賽那瓦爾·芒思爾， 張 戈， 鄒國安， 阿吉艾克拜爾·艾薩

(中國科學院新疆理化技術(shù)研究所，中國科學院干旱區(qū)植物資源化學重點實驗室，省部共建新疆特有藥用資源利用國家重點實驗室培育基地， 烏魯木齊 830011)

駱駝刺(AlhagisparsifoliaShap.)是豆科(Leguminosae)駱駝刺屬植物，具有開通阻滯、止咳祛痰、消除異常黏液質(zhì)等功效，用于治療腹痛腹脹、痢疾腹瀉、風濕等癥[1]。駱駝刺提取物有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗腫瘤、降糖等藥理活性[2]。主要藥效活性成分為黃酮苷類化合物，其中異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷的量較多。自身可通過抑制α-淀粉酶降低血糖，并能抑制淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒[3-4]。

駱駝刺為維吾爾醫(yī)常用藥材。但因長期以來缺乏質(zhì)量控制用對照品，原藥材和各種復方成藥的質(zhì)量控制問題未得到解決。本實驗以駱駝刺為原料, 采用制備高效液相色譜等分離方法制備化學對照品異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷并進行標準物質(zhì)研究, 為駱駝刺原藥材及復方成藥的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

戴安Ultimate TM3000系列液相色譜議包括LPG-3400RS泵系統(tǒng)、VWD-3100紫外檢測器、WPS-3000自動進樣器和TCC-3000RS柱溫箱(Dionex, CAL. USA)，4000 QTRAP型三重四級桿-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜儀(ABI, USA)，Waters 全自動純化系統(tǒng)，2545型高壓二元泵，2489型紫外檢測器，3100型質(zhì)譜檢測器(Waters ,USA)。

色譜柱Inertsil ODS-SP, I.D.4.6 mm×250 mm, 4 μm (GL Sciences, Tokyo, Japan),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buch, SHZ-D),電子天平 (SEJ180-4)。色譜柱及薄層色譜板均為煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司產(chǎn)品， 甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑為分析純。

駱駝刺藥材2008年8月購買于新疆托克遜縣，經(jīng)中國科學院新疆生態(tài)與地理研究所生物標本館沈觀冕研究員鑒定為豆科駱駝刺屬植物駱駝刺(AlhagisparsifoliaShap.)。

2 方法與結(jié)果

2.1原料處理取駱駝刺草藥材3 kg, 95%乙醇回流提取3次, 每次1 h, 合并醇提液, 減壓濃縮至浸膏狀(271 g), 加水混懸, 分別用石油醚、氯仿、乙酸乙醇及正丁醇萃取, 取正丁醇部位濃縮成浸膏(121 g), 加硅膠拌樣, 上樣于硅膠柱(200～300 目), 依次用氯仿-甲醇(90∶10～70∶30)、氯仿-甲醇-水(70∶30∶10～60∶40∶10)梯度洗脫，取氯仿-甲醇-水(70∶30∶10～60∶40∶10)的洗脫流份上樣于sephadex LH-20 柱, 甲醇洗脫, 合并黃酮苷富集流份，待制備行高相液相進一步分離。

2.2色譜條件

2.2.1 制備型高效液相色譜條件 Waters C18 sunfireTM(300 mm× 25 mm, 6 m)，流動相為乙腈∶水(13∶87)，體積流量20 mL/min， 檢測波長254 nm，進樣量300 μL( 5 mg/mL,MeOH) 。

2.2.2 對照品的制備分離 取異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷粗品加甲醇配制成5 mg/mL 的溶液, 制備高效液相色譜法多次進樣分離純化, 每次進樣量為300 μL, 收集保留時間為70 min 色譜峰(制備HPLC色譜圖見圖1), 減壓回收至干后置恒溫干燥箱(60℃)干燥10 h, 得到黃色無定性粉末。

圖1 乙腈-水13∶87為流動相比例分離圖譜

2.3樣品的檢測

2.3.1 薄層色譜檢測 取異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷自制品, 加甲醇配制成2 mg/ mL 的溶液, 點樣量分別為20 μg(點1)、40 μg(點2)、60 μg(點3)、80 μg(點4)，濃度依次增加，點樣于硅膠G 薄層色譜板，以15%硫酸乙醇溶液為顯色劑，其中硅膠G 薄層色譜展開劑分別為:氯仿-甲醇-水( 7∶3∶0.5)(圖2a)和丙酮-乙酸乙酯-水(8∶3∶1)(圖2b)，紫外光燈( 254 nm) 下檢視,在2種展開系統(tǒng)中均見單一黃色主成分斑點, 無雜質(zhì)斑點。比移值分別為0.37和0.61。

2a 2b

2.3.2 HPLC-UV檢測 取異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷制品, 加甲醇配制成1 μg/mL 的溶液, Waters sunfireTM C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 流動相為乙腈∶水(80∶20),體積流量為1 mL/min，檢測波長為254 nm， 進樣量為10 μL條件下面積歸一化法定量分析, 結(jié)果自制品的質(zhì)量分數(shù)為99.01%, HPLC-UV百分含量檢查圖譜見圖3。

圖3 異鼠李素-3-O-蕓香糖苷對照品HPLC譜圖

2.4結(jié)構(gòu)確定異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷為黃色粉末，易溶解于四氫呋喃，微溶于甲醇、水,難溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于石油醚。光譜分析結(jié)果如下：UVλMeOH max(logε)∶255 nm (1.15), 360 nm (0.83)， IR νmax cm-1:3 382，1 654，1 602，1 503，1 453。MS ESI-MSm/z(%):ESI-MS[M-H]-623。異鼠李素-3-O-蕓香糖苷對照品化學結(jié)構(gòu)見圖4。自制異鼠李素-3-O-蕓香糖苷1H-NMR，13C-NMR信息和文獻報道的異鼠李素-3-O-蕓香糖苷的1H-NMR、13C-NMR譜圖對比，結(jié)果一致(表1、2)。因此，推斷該化合物的分子式為C28H32O16。

圖4 異鼠李素-3-O-蕓香糖苷對照品化學結(jié)構(gòu)

表1 異鼠李素-3-O-蕓香糖苷的1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)數(shù)據(jù)歸屬

表2 異鼠李素-3-O-蕓香糖苷的13C-NMR(600 MHz,DMSO-d6) 數(shù)據(jù)歸屬

3 討論

初步的藥理實驗研究亦表明，異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖是駱駝刺的主要有效成分之一，其事實上也是草本植物中分布普遍、比較常見的黃酮雙糖苷類化合物。本課題組選擇異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷為本植物特征性指標成分并進行標準物質(zhì)研究, 專屬性較強, 具有質(zhì)量控制意義。采用硅膠富集結(jié)合凝膠柱色和制備高效液相從駱駝刺中制備異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷，樣品損失少，方法簡單，可快捷有效地得到異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷對照品，為駱駝刺藥材和復方制劑質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ)；為實現(xiàn)維吾爾藥的現(xiàn)代化及與國際市場接軌服務，由此帶來可觀的社會效益和經(jīng)濟效益。

參考文獻：

[1] 李君山，劉勇民，蔡少青. 維吾爾醫(yī)用駱駝刺類藥材的資源、商品流通及民間應用研究[J]. 中國民族醫(yī)藥雜志, 1996, 2(2):39-40.

[2] 張貴杰，李寧，倪慧，等. 駱駝刺屬植物的化學成分與生物活性[J]. 國外醫(yī)藥:植物藥分冊, 2008, 23(4):157-160.

[3] 蘇小川，黃昀，趙永昕，等. 駱駝刺中黃酮類化合物的提取工藝研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2009, 20(6):1333-1334.

[4] 時永杰. 疏葉駱駝刺[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2003，(S1):140-141.

[5] 劉墨祥，鄭毅男，劉日月，等. 旱柳葉中異鼠李素-3-蕓香糖甙和咖啡酸的分離與鑒定[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學學報, 1998, 29(1):9-12，22.