1a 1 5 . 9 1 ± 5 . 3 0b 1 . 4 2 ± 0 . 3 8b附子提取物高劑量 1 8 . 5 0 ± 1 . 7 9 0 . 8 2 ± 0 . 4 4b 7 . 9 1 ± 0 . 8 1b 1 1 . 1 9 ± 3 . 0 7b 1 . 1 8 ± 0 . 6 4b

3 討論

附子提取物對(duì)雌性大鼠生殖臟器子宮和卵巢均有一定毒性 , 表現(xiàn)為臟器指數(shù)下降 ；其次附子提取物對(duì)雌性大鼠動(dòng)情周期也有一定影響 , 表現(xiàn)為發(fā)情期延長(zhǎng) , 發(fā)情后期縮短 ；最后附子提取物可降低雌性大鼠血清中 FSH、LH、E2和 P 的含量 , 附子提取物降低 FSH 的含量 , 影響卵泡的發(fā)育和分化 ,促進(jìn)顆粒細(xì)胞的凋亡。LH 含量的減少 , 使其阻止 GnRH 啟動(dòng)的顆粒細(xì)胞凋亡的效應(yīng)減弱 ；FSH 和 LH 分泌的減少會(huì)直接影響卵巢分泌 E2和 P 的能力 , E2和 P 的減少又進(jìn)一步影響了卵泡的成熟和加劇顆粒細(xì)胞的凋亡 , 這些激素的降低共同促進(jìn)了卵泡的閉鎖［1］。

［1］王根林 .下丘腦 - 垂體 - 性腺軸在動(dòng)物生殖中的作用 .畜牧與獸醫(yī) , 1997, 29(4):182-183.

Research of reproductive toxicity of mice by extractive of monkshood

GAO Kai, HUANG Chun-lin. Hainan Star Pharmaceutical Ltd, Haikou 571400, China

Objective To investigate the influence of extractive of monkshood on the reproductive toxicity of female mice. Methods Gavages to mice was applied continuously for 30 days with extractive of monkshood. The organ index, estrus cycle, and change of reproductive hormone were investigated. Results The extractive of monkshood caused disorders of estrous cycle and obvious decline of visceral index. Contents of sex hormones, such as follicle-stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH), estradiol (E2), and progesterone (P) were significantly decreased compared with negative control group. Conclusion The reproductive toxicity of extractive of monkshood may have relation with decreased contents of FSH, LH, E2, and P. Increasing the level of sex hormone can be helpful in decreasing the reproductive toxicity of extractive of monkshood.

Monkshood; Reproductive toxicity; Estrous cycle; Sex hormones

2014-05-12］

571400 海南斯達(dá)制藥有限公司