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        杭菊葉總黃酮含量測(cè)定

        2014-07-02 01:45:51偉張慧芳
        關(guān)鍵詞:杭白菊蘆丁光度

        陳 偉張慧芳

        1浙江省富陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院中藥房 富陽(yáng) 311400 2金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院

        ·藥學(xué)園地·

        杭菊葉總黃酮含量測(cè)定

        陳 偉1張慧芳2

        1浙江省富陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院中藥房 富陽(yáng) 311400 2金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院

        杭菊葉;黃酮;含量

        杭菊又稱杭白菊,是菊科植物Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序[1],是著名的“浙八味”之一,杭白菊為藥食同源藥材,需求量大,但在采摘菊花的同時(shí),大量的菊葉被丟棄,造成較大浪費(fèi)。中醫(yī)認(rèn)為,菊花葉性平,味辛、甘,具有清肝明目,解毒消腫的功效,主要用于頭風(fēng)、目眩、疔瘡、癰腫等癥[2],具有較高的藥用價(jià)值。已有文獻(xiàn)報(bào)道亳菊葉、野菊葉等含有黃酮等多種有效成分[3-6],但對(duì)杭菊葉中所含的黃酮類成分的含量未見(jiàn)報(bào)道。浙江為杭菊葉道地產(chǎn)地,主產(chǎn)于桐鄉(xiāng)等地,杭菊葉資源豐富,為了合理開發(fā)和綜合利用杭菊葉,本文對(duì)杭菊葉中總黃酮進(jìn)行了測(cè)定,為深入研究和綜合利用開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

        1 儀器與試藥

        1.1試劑與藥材 蘆丁(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)100080-201002);乙醇、硝酸鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉為分析純(國(guó)藥集團(tuán)試劑公司)。杭菊葉:2013年秋季采于浙江桐鄉(xiāng),經(jīng)金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院羅國(guó)海副教授鑒定為菊科植物 Chrysanthemum morifolium Ramat.的新鮮葉,60℃烘干,粉碎。同時(shí)采集同株的杭白菊,同法處理。

        1.2儀 器 VU-265 FM紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津),HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司),XP205電子分析天平(瑞士梅特勒托利多)。

        2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

        2.1對(duì)照品溶液制備 稱取蘆丁對(duì)照品約30mg,精密稱定,置100mL量瓶中,加70%乙醇適量,超聲處理使溶解,放冷,加乙醇至刻度,搖勻,即得。每1mL中含無(wú)水蘆丁0.299mg。

        2.2供試溶液制備 取杭菊葉粉末約0.2g,精密稱定,置50mL圓底燒瓶中,精密加入70%乙醇20mL,稱重,回流提取60min,放涼,稱重,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

        精密吸取供試品溶液1mL,分別置25mL量瓶中,照“2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下的方法,自“加70%乙醇至6mL”起依法測(cè)定吸光度,計(jì)算含量。

        2.3線性關(guān)系考察 精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6、7mL,分別置于25mL容量瓶中,各加入70%乙醇至6mL,然后分別加入5%亞硝酸鈉溶液1mL,搖勻,放置6min;加入10%硝酸鋁溶液1mL,搖勻,放置6min;加入1mol/L氫氧化鈉溶液10mL,加70%乙醇定容至刻度,搖勻,放置15min,以相應(yīng)試劑為空白,立即照紫外-可見(jiàn)分光光度法(2010版中國(guó)藥典一部附錄ⅤA),于510nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得吸光度Y與蘆丁濃度X的回歸方程:Y=9.447X+0.046,r=0.9997,線性范圍為0.299~2.093mg。

        2.4提取工藝優(yōu)選 影響杭菊葉總黃酮提取的主要因素有提取方法、乙醇濃度、溶劑用量和提取時(shí)間等,因此對(duì)四個(gè)因素進(jìn)行單因素考察。

        2.4.1提取方法的考察 取杭菊葉粉末約0.2g,精密稱定,分別置50mL圓底燒瓶中,精密加入50%乙醇20mL,稱重,分別超聲和回流提取60min,放涼,稱重,用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,得供試品溶液,依法測(cè)定。

        超聲提取測(cè)定結(jié)果為6.49%,回流提取為8.41%,結(jié)果表明,回流提取的黃酮含量高于超聲提取,因此選擇回流為杭菊葉總黃酮提取方法。

        2.4.2乙醇濃度考察 取杭菊葉粉末約0.2g,精密稱定,置50mL圓底燒瓶中,分別精密加入30%、40%、50%、60%、70%、80%、95%濃度的乙醇20mL,稱重,回流提取,放涼,稱重,用相應(yīng)濃度的乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。照前述方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果乙醇濃度在50%~80%范圍內(nèi)時(shí),測(cè)得總黃酮含量較高,且乙醇濃度為70%時(shí),測(cè)得的總黃酮含量最高,為9.63%。因此,確定提取溶劑為70%乙醇。見(jiàn)表1。

        表1 不同濃度乙醇總黃酮提取測(cè)定結(jié)果

        表2 不同溶劑用量提取測(cè)定結(jié)果

        表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

        2.4.3溶劑用量考察 取杭菊葉粉末約0.5g,精密稱定,置100mL圓底燒瓶中,分別精密加入70%乙醇10、15、20、25和30mL,稱重,分別回流提取1h,放涼,稱重,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。照前述方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果當(dāng)溶劑超過(guò)20mL時(shí),總黃酮含量變化不大。因此,確定提取溶劑用量為20mL。見(jiàn)表2。

        2.4.4提取時(shí)間考察 取杭菊葉粉末四份,各約0.2g,精密稱定,置50mL圓底燒瓶中,精密加入70%乙醇各20mL,稱重,分別回流提取0.5、1、1.5和2h,放涼,稱重,用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。照前述方法進(jìn)行測(cè)定。

        提取0.5h測(cè)定結(jié)果為7.86%,1h為9.63%,1.5h為9.81%,2h為9.79%,結(jié)果表明,隨著回流時(shí)間的延長(zhǎng),測(cè)定結(jié)果增高,當(dāng)回流時(shí)間>1h時(shí),總黃酮含量測(cè)定結(jié)果變化不明顯,綜合考慮將提取時(shí)間確定為1h。

        2.5方法學(xué)考察

        2.5.1精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液4mL,供試品溶液1mL,置于25mL量瓶中,照“2.3線性關(guān)系考察”項(xiàng)下,自“加70%乙醇至6mL”起,同法操作,測(cè)定吸光度,測(cè)定六次。對(duì)照品溶液及供試品溶液吸光度的RSD分別為0.48%和0.69%,表明精密度良好。

        2.5.2穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液4mL,供試品溶液1mL,置于25mL量瓶中,照“2.3線性關(guān)系考察”項(xiàng)下,自“加70%乙醇至6mL”起,同法操作,每隔5min測(cè)定一次吸光度。對(duì)照品溶液及供試品溶液30min內(nèi)吸光度的RSD分別為2.22%和2.39%,RSD均<3%,結(jié)果表明對(duì)照品溶液和供試品溶液顯色后在30min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        2.5.3重復(fù)性試驗(yàn) 分別取杭菊葉粉末6份,照“2.2供試品溶液的制備”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作,照前述含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定,測(cè)得總黃酮含量平均值為9.65%,RSD值為2.30%,表明本方法重復(fù)性良好。

        2.5.4加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法試驗(yàn)。取已知總黃酮含量的杭菊葉0.1g,精密稱定,共取6份,分別準(zhǔn)確加入蘆丁對(duì)照品適量,照“2.2供試品溶液的制備”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作,制備成供試品溶液,照前述含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率。試驗(yàn)結(jié)果表明,蘆丁平均回收率為101.2%(n= 6),RSD為2.7%。說(shuō)明該測(cè)定方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。結(jié)果見(jiàn)表3。

        2.6樣品測(cè)定 分別稱取杭菊葉、杭白菊粉末三份,每份0.2g,精密稱定,照“2.2供試品溶液的制備”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作,照前述含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。見(jiàn)表4。

        表4 傳統(tǒng)加工及硫熏加工杭菊葉總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

        3 結(jié) 論

        杭白菊在采收過(guò)程中,只利用了植株的很少部分,大量的杭菊葉棄之不用,通過(guò)對(duì)杭菊葉和同株花朵總黃酮含量的測(cè)定發(fā)現(xiàn),杭菊葉中總黃酮含量高于杭白菊,因此,杭菊葉具有較大的開發(fā)利用潛力。

        黃酮在很多天然藥物中均有分布,具有廣泛的藥理活性,是天然藥物開發(fā)利用研究的熱點(diǎn),杭菊葉中黃酮含量較高,但所含黃酮的種類是否和花相同,主要黃酮成分含量多少以及杭菊葉黃酮的藥效作用如何均未見(jiàn)報(bào)道,因此,在進(jìn)一步的工作中應(yīng)進(jìn)行相關(guān)研究,為杭菊葉的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

        [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:292.

        [2]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].第七冊(cè).上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:810.

        [3]任愛(ài)農(nóng),鞠建明.野菊不同部位的總黃酮含量測(cè)定[J].中草藥,1999,30(8):589.

        [4]何小珍,郭玉,徐小娜,等.野菊不同部位綠原酸和3,5-二咖啡??鼘幩岬暮繙y(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(11):72-75.

        [5]何小珍,賀冬秀,喻翠云,等.野菊葉中綠原酸及木犀草素-7-O-葡萄糖苷測(cè)定[J].南華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2010,24(4):95-98.

        [6]陳慧芳,吳德玲,金傳山,等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選亳菊葉總黃酮提取工藝[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,20(2):67-69.

        修回日期:2014-03-24

        2014-02-12

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