張 恒 王海兵 宣大蔚 （山東信得科技股份有限公司 山東 諸城 262200）

種雞脾轉移因子配合禽流感H5亞型滅活疫苗免疫最佳應用時機探索

張 恒 王海兵 宣大蔚 （山東信得科技股份有限公司 山東 諸城 262200）

本研究通過種雞脾轉移因子配合H5油苗免疫試驗，驗證了種雞脾臟轉移因子提高體液免疫活性，同時比較了免疫H5油苗不同時間段應用種雞轉移因子產生的體液免疫效果，其中在油苗免疫后3d應用轉移因子作用效果最好。

轉移因子 種雞 信必妥 H5

轉移因子(TF)是機體內具有免疫活性的 T 淋巴細胞所釋放的一種能夠轉移免疫致敏信息的因子，它能夠特異地將供體某一細胞免疫的功能轉移給受體，非特異性地增強受體免疫功能，是一種新型免疫激發(fā)劑[1]。它能將

供體細胞免疫功能轉移給受體,增強受體免疫功能,而且可以通過T細胞來調節(jié)B細胞，改善其體液免疫功能,從而增強機體的抗病能力[2]。近年來動物轉移因子的研究與應用引起了人們的重視，取得了明顯成就。

本研究驗證種雞脾轉移因子對禽流感H5亞型二價滅火免疫的免疫增強作用，同時比較了種雞脾轉移因子在疫苗免疫不同時間段應用對疫苗的免疫增強作用，為轉移因子在臨床更好的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 30日齡蛋雛雞購自諸城某養(yǎng)殖場，飼養(yǎng)于干凈衛(wèi)生的環(huán)境中，自由采食；SPF公雞購自濟南斯派福禽業(yè)科技有限公司，飼養(yǎng)于負壓隔離器中，自由采食。

1.1.2 主要試劑 種禽信必妥口服液(主要成分是雞脾臟轉移因子)產自山東信得科技有限公司。重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1，Re-6株+Re-4株)購自青島易邦生物股份有限公司。H5N1 Re-4檢測抗原購買于青島易邦生物股份有限公司，H5N1 Re-6檢測抗原購買于哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司，飼料若干購買于山東亞太中慧集團。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物處理及分組 30日齡80只蛋雞飼養(yǎng)至60日齡后平均分成8組，每組10只，具體處理方法見表1。

1.2.2 采樣時間及處理方式 在進行試驗開始前一周抽取10只雞進行翅靜脈采血分離血清，檢測H5N1的Re-4、Re-6母源抗體效價；在免疫H5N1油苗后，7、14、21、28d，進行翅靜脈采血分離血清，采用HI/HA試驗測H5N1的Re-4、Re-6血清型抗體效價。

表1 試驗動物分組及處理情況

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS18.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。

2 試驗結果

2.1 母源抗體效價檢測結果

通過血凝抑制試驗HI測定10只抽樣雞只的抗體效價為：血清學Re-4株抗體效價為0；血清學Re-6株抗體效價為0；可以用于后續(xù)疫苗免疫試驗，并設立空白對照，隨時監(jiān)測空白雞群血清學Re-4株和Re-6株抗體效價。

2.2 H5N1 Re-4血清學抗體效價

通過血凝抑制試驗HI測定每只雞的抗體效價，使用以下方法計算每組平均抗體效價，平均抗體效價各組血清學Re-4株平均抗體效價見表2、圖1。

由表2可以看出，免疫重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗后3d，應用種雞脾轉移因子，在免疫疫苗后14、21、28d血清學Re-4株抗體效價最高。在免疫后14d，免疫后3d組(3組)與只免疫苗組(6組)和免疫前3d組(1組)比較差異顯著(P＜0.05)；在免疫后21d，與1組和5組比較差異極顯著(P＜0.01)，與6組比較差異顯著(P＜0.05)；在免疫后28d，與6組和1組比較差異顯著(P＜0.05)。

表2 Re-4血清型抗體效價檢測結果 (log2)

圖1 Re-4血清型抗體滴度變化曲線

2.3 H5N1 Re-4血清學抗體效價

各組血清學Re-6株平均抗體效價見表3、圖2。由表1可以看出，免疫重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗后3d，應用種雞脾轉移因子，在免疫疫苗后14、21、28d血清學Re-6株抗體效價最高。在免疫后14d，免疫后3d組(3組)與只免疫苗組(6組)、免疫后9d組(5組)和免疫前3d組(1組)比較差異顯著；在免疫后21d，與1組、4組、5組和6組比較差異顯著；在免疫后28d，與1組比較差異顯著。

表3 Re-6血清型抗體效價檢測結果 (log2)

圖2 Re-6血清型抗體滴度變化曲線

3 討論

近幾年來雞脾轉移因子在臨床上應用越來越廣泛，其配合疫苗免疫可以顯著提高免疫后的抗體效價。張恒，李文鵬等(2012年)研究發(fā)現(xiàn)給SPF雛雞口服后可以顯著提高免疫疫苗的抗體滴度，說明轉移因子可以增強體液免疫反應，增強疫苗的保護效果[3]。趙支國，李相安等

(2004年)研究發(fā)現(xiàn)TF具有良好的生物活性,可促進機體產生良好的免疫效果,增強機體的免疫功能[4]。筆者針對雞脾轉移因子配合疫苗免疫應用時機進行了試驗，為雞脾轉移因子進一步更好的應用于臨床提供依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)雞脾轉移因子在二價滅火疫苗免疫后3d應用，疫苗免疫產生的抗體效價最好；禽流感H5亞型的兩個血清型Re-4和Re-6的抗體效價均是免疫后3d應用種雞脾轉移因子組最好。并且進行了重復試驗，得出一致的結論，這更好的驗證了本試驗結果。

雞脾轉移因子同時因其效果明顯，無毒性，來源廣泛，無抗原性，因此筆者認為雞脾轉移因子具有很好的應用前景和較大的發(fā)展?jié)摿Γ狙芯堪l(fā)現(xiàn)進一步促進了雞脾轉移因子臨床上的應用。

[1] 喬彥良. 動物轉移因子研究與在畜禽疫病防治中的應用[J]. 中國禽業(yè)導刊, 2002, 19 (23): 45-47.

[2] 江青艷, 戴遠威. 脾臟轉移因子對粵黃雞免疫功能的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志, 1996, 7(15): 6-8.

[3] 張恒, 李文鵬, 吳慶海等. 雞轉移因子(信必妥)活性檢測[J]. 山東畜牧獸醫(yī), 2012, 6(10): 8-9.

[4] 趙支國, 趙洪娟, 李相安等. TF對雞體液免疫效果的影響試驗[J].山東畜牧獸醫(yī), 2004, 4(5): 4.

S851.33

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1007-1733(2014)01-0010-02

2013–10–31）