紀(jì)利芹,蔣克勇,韓龍江,袁坤山,邱楚雯, 王寶杰,劉 梅,王 雷,溫海深

(1.中國(guó)海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院,山東 青島 266003;2.中國(guó)科學(xué)院 海洋研究所 海洋生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室,山東 青島 266071;3.青島科技大學(xué) 化學(xué)與分子工程學(xué)院,山東 青島 266061)

魚類是變溫動(dòng)物,水溫的變化必然會(huì)改變其新陳代謝,進(jìn)而影響其生長(zhǎng)、發(fā)育,并使之產(chǎn)生相應(yīng)的生理變化甚至病理反應(yīng),水溫也是影響魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)中的關(guān)鍵因素之一[1-3]。

大菱鲆(Scophthalmus maximus),屬于鰈形目(Pleuronectiformes),鲆科(Bothidae),原主要產(chǎn)自于大西洋東側(cè)沿岸,是較名貴的冷水性經(jīng)濟(jì)魚類。自1992年被引進(jìn)中國(guó)后,因其生長(zhǎng)較快、耐低溫、繁殖較快兼有膠質(zhì)豐富、風(fēng)味獨(dú)特、市場(chǎng)價(jià)格高等優(yōu)良特性,現(xiàn)已成為中國(guó)北方地區(qū)為數(shù)不多的養(yǎng)殖較為廣泛的重要經(jīng)濟(jì)魚類之一。目前,大菱鲆的養(yǎng)殖區(qū)域分布在以山東半島、遼東半島以及天津?yàn)橹鞯谋狈窖睾５貐^(qū)[4-7],隨著大菱鲆養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,市場(chǎng)影響力的提高,南方及內(nèi)地市場(chǎng)越來(lái)越得到養(yǎng)殖戶和商家的關(guān)注,所以如何保證其在長(zhǎng)途運(yùn)輸過(guò)程中的品質(zhì)成為急需解決的技術(shù)難題。

目前,生態(tài)冰溫保活運(yùn)輸技術(shù)已成為魚類?；钸\(yùn)輸研究的新方向,即利用魚的生態(tài)冰溫,采用控溫方式,使其處于半休眠或完全休眠狀態(tài),從而降低新陳代謝,減少機(jī)械損傷,有效延長(zhǎng)存活時(shí)間,達(dá)到長(zhǎng)距離、大批量?；钸\(yùn)輸?shù)哪康摹６以摲椒o(wú)需用水,節(jié)能環(huán)保,并且水產(chǎn)品品質(zhì)能夠得到更好的保持,應(yīng)用前景廣闊[8-9]。

血液是動(dòng)物體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)中的重要組織,具有運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)和代謝廢物、機(jī)體免疫等功能[10]。由Selye[11]的應(yīng)激理論可知,在低溫脅迫下,魚體內(nèi)生理變化一定會(huì)在血液指標(biāo)中體現(xiàn),因此血液指標(biāo)能靈敏地反應(yīng)魚體的生理、病理變化,可作為動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)水平、健康狀況及外界環(huán)境變化的生物指標(biāo)[10,12-16]。魚類以糖原、脂肪和蛋白質(zhì)作為主要貯能物質(zhì),外界環(huán)境變化時(shí),魚體最先分解糖原提供能量,且主要以分解肝糖原為主。氧氣不足時(shí)肌肉通過(guò)糖酵解途徑產(chǎn)生乳酸,因此肝糖原和肌肉中乳酸值的變化能從側(cè)面反映體內(nèi)的能量變化。作者初步研究了連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆成魚肝臟、肌肉及血清代謝等指標(biāo)的影響,試圖了解大菱鲆的冷應(yīng)激耐受性,并為大菱鲆的無(wú)水保活技術(shù)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用大菱鲆購(gòu)自山東青島市南山水產(chǎn)品批發(fā)市場(chǎng),個(gè)體初始體質(zhì)量為(400±46)g,暫養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)室控溫循環(huán)水過(guò)濾系統(tǒng),暫養(yǎng)期間控制水溫為(18.0±1)℃,溶氧為6 mg/L以上,pH約為7～8,鹽度為31,暫養(yǎng)2 d后,選取規(guī)格一致的成魚30尾進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

通過(guò)設(shè)計(jì)的降溫循環(huán)水裝置實(shí)現(xiàn)逐漸變溫,大菱鲆的采樣溫度點(diǎn)分別為: 18℃、13℃、8℃、5℃、3℃和1℃,水溫降溫速率設(shè)置為: ≤5℃/h (10℃以上)、≤2℃/h (10～1℃)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前取樣測(cè)定一次指標(biāo)作為起始對(duì)照;降溫開(kāi)始后,待溫度降到設(shè)定的溫度點(diǎn)處立刻進(jìn)行取樣,每個(gè)溫度點(diǎn)處取樣6尾。

1.3 樣品采集

開(kāi)始降溫后在 13℃、8℃、5℃、3℃和 1℃處立刻進(jìn)行隨機(jī)取樣,每個(gè)溫度點(diǎn)處取6尾平行。取出后立刻放入質(zhì)量濃度為 200 mg/L的MS-222溶液中做快速深度麻醉,配置MS-222溶液所用水的溫度與取樣時(shí)的溫度一致,尾靜脈采血,用 1mL注射器于魚尾柄動(dòng)脈采血5 mL以上,血液不加抗凝劑,在4℃冰箱靜置5 h后,用離心機(jī)4℃、12 000 r/min、離心20 min制備血清,血清移入–80℃保存。采血后解剖,取出肝臟、肌肉等組織用液氮速凍后置于–80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 血清生化指標(biāo)的分析

制備好的血清采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定部分生化指標(biāo)(邁瑞 BS-180),測(cè)定項(xiàng)目包括: 總蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、總膽紅素、尿素、總膽固醇、甘油三酯和血糖。

1.5 肝糖原、肌肉乳酸含量的測(cè)定

肝糖原、肌肉乳酸含量的測(cè)定分別使用南京建成生物工程研究所的肝糖原試劑盒(A043)和乳酸試劑盒(A019-2),其中肝臟與肌肉樣品按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行制備、處理。

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用 Spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件包中的單因素方差分析(ANOVA)和 Duncan氏多重范圍比較進(jìn)行分析,P＜0.05表示有顯著差異,所有結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 連續(xù)降溫對(duì)魚體血清蛋白濃度的影響

由圖1可知,在連續(xù)降溫過(guò)程中,血清中總蛋白和白蛋白的濃度變化趨勢(shì)整體一致: 均隨溫度降低而升高,總蛋白在 8℃時(shí)濃度達(dá)到最高(52.33±9.61)g/L,溫度降到 1℃時(shí),濃度下降到初始水平附近。13℃實(shí)驗(yàn)組總蛋白濃度顯著低于3℃實(shí)驗(yàn)組濃度(P＜0.05),其余各組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

血清白蛋白在3℃時(shí)濃度達(dá)到最高值為(30.67±5.32)g/L,1℃時(shí)濃度也下降到初始濃度附近,與總蛋白在1℃時(shí)濃度變化相似,且1℃時(shí)的白蛋白濃度顯著低于 3℃時(shí)的濃度(P＜0.05),其余各組之間沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。

2.2 連續(xù)降溫對(duì)魚體血糖和肝糖原的影響

由圖2A可知,大菱鲆血糖濃度隨溫度的降低呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢(shì),在 13℃時(shí)降到最低水平(0.85±0.22)mmol/L,在 3℃時(shí)含量達(dá)到最高(1.85±0.14)mmol/L,當(dāng)溫度降到 1℃時(shí)血糖含量又降到初始水平,且8℃、5℃、3℃實(shí)驗(yàn)組濃度顯著高于其余實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)。

圖1 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血液總蛋白及白蛋白質(zhì)量濃度的影響Fig.1 Effects of continuous cooling on mass concentrations of serum total protein and serum albumin in Scophthalmus maximus

圖2 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血液血糖濃度和肝糖原質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.2 Effects of continuous cooling on concentrations of serum glucose and contents of liver glycogen in Scophthalmus maximus

由圖2B可知,肝糖原含量與血糖濃度變化趨勢(shì)一致,隨溫度降低呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢(shì),在 8℃時(shí)濃度最高為(11.92±1.84)mg/g,最后當(dāng)溫度降到1℃時(shí)回到初始水平,且 8℃、5℃、3℃實(shí)驗(yàn)組濃度顯著高于其余實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)。

2.3 連續(xù)降溫對(duì)魚體脂類的影響

由圖3A可知,大菱鲆總膽固醇濃度隨溫度降低整體呈現(xiàn)升高趨勢(shì),8℃時(shí)濃度低于初始水平,其余各組濃度均高于初始水平,3℃時(shí)濃度最高為(8.02±1.05)mmol/L,顯著高于初始水平(P＜0.05),其余各實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

由圖3B可知,甘油三酯濃度隨溫度降低呈現(xiàn)先升高后降低趨勢(shì),各實(shí)驗(yàn)組的濃度均高于初始水平,且各實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

由圖4A可知,高密度脂蛋白膽固醇的濃度開(kāi)始時(shí)隨溫度下降而升高,當(dāng)溫度降到 5℃時(shí),濃度達(dá)到最高(5.74±0.42)mmol/L,溫度再降低時(shí),高密度脂蛋白濃度隨之降低,但都高于18℃時(shí)的初始濃度。5℃實(shí)驗(yàn)組的高密度脂蛋白濃度和 18℃實(shí)驗(yàn)組之間存在顯著差異(P＜0.05),其余各組之間沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。

由圖4B可知,低密度脂蛋白膽固醇的濃度隨溫度降低整體呈現(xiàn)先升高后降低再升高的趨勢(shì),當(dāng)溫度降到 5℃時(shí),濃度達(dá)到最低值(4.50±1.62)mmol/L,繼續(xù)降低至 3℃時(shí),濃度達(dá)到最高值(6.72±2.42)mmol/L,各實(shí)驗(yàn)組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

2.4 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆代謝產(chǎn)物的影響

由圖5A可知,隨溫度降低尿素濃度先降低后升高再降低,在8℃時(shí)濃度達(dá)最高值(3.34±0.03)mmol/L,在1℃時(shí)降到最低值(0.58±0.03)mmol/L,且1℃時(shí)的濃度值顯著低于 8℃時(shí)(P＜0.05),其余各組之間沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。

圖3 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血清總膽固醇濃度和甘油三酯濃度的影響Fig.3 Effects of continuous cooling on concentrations of serum total cholesterol and serum triglyceride in Scophthalmus maximus

圖4 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血清高密度脂蛋白膽固醇濃度和低密度脂蛋白膽固醇濃度的影響Fig.4 Effects of continuous cooling on concentrations of serum high density lipoprotein cholesterol and low density lipoprotein cholesterol in Scophthalmus maximus

由圖 5B可知,乳酸含量隨溫度降低呈現(xiàn)升高趨勢(shì),降到 5℃時(shí)達(dá)到最高值為(0.615±0.11)mmol/g,18℃時(shí)濃度達(dá)到最低值為(0.523±0.087)mmol/g,18℃組與 5℃組之間存在顯著差異(P＜0.05),其余各實(shí)驗(yàn)組之間沒(méi)有顯著性差異。

3 討論

3.1 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血清蛋白質(zhì)含量的影響

血清中的總蛋白主要包括白蛋白和球蛋白,白蛋白主要由肝臟合成,有維持血漿滲透壓、參與機(jī)體免疫、運(yùn)輸、營(yíng)養(yǎng)等功能,球蛋白由淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成的漿細(xì)胞分泌形成,在機(jī)體的特異性免疫中發(fā)揮重要作用[17-19]。本實(shí)驗(yàn)中,溫度降到 8℃以下時(shí),總蛋白和白蛋白隨溫度降低均有逐漸升高的趨勢(shì),可能是隨著溫度降低,大菱鲆受到冷刺激處于應(yīng)激狀態(tài),肝臟開(kāi)始合成應(yīng)激蛋白,而到1℃時(shí)白蛋白濃度又降低,可能是此時(shí)的溫度已超過(guò)了大菱鲆的耐受范圍,肝臟開(kāi)始受損,各種代謝酶的活性受到抑制。這與常玉梅等[17-20]的觀點(diǎn)一致。

3.2 連續(xù)降溫對(duì)魚體血糖和肝糖原的影響

圖5 連續(xù)降溫對(duì)大菱鲆血清尿素濃度和肌肉乳酸濃度的影響Fig.5 Effects of continuous cooling on concentrations of serum urea and lactic acid of muscle in Scophthalmus maximus

血糖是機(jī)體的主要供能物質(zhì),正常情況下,其在血液中的含量在一定范圍內(nèi)保持相對(duì)穩(wěn)定。一些研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)激狀態(tài)下,魚體的血糖含量明顯升高,產(chǎn)生高血糖癥[21-25],當(dāng)環(huán)境溫度下降早期,生物體內(nèi)的適應(yīng)性變化以血糖代謝增加為主,即體內(nèi)的糖元轉(zhuǎn)化為葡萄糖量增加,產(chǎn)生熱量以增強(qiáng)御寒功能,機(jī)體在代謝產(chǎn)熱過(guò)程中,血糖大量消耗,機(jī)體和臟器組織的抗寒能力下降[17,26]。隨著低溫脅迫的加強(qiáng)或脅迫時(shí)間的延長(zhǎng),機(jī)體將大量的葡萄糖分解成三磷酸腺苷(ATP)提供能量,又使葡萄糖濃度下降。本實(shí)驗(yàn)中葡萄糖的變化規(guī)律與此規(guī)律相符,在 8～3℃實(shí)驗(yàn)組的血清葡萄糖濃度顯著高于其余實(shí)驗(yàn)組,說(shuō)明在3℃之前大菱鲆處于應(yīng)激狀態(tài),溫度降低血糖含量升高以增強(qiáng)魚體的抗脅迫能力,當(dāng)溫度繼續(xù)降低到 3℃以下,大菱鲆機(jī)體葡萄糖代謝酶活性降低,使葡萄糖產(chǎn)生量減少且大部分血糖被分解生成 ATP,消耗量增加,使血糖總量減少,而 1℃實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

肝糖原含量的變化與血清葡萄糖含量變化趨勢(shì)一致,原因可能是: 血清葡萄糖濃度的升高意味著需要更多的糖原分解提供葡萄糖,而魚體內(nèi)血清葡萄糖一般是由肝糖原分解提供[21,27],所以為滿足血清葡萄糖含量的增加,肝臟也增加了肝糖原的合成量。

3.3 連續(xù)降溫對(duì)魚體脂類的影響

血液高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇分別是高、低密度脂蛋白中結(jié)合的膽固醇,能相應(yīng)反映高、低密度脂蛋白的多少。血液中總膽固醇的含量應(yīng)該是高、低密度脂蛋白綜合作用的結(jié)果,高密度脂蛋白的合成和分泌在肝臟和腸內(nèi)進(jìn)行,本實(shí)驗(yàn)中,隨溫度降到 5℃時(shí),高密度脂蛋白含量顯著升高而使更多的血液膽固醇被轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟,從而使3℃時(shí)的血漿膽固醇含量降低,但是低密度脂蛋白含量升高則會(huì)將更多的膽固醇和甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)到血液中,二者綜合作用使得血清總膽固醇含量升高[26,28]。

低密度脂蛋白能將甘油三酯運(yùn)送至血液,所以低密度脂蛋白的含量會(huì)對(duì)血清中甘油三酯的含量產(chǎn)生影響,這一關(guān)系表現(xiàn)為甘油三酯與低密度脂蛋白隨溫度降低變化趨勢(shì)一致。

甘油三酯是植物和動(dòng)物細(xì)胞貯脂的主要形式,溫度急劇下降會(huì)減弱魚體細(xì)胞膜的脂流動(dòng)性和彈性而使膜損壞或通透性增加,因此細(xì)胞膜的脂組成和結(jié)構(gòu)會(huì)影響細(xì)胞的抗寒性[12,17]。魚類的脂肪酸代謝對(duì)體溫降低的適應(yīng)很敏感,通過(guò)積累磷脂中長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸的含量,使膜在低溫脅迫時(shí)仍保持穩(wěn)定性和流動(dòng)性[29-33],從而提高自身的抗寒能力。本研究通過(guò)連續(xù)降溫實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與常溫的對(duì)照組相比,降溫組的甘油三酯的含量都有增加但無(wú)顯著性差異,這說(shuō)明連續(xù)降溫對(duì)魚體細(xì)胞膜沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的損害。

3.4 連續(xù)降溫對(duì)代謝產(chǎn)物的影響

尿素是蛋白質(zhì)和氨基酸在代謝過(guò)程中脫去氨基,由氨基代謝生成[17,34],此過(guò)程在肝臟中進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)中,除 8℃組外,其余各組與對(duì)照組相比含量都有所降低,可能與溫度降低導(dǎo)致體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝速率降低,尿素產(chǎn)量減少有關(guān)。大菱鲆的溫度耐受范圍大約在 20～8℃,8℃是尿素濃度變化的一個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn),一定程度上說(shuō)明8℃是大菱鲆適溫范圍的下限。

氧氣不足情況下,肌肉通過(guò)糖酵解途徑產(chǎn)生乳酸并且迅速提供能量。血液流速緩慢、氧氣攝入量不足以及劇烈的運(yùn)動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)乳酸含量升高[21,35]。劉偉東[36]研究發(fā)現(xiàn),大菱鲆在低溫?；钸^(guò)程中隨時(shí)間的延長(zhǎng),呼吸頻率迅速降低,鰓的煽動(dòng)幅度也隨保活時(shí)間逐漸減弱,呼吸頻率降低使氧氣的吸入量減少,部分組織器官出現(xiàn)無(wú)氧代謝使乳酸生成量增多,并且低溫時(shí),魚體內(nèi)的新陳代謝逐漸降為較低水平,乳酸的代謝受阻,乳酸生成量的增多和排出量的減少都將導(dǎo)致肌肉中乳酸含量的增多[37],這與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。

4 小結(jié)

綜合分析實(shí)驗(yàn)中大菱鲆機(jī)體代謝指標(biāo)變化趨勢(shì)發(fā)現(xiàn): 當(dāng)溫度在 18～8℃范圍時(shí),為抵御溫度降低,大菱鲆體內(nèi)相應(yīng)代謝開(kāi)始發(fā)生改變以抵消低溫對(duì)魚體產(chǎn)生的不利影響,此時(shí),由于溫度范圍在大菱鲆的耐受范圍之內(nèi),大菱鲆通過(guò)調(diào)節(jié)自身的代謝能夠維持內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定,因而在此溫度范圍內(nèi)并未出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng);當(dāng)溫度降到8～3℃時(shí),此溫度范圍已超過(guò)大菱鲆的正常生活溫度,內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定受到一定的影響,體內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng),某些指標(biāo)濃度相對(duì)于初始降溫有顯著性差異;當(dāng)溫度繼續(xù)低到 1℃時(shí),各指標(biāo)濃度基本處于較低狀態(tài),說(shuō)明在此低溫度區(qū)間內(nèi),大菱鲆體內(nèi)各種代謝反應(yīng)的酶活力降到極低程度,體內(nèi)的應(yīng)激反應(yīng)和各種代謝反應(yīng)基本處于停滯狀態(tài),說(shuō)明 3～1℃溫度區(qū)間與大菱鲆的生態(tài)冰溫點(diǎn)比較接近,在此溫度區(qū)間大菱鲆代謝程度極低,接近于半休眠或休眠狀態(tài),可以在此溫度區(qū)間附近進(jìn)一步進(jìn)行無(wú)水?；畹奶剿?在保證大菱鲆無(wú)水運(yùn)輸可行性的基礎(chǔ)上優(yōu)化經(jīng)濟(jì)成本。

肌肉中乳酸含量過(guò)高會(huì)影響魚體口感,這是冰溫運(yùn)輸中產(chǎn)生的負(fù)面影響,在以后的研究和實(shí)踐過(guò)程中應(yīng)引起注意。

低溫?zé)o水?；钸\(yùn)輸還有很多有待深入研究的工作: 篩選機(jī)體內(nèi)較靈敏的代謝指標(biāo)來(lái)反映低溫運(yùn)輸過(guò)程中魚體內(nèi)的代謝狀況,探索大菱鲆的降溫生理極限及其在無(wú)水低溫運(yùn)輸過(guò)程中的耐受時(shí)間,同時(shí)無(wú)水低溫運(yùn)輸過(guò)程中產(chǎn)生的負(fù)面影響也是不可忽視,值得深入探索的。

[1]劉波,王美垚,謝駿,等.低溫應(yīng)激對(duì)吉富羅非魚血清生化指標(biāo)及肝臟 HSP70基因表達(dá)的影響[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2011,31(17): 4866-4873.

[2]王輝,強(qiáng)俊,王海貞,等.溫度與鹽度對(duì)吉富品系尼羅羅非魚幼魚能量代謝的聯(lián)合效應(yīng)[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2012,19(1): 51-61.

[3]強(qiáng)俊,徐跑,何杰,等.溫度與鹽度對(duì)吉富品系尼羅羅非魚仔魚生長(zhǎng)與存活的聯(lián)合影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2011,18(6): 1300-1308.

[4]雷霽霖,馬愛(ài)軍,陳超,等.大菱鲆(Scophthalmus maximus)養(yǎng)殖現(xiàn)狀與可持續(xù)發(fā)展[R].中國(guó)工程科學(xué),2005,7(5): 30-34.

[5]米娜莎,王棟.大菱鲆產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)分析[J].海洋科學(xué),2011,35(6): 96-99.

[6]雷霽霖,馬愛(ài)軍.大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)胚胎及仔稚幼魚胚胎發(fā)育的研究[J].海洋與湖沼,2003,34(l): 9-19.

[7]雷霽霖.大菱鲆養(yǎng)殖技術(shù)(修訂版)[M].上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2005.

[8]殷邦忠,滕瑜.不同保活方法對(duì)菲律賓蛤仔?；钚Ч难芯縖J].海洋水產(chǎn)研究,1996,17(l): 76-81.

[9]劉淇,殷邦忠.牙鲆無(wú)水?；罴夹g(shù)[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),1996,2: 101-104.

[10]林浩然.魚類生理學(xué)(2版)[M].北京: 高等教育出版社,2002: 57-67.

[11]Selye H.Stress and the general adaptation syndrome [J].British Medical Journal,1950,17(1): 1383-1392.

[12]冀德偉,李明云,王天柱,等.不同低溫脅迫時(shí)間對(duì)大黃魚血清生化指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2009,28(1): 1-4.

[13]周玉,郭文場(chǎng),楊振國(guó),等.魚類血液指標(biāo)研究進(jìn)展[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,10(2): 163-165.

[14]史增奎.重金屬離子對(duì)魚類血液指標(biāo)影響的研究[J].漁業(yè)經(jīng)濟(jì)研究,2006,6: 45-48.

[15]SunY,Zhang B,Guo X W,et al.Effects of temperature on energybudget of Sparus macrocephalus[J].Actaecologica Sinica,2001,21(2): 186-190.

[16]Procarione L S,Barry T P,Malison J A.Effects of high reaing densities and loading rates on the growth and stress responses of juvenile rainbow trout[J].Aquaculture,1999,61: 91-96.

[17]常玉梅,曹鼎臣,孫效文,等.低溫脅迫對(duì)鯉血清生化指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2006,19(2): 71-75.

[18]林浩然.魚類生理學(xué)[M].廣州: 廣東高等教育出版社,1999.

[19]王鏡巖,朱圣庚,徐長(zhǎng)法.生物化學(xué)(3版)[M].北京:高等教育出版社,2002.

[20]吳垠,張峰,桂遠(yuǎn)明,等.幾種養(yǎng)殖魚類越冬生理生化指標(biāo)的變化Ⅲ—血清蛋白組分[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào),1995,10(4): 19-26.

[21]彭士明,施兆鴻,李杰,等.運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清皮質(zhì)醇、血糖、組織中糖元及乳酸含量的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào),2011,35(6): 831-837.

[22]Ubokawa K,Watanabe T,Yoshioka M,et al.Effects of acute stress on plasma cortisol,sex steroid hormone and glucose levels in male and female sockeye salmon during the breeding season[J]. Aquaculture,1999,172: 335-349.

[23]Iversen M,Finstad B,Mckinley R S,et al.Stress responses in Atlantic salmon(Salmon salar L.)smolts during commercial well boat transports and effects on survival after transfer to sea[J].Aquaculture,2005,243:373-382.

[24]Urbinati E C, Deabreu J S,Dasilvacamargo A C,et al.Loading and transport stress of juvenile matrinxa(Brycon cephalus,Characidate)at various densities [J].Aquaculture,2004,229: 389-400.

[25]Wedemeyer G A.Physiological response of juvenile coho salmon(Oncorhynchus kisutch)and rainbow trout(Salmo gairdneri)to handling and crowding stress in intensive fish culture[J].Fisheries Board of Canada,1976,33 : 2699-2702.

[26]洪磊,張秀梅.環(huán) 境脅迫對(duì)許氏平 鲉和花鱸血糖、血沉降的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2005,7(4): 414-418.

[27]Axelrod J,Reisine T D.Stress hormones: their interaction and regulation[J].Science,1984,224: 452-459.

[28]孫學(xué)亮,邢克智,陳成勛,等.急性溫度脅迫對(duì)半滑舌鰨血液指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2010,29(7):387-392.

[29]張羽航,鮑時(shí)翔,王延平,等.脂肪酸脫飽和的應(yīng)用進(jìn)展[J].生物工程進(jìn)展,2001,21(2): 41-49.

[30]Dey I,Buda C,Wiik T,et al.Molecular and structural composition of phospolipids membrances in livers of marine and freshwater fish in relation to temperature[J].National Acad Sciences,1993,90(16): 7498-7502.

[31]Hazel J R.Effects of temperature on the structure and metabolism of cell membranes in fish[J].Am Physiological Soc ,1984,246(4pt2): 460-470.

[32]Buda C,Dey I,Balogh N,et al.Structural order of membranes and composition of phospholipids in fish brain cells during thermal acclimation[J].Proc Natl Acad Sci USA,1994,9(17): 8234-8238.

[33]支兵杰,劉偉,王立波,等.水溫對(duì)懷頭鲇血液學(xué)指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2008,21(2): 64-70.

[34]馮廣朋,莊平,章龍珍,等.溫度對(duì)中華鱘幼魚血液生化指標(biāo)的影響[J].生態(tài)學(xué)雜志,2010,29(10):1973-1978.

[35]Iversen M,Finstad B,Mckinley R S,et al.Stress responses in Atlantic salmon(Salmo salar L.)smolts during commercial well boat transportions and effects on survival after transfer to sea[J].Aquaculture,2005,243: 373-382.

[36]劉偉東,薛長(zhǎng)湖,殷邦忠,等.低溫下大菱鲆有水和無(wú)水?；钸^(guò)程中生理生化變化的研究[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展,2009,30(5): 69-74.

[37]劉淇,殷邦忠,姚健,等.牙鲆在低溫?zé)o水?；钸^(guò)程中的生化變化[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),1999,23(3): 296-299.