金艷麗 （江蘇省新沂市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400）)

雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

金艷麗 （江蘇省新沂市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 221400）)

無(wú)菌操作采集江蘇省新沂市唐店鎮(zhèn)一養(yǎng)殖場(chǎng)部分10日齡病死雛雞組織病料，進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)與血清型鑒定。結(jié)果表明，分離菌株為雞白痢沙門氏茵，結(jié)合雛雞發(fā)病情況、臨床癥狀和病理變化等確診雛雞死于雞白痢沙門氏茵感染。對(duì)分離茵株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該分離茵對(duì)丁胺卡那、慶大霉素和呋喃妥因敏感。

雞 白痢 沙門氏 分離 鑒定 藥敏 試驗(yàn)

雞白痢沙門氏菌(SalmonellaPullor啪)極易引發(fā)雞白痢，通常只感染3周齡之內(nèi)的雛雞，偶爾會(huì)導(dǎo)致成年雞死亡。該菌除最易引起雞發(fā)病，也可感染鴨、雛鵝 、珍珠雞 、麻雀、鵪鶉等家禽和鳥類[1,2]?；疾∏蔌B與帶菌禽鳥

體內(nèi)的雞白痢沙門氏菌隨糞便排出，污染水源和飼料等，經(jīng)消化道感染健康禽鳥。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料 江蘇省新沂市唐店鎮(zhèn)一養(yǎng)殖場(chǎng)病死雞數(shù)只。

1.1.2 試劑 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯、麥康凱瓊脂、S.S瓊脂、鮮血瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.3 沙門氏菌屬診斷血清 購(gòu)于白蘭州生物制品研究所。

1.1.4 藥敏片 購(gòu)于深圳市優(yōu)康生物技術(shù)有限公司。

1.1.5 試驗(yàn)動(dòng)物 30日齡健康小白鼠20只。

1.2 方法

1.2.1 剖檢 剖檢病死雞觀察其病理變化，以便對(duì)該雞群所患疾病作出初步診斷 。

1.2.2 真菌的分離培養(yǎng)和寄生蟲檢查 取病死雞肺臟組織進(jìn)行真菌的分離培養(yǎng)以及寄生蟲檢查。

1.2.3 細(xì)菌分離培養(yǎng) 無(wú)菌操作挑取病死雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟組織，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、血液瓊脂、麥康凱瓊脂和S.S瓊脂培養(yǎng)基上置37℃條件下恒溫培養(yǎng)24h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況及菌落特征。將細(xì)菌純培養(yǎng)物接種于三糖鐵瓊脂，37℃培養(yǎng)24h。

1.2.4 分離菌的形態(tài)觀察 將病料直接涂片后。經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢；挑取培養(yǎng)基上可疑菌落涂片，經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢。

1.2.5 分離菌運(yùn)動(dòng)性觀察取分離菌純培養(yǎng)物。采用懸滴法檢查細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。

1.2.6 生化反應(yīng)及血清型鑒定 將分離菌株接種于糖發(fā)酵管和其他生化反應(yīng)管中，置于37℃溫箱培養(yǎng)，每日觀察；采用沙門氏菌診斷血清對(duì)分離菌株進(jìn)行血清型鑒定。

1.2.7 動(dòng)物試驗(yàn) 將純培養(yǎng)的細(xì)菌接種于5ml營(yíng)養(yǎng)肉湯。置于37℃培養(yǎng)24h。取20只小白鼠，雌雄各半。隨機(jī)分為2組，試驗(yàn)組小白鼠為14只，腹腔注射菌液0.1ml/只；對(duì)照組小自鼠6只，注射pH值為7.6的生理鹽水0.1ml/只，4h后不定時(shí)觀察。如有小自鼠發(fā)生死亡，則從死亡小白鼠心、肝、脾、肺、腎中分離致病菌，染色后鏡檢，并進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清型鑒定，以確定分離菌是否為所接菌種。

1.2.8 藥敏試驗(yàn) 將最終確定了血清型的沙門氏菌純培養(yǎng)物分別用滅菌生理鹽水沖洗，稀釋成濃度為3хlOtcfu/ml的菌液，吸取稀釋菌液均勻涂布于普通平板。室溫放置5min后，分別貼上各種藥敏紙片，37℃條件下培養(yǎng)16～18h，觀察并測(cè)量抑菌環(huán)大小 。

3 結(jié)果

3.1 病理變化

剖檢可見(jiàn)：病死雞肝臟腫大，大面積充血、出血，質(zhì)地極脆，易破裂；小腸段有壞死，腹腔內(nèi)表面肌肉有點(diǎn)狀出血；肺呈深紅色，邊緣有黑色壞死；有腹膜炎，腹腔器官相粘連。此病理變化與雞白痢沙門氏菌病相似[3]。

3.2 真菌分離培養(yǎng)與寄生蟲檢查

取肺組織進(jìn)行真菌分離培養(yǎng)未分離到任何真菌；于盲腸內(nèi)檢查到異刺線蟲7條，于腸道檢查到絳蟲l條，除此之外，未見(jiàn)其他寄生蟲和蟲卵。

3.3 分離菌株培養(yǎng)特性

分離菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上呈圓形、微隆起、光滑濕潤(rùn)、半透明或灰白色、邊緣整齊，為針尖大小“露珠狀”小菌落；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出無(wú)色透明、圓形小菌落；在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上不溶血；在S.S瓊脂培養(yǎng)基上形成中心黑色，邊緣灰白的透明小菌落；營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)呈均勻混濁，管底有少量沉淀物；三糖鐵培養(yǎng)基斜面為紅色，底層為黑色。

3.4 分離菌株的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)性

油鏡下觀察病料涂片，可發(fā)現(xiàn)少量革蘭氏陰性小直桿菌；鏡檢菌落涂片，可發(fā)現(xiàn)大量短小、兩端鈍圓、多數(shù)單個(gè)存在的革蘭氏陰性小桿菌，無(wú)莢膜 、無(wú)芽胞。經(jīng)懸滴法檢查發(fā)現(xiàn)該分離菌沒(méi)有運(yùn)動(dòng)性。

3.5 血清型鑒定

將分離菌株與沙門氏菌A～F多價(jià)血清進(jìn)行玻片凝集反應(yīng)，結(jié)果為陽(yáng)性。進(jìn)一步用單因子血清與分離菌株進(jìn)行凝集反應(yīng)，結(jié)果均與O因子發(fā)生凝集反應(yīng)。

3.6 生化特性

生化反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)附表。從附表可以看出，該分離菌不發(fā)酵麥芽糖、衛(wèi)矛醇、乳糖、蔗糖、木糖，不產(chǎn)生硫化氫，不能利用枸櫞酸鹽；具有賴氨酸脫羧酶和鳥氨酸脫羧酶。發(fā)酵葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇、鼠李糖。

附表 分離菌的生化特性

附圖 分離菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3.7 動(dòng)物試驗(yàn)

試驗(yàn)組小白鼠于12h內(nèi)死亡2只，24h內(nèi)全部死亡；并且能從死亡小白鼠的心、肝、脾、肺、腎等內(nèi)臟器官分離到細(xì)菌，通過(guò)革蘭氏染色鏡檢、生化試驗(yàn)和血清型鑒定確定為接種菌。而對(duì)照組小白鼠全部健活。

3.8 藥敏試驗(yàn)

從純培養(yǎng)的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取1個(gè)典型菌落，接種于5ml營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)18h，用滅菌棉試子分別蘸取菌液均勻涂布于普通平板，室溫下放置3～5min,用無(wú)菌鑷子夾取藥敏紙片，緊貼于瓊脂上，37℃培養(yǎng)18～24h后觀察，結(jié)果見(jiàn)附圖。從附圖可看出，分離菌株對(duì)于丁胺卡那，慶大霉素和呋喃因最敏感，其余藥物次之。

4 討論

4.1 分離菌為雞白痢沙門氏菌

取病死雞組織進(jìn)行真菌培養(yǎng)，未分離到任何真菌，進(jìn)行體表和體內(nèi)寄生蟲檢查，在剖檢雞盲腸內(nèi)共發(fā)現(xiàn)7條依次線蟲，在腸道檢查到1絳蟲，未見(jiàn)其他寄生蟲和蟲卵，因此，排除該批雛雞死于真菌感染和寄生蟲病。無(wú)菌操作挑取病死雞心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟組織，進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)，結(jié)果分離出1株細(xì)菌，通過(guò)血清鑒定，發(fā)現(xiàn)分離菌株與沙門氏菌A-F多價(jià)血清均發(fā)生凝聚反映，說(shuō)明分離菌是沙門氏菌屬的細(xì)菌，分離菌能與O因子血清發(fā)生凝聚反應(yīng)，可確定該菌是沙門氏菌D群中的血清型。該菌不舉運(yùn)動(dòng)性。結(jié)合生化反應(yīng)結(jié)果可確認(rèn)分離菌株屬于沙門氏菌屬D群中的雞白痢沙門氏菌。

4.2 沙門氏菌可經(jīng)種蛋垂直傳播

研究表明，沙門氏菌是重要的是腸道致病菌，其致病力可因細(xì)菌毒力和宿主反映的不同而異，輕者僅表現(xiàn)腹瀉，重者可呈現(xiàn)系統(tǒng)感染，如敗血癥、遷徙性病灶等。雞白痢沙門氏菌不僅能水平傳播，也能垂直傳播。雞白痢沙門氏菌持續(xù)感染產(chǎn)雞蛋，感染3周后，T細(xì)胞免疫增強(qiáng)而產(chǎn)蛋雞體內(nèi)細(xì)菌的數(shù)量減少，特異性抗體在成年雞只發(fā)生很小的變化，當(dāng)細(xì)菌再次侵入，刺激機(jī)體再次產(chǎn)生抗體抵御感染，這說(shuō)明非特異性免疫在雞白痢沙門氏菌感染扮演主要角色，形成帶菌免疫狀態(tài)，導(dǎo)致沙門氏菌傳遞給蛋。

4.3 避免產(chǎn)生耐藥性

通過(guò)藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該分離菌對(duì)丁胺卡那、慶大霉素和呋喃因最敏感。在生產(chǎn)中，不同地區(qū)雞白痢沙門氏菌對(duì)抗生素藥物的敏感性不同，同一地區(qū)不同養(yǎng)殖場(chǎng)該菌的藥敏情況也可能存在差異，故在應(yīng)用藥物防治雞白痢時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物進(jìn)行治療。同時(shí)，應(yīng)注意交替用藥，以防止產(chǎn)生耐藥性。

4.4 注意鑒別診斷

近年來(lái)，雞白痢在流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化等方面出現(xiàn)了新特點(diǎn)，使得診斷該病的難度增加，只是育成雞及成年雞因該病而造成的死淘率較高。在生產(chǎn)中，診斷時(shí)尤其要注意該病與禽霍亂、雞大腸桿菌病、馬立克病的鑒別診斷。雞白痢可造成大批死亡，這點(diǎn)易與禽霍亂發(fā)生混淆；雞白痢可引起患病雞腹部下垂，卵巢變性等，這與雞大腸桿菌病的臨床癥狀相似，育成雞發(fā)生雞白痢時(shí)，可發(fā)生心臟增生性結(jié)節(jié)，應(yīng)注意與內(nèi)臟型馬立克氏病的鑒別診斷，以免造成誤診[4-5]。

[1] 王育章, 岳興建, 胡錦矗等. 綠尾虹雉消化系統(tǒng)形態(tài)學(xué)的初步研究[J]. 西華師范大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2007(1): 7-10.

[2] 蔡寶祥. 家畜傳染病學(xué)3版[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1996:55-61.

[3] 陳宏智, 魏明奎, 吳熾德. 成雞白痢沙門氏菌病的病理學(xué)診斷與防治[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2006(12): 110-111.

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