鄭玉梅+++劉鵬

摘 要：目的：研究炎寧膠囊中對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法。方法：用60%乙醇超聲提取，以Agilent XDB C18色譜柱為固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為308nm。結(jié)果：陰性樣品無干擾，方法專屬性良好；在0.59～11.8μg/ml范圍內(nèi)，對(duì)香豆酸的峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，R2=0.9999；平均回收率為102.5%，RSD為0.22%；供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)論：方法快速，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，可用于該制劑的穩(wěn)定性考察及成品質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；炎寧膠囊；對(duì)香豆酸；含量測(cè)定

炎寧膠囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。白花蛇舌草清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。鴨跖草清熱解毒，利水消腫。治水腫，腳氣，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黃疸肝炎，熱痢，瘧疾，鼻衄，尿血，血崩，白帶，咽喉腫痛，癰疽疔瘡。炎寧顆粒由以上三味藥精制而成，其中所含的對(duì)香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。為了能更有效地控制其質(zhì)量，文章采用高效液相色譜法建立了對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

儀器： Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測(cè)器， Agilent 化學(xué)工作站。

試藥：甲醇，色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對(duì)香豆酸對(duì)照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量測(cè)定用）。

2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

對(duì)對(duì)香豆酸進(jìn)行紫外波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在308nm處有最大吸收波長(zhǎng)，在此吸收波長(zhǎng)下，對(duì)對(duì)香豆酸進(jìn)行含量測(cè)定。對(duì)香豆酸的紫外掃描圖見圖1。

圖1 對(duì)香豆酸UV光譜圖

3 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱（5？滋m，250×4.6mm），檢測(cè)波長(zhǎng)308nm，流動(dòng)相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此條件下，樣品能得到較好的分離，理論板數(shù)按對(duì)香豆酸計(jì)算均不得低于3000。見圖2（a）是樣品液相色譜圖， （b）是對(duì)照品溶液液相色譜圖。

4 對(duì)照品溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀釋至100mL，搖勻，即得。作為對(duì)照品貯備液。

5 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超聲（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室溫后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，搖勻，過0.45？滋m微孔濾膜，即得。

6 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品貯備液0.5、2、4、6、8、10ml分別置10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別進(jìn)樣10？滋l，按上述色譜條件測(cè)定對(duì)香豆酸峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，木犀草素進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

線性回歸方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范圍之內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖3 對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

7 精密度

取批號(hào)為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件進(jìn)樣（相同體積重復(fù)進(jìn)樣6次），對(duì)香豆酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為%。結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

8 穩(wěn)定性

精密稱取批號(hào)為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件分別在間隔0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)后進(jìn)樣測(cè)定。對(duì)香豆酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12%，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由此可見，供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

9 重現(xiàn)性

精密稱取同一批號(hào)20100101樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定對(duì)香豆酸的峰面積。其平均值為0.290mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%。結(jié)果見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

10 回收率

精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入對(duì)香豆酸對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，并按上述條件測(cè)定對(duì)香豆酸的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為102.5%，RSD為0.22%。結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

11 樣品測(cè)定

按文章所述方法對(duì)三批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表6。

12 結(jié)束語

在試驗(yàn)過程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多種流動(dòng)相，結(jié)果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動(dòng)相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分離效果較好。實(shí)驗(yàn)中還考察了不同柱溫（10、20、30、40℃）對(duì)色譜分離效果的影響，結(jié)果各柱溫對(duì)分離效果無明顯區(qū)別、保留時(shí)間的影響有明顯區(qū)別。因此確定室溫即可。

本課題采用高效液相色譜法測(cè)定炎寧膠囊中主要藥效成分對(duì)香豆酸的含量，具有操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]張才華，郭興杰，薛秀峰，等.HPLC測(cè)定白花蛇舌草注射液中對(duì)香豆酸的含量[M].中國(guó)藥學(xué)雜志，2004.endprint

摘 要：目的：研究炎寧膠囊中對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法。方法：用60%乙醇超聲提取，以Agilent XDB C18色譜柱為固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為308nm。結(jié)果：陰性樣品無干擾，方法專屬性良好；在0.59～11.8μg/ml范圍內(nèi)，對(duì)香豆酸的峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，R2=0.9999；平均回收率為102.5%，RSD為0.22%；供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)論：方法快速，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，可用于該制劑的穩(wěn)定性考察及成品質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；炎寧膠囊；對(duì)香豆酸；含量測(cè)定

炎寧膠囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。白花蛇舌草清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。鴨跖草清熱解毒，利水消腫。治水腫，腳氣，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黃疸肝炎，熱痢，瘧疾，鼻衄，尿血，血崩，白帶，咽喉腫痛，癰疽疔瘡。炎寧顆粒由以上三味藥精制而成，其中所含的對(duì)香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。為了能更有效地控制其質(zhì)量，文章采用高效液相色譜法建立了對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

儀器： Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測(cè)器， Agilent 化學(xué)工作站。

試藥：甲醇，色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對(duì)香豆酸對(duì)照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量測(cè)定用）。

2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

對(duì)對(duì)香豆酸進(jìn)行紫外波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在308nm處有最大吸收波長(zhǎng)，在此吸收波長(zhǎng)下，對(duì)對(duì)香豆酸進(jìn)行含量測(cè)定。對(duì)香豆酸的紫外掃描圖見圖1。

圖1 對(duì)香豆酸UV光譜圖

3 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱（5？滋m，250×4.6mm），檢測(cè)波長(zhǎng)308nm，流動(dòng)相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此條件下，樣品能得到較好的分離，理論板數(shù)按對(duì)香豆酸計(jì)算均不得低于3000。見圖2（a）是樣品液相色譜圖， （b）是對(duì)照品溶液液相色譜圖。

4 對(duì)照品溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀釋至100mL，搖勻，即得。作為對(duì)照品貯備液。

5 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超聲（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室溫后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，搖勻，過0.45？滋m微孔濾膜，即得。

6 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品貯備液0.5、2、4、6、8、10ml分別置10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別進(jìn)樣10？滋l，按上述色譜條件測(cè)定對(duì)香豆酸峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，木犀草素進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

線性回歸方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范圍之內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖3 對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

7 精密度

取批號(hào)為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件進(jìn)樣（相同體積重復(fù)進(jìn)樣6次），對(duì)香豆酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為%。結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

8 穩(wěn)定性

精密稱取批號(hào)為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件分別在間隔0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)后進(jìn)樣測(cè)定。對(duì)香豆酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12%，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由此可見，供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

9 重現(xiàn)性

精密稱取同一批號(hào)20100101樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定對(duì)香豆酸的峰面積。其平均值為0.290mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%。結(jié)果見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

10 回收率

精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入對(duì)香豆酸對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，并按上述條件測(cè)定對(duì)香豆酸的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為102.5%，RSD為0.22%。結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

11 樣品測(cè)定

按文章所述方法對(duì)三批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表6。

12 結(jié)束語

在試驗(yàn)過程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多種流動(dòng)相，結(jié)果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動(dòng)相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分離效果較好。實(shí)驗(yàn)中還考察了不同柱溫（10、20、30、40℃）對(duì)色譜分離效果的影響，結(jié)果各柱溫對(duì)分離效果無明顯區(qū)別、保留時(shí)間的影響有明顯區(qū)別。因此確定室溫即可。

本課題采用高效液相色譜法測(cè)定炎寧膠囊中主要藥效成分對(duì)香豆酸的含量，具有操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]張才華，郭興杰，薛秀峰，等.HPLC測(cè)定白花蛇舌草注射液中對(duì)香豆酸的含量[M].中國(guó)藥學(xué)雜志，2004.endprint

摘 要：目的：研究炎寧膠囊中對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法。方法：用60%乙醇超聲提取，以Agilent XDB C18色譜柱為固定相，甲醇：0.3%磷酸=45∶55為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為308nm。結(jié)果：陰性樣品無干擾，方法專屬性良好；在0.59～11.8μg/ml范圍內(nèi)，對(duì)香豆酸的峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，R2=0.9999；平均回收率為102.5%，RSD為0.22%；供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)論：方法快速，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，可用于該制劑的穩(wěn)定性考察及成品質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；炎寧膠囊；對(duì)香豆酸；含量測(cè)定

炎寧膠囊的主要成分有鹿茸草、白花蛇舌草、鴨跖草。其中鹿茸草用于咳嗽，吐血，赤痢，帶下，牙齦炎，乳腺炎，癤腫。白花蛇舌草清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。鴨跖草清熱解毒，利水消腫。治水腫，腳氣，小便不利，感冒，丹毒，腮腺炎，黃疸肝炎，熱痢，瘧疾，鼻衄，尿血，血崩，白帶，咽喉腫痛，癰疽疔瘡。炎寧顆粒由以上三味藥精制而成，其中所含的對(duì)香豆酸是其主要的有效成分之一[1]。為了能更有效地控制其質(zhì)量，文章采用高效液相色譜法建立了對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

儀器： Agilent 1200 Series 高效液相色譜儀；Agilent DAD檢測(cè)器， Agilent 化學(xué)工作站。

試藥：甲醇，色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

對(duì)香豆酸對(duì)照品（由上海永恒生物科技有限公司提供，供含量測(cè)定用）。

2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

對(duì)對(duì)香豆酸進(jìn)行紫外波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在308nm處有最大吸收波長(zhǎng)，在此吸收波長(zhǎng)下，對(duì)對(duì)香豆酸進(jìn)行含量測(cè)定。對(duì)香豆酸的紫外掃描圖見圖1。

圖1 對(duì)香豆酸UV光譜圖

3 色譜條件

色譜柱：Agilent XDB C18色譜柱（5？滋m，250×4.6mm），檢測(cè)波長(zhǎng)308nm，流動(dòng)相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55，流速0.8ml/min。在此條件下，樣品能得到較好的分離，理論板數(shù)按對(duì)香豆酸計(jì)算均不得低于3000。見圖2（a）是樣品液相色譜圖， （b）是對(duì)照品溶液液相色譜圖。

4 對(duì)照品溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥至恒重的對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)品11.8mg，加甲醇使溶解，并定容至25mL，精密移取上述溶液2.5mL加甲醇稀釋至100mL，搖勻，即得。作為對(duì)照品貯備液。

5 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加60%乙醇超聲（40kHz，30℃）10min溶解，放置至室溫后定容，如有泡沫，滴加少量甲醇使泡沫消失，搖勻，過0.45？滋m微孔濾膜，即得。

6 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品貯備液0.5、2、4、6、8、10ml分別置10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，即得對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別進(jìn)樣10？滋l，按上述色譜條件測(cè)定對(duì)香豆酸峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，木犀草素進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

線性回歸方程：y=101.15x-5.5434 R2=0.9999，在0.59～11.8μg/ml范圍之內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖3 對(duì)香豆酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

7 精密度

取批號(hào)為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件進(jìn)樣（相同體積重復(fù)進(jìn)樣6次），對(duì)香豆酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為%。結(jié)果見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

8 穩(wěn)定性

精密稱取批號(hào)為20100101樣品，按供試品溶液制備方法制備，以上述色譜條件分別在間隔0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)后進(jìn)樣測(cè)定。對(duì)香豆酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12%，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由此可見，供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

9 重現(xiàn)性

精密稱取同一批號(hào)20100101樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，依上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定對(duì)香豆酸的峰面積。其平均值為0.290mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.47%。結(jié)果見表4。

表4 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

10 回收率

精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入對(duì)香豆酸對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，并按上述條件測(cè)定對(duì)香豆酸的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為102.5%，RSD為0.22%。結(jié)果見表5。

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

11 樣品測(cè)定

按文章所述方法對(duì)三批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表6。

12 結(jié)束語

在試驗(yàn)過程中，曾采用乙腈-水（45：55）、甲醇-0.1%冰醋酸（85：15）等多種流動(dòng)相，結(jié)果色譜峰分離效果均不理想而未被采用。文中選用的流動(dòng)相：甲醇：0.3%磷酸=45∶55分離效果較好。實(shí)驗(yàn)中還考察了不同柱溫（10、20、30、40℃）對(duì)色譜分離效果的影響，結(jié)果各柱溫對(duì)分離效果無明顯區(qū)別、保留時(shí)間的影響有明顯區(qū)別。因此確定室溫即可。

本課題采用高效液相色譜法測(cè)定炎寧膠囊中主要藥效成分對(duì)香豆酸的含量，具有操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]張才華，郭興杰，薛秀峰，等.HPLC測(cè)定白花蛇舌草注射液中對(duì)香豆酸的含量[M].中國(guó)藥學(xué)雜志，2004.endprint