潘 劍，李紹平，李建雄，連佛彥，黃 燕，秦 龍

(蘭州大學(xué)第二醫(yī)院：1.急救中心，2.神經(jīng)內(nèi)科，3.內(nèi)科ICU，4.藥學(xué)部，甘肅蘭州 730030)

◇中醫(yī)藥研究◇

羥基紅花黃色素A對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

潘 劍1，李紹平1，李建雄2，連佛彥3，黃 燕4，秦 龍4

(蘭州大學(xué)第二醫(yī)院：1.急救中心，2.神經(jīng)內(nèi)科，3.內(nèi)科ICU，4.藥學(xué)部，甘肅蘭州 730030)

目的觀察羥基紅花黃色素A(HSYA)對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。方法采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；二乙酸二氯熒光素鹽(DCFH-DA)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量；羅丹明123(Rhodamine123)染色法檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位；Western blot法檢測(cè)Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表達(dá)。結(jié)果1 mmol/L MPP+處理SH-SY5Y細(xì)胞48 h后，細(xì)胞存活率顯著降低，并誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，凋亡率達(dá)(38.6±1.8)%。而HSYA(15、60、120μmol/L)預(yù)處理1 h，可明顯增加SH-SY5Y細(xì)胞存活率(P＜0.001)，并能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞調(diào)亡(P＜0.01)；可明顯抑制MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS的增加(P＜0.001)；也能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體膜電位的降低(P＜0.01)。120μmol/L HSYA預(yù)處理能顯著性增加Bcl-2/Bax比值(P＜0.01)；能夠明顯抑制MPP+誘導(dǎo)的胞質(zhì)Cyt-C的釋放(P＜0.05)和Caspase-3、Caspase-9的高表達(dá)(P＜0.05，P＜0.05)。結(jié)論HSYA預(yù)處理能明顯提高M(jìn)PP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率，可有效抑制細(xì)胞調(diào)亡的發(fā)生，其機(jī)制可能與抑制細(xì)胞線粒體凋亡途徑有關(guān)。

羥基紅花黃色素A；SH-SY5Y細(xì)胞；細(xì)胞凋亡；線粒體

神經(jīng)元的凋亡廣泛參與腦血管病及一些神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病，如腦缺血再灌注損傷、阿爾茨海默病和帕金森病等。研究發(fā)現(xiàn)，活性氧的釋放及由此導(dǎo)致的線粒體損傷在神經(jīng)元的凋亡過程中發(fā)揮非常關(guān)鍵的作用［1-2］，因而常把減輕氧化應(yīng)激和抑制線粒體凋亡作為神經(jīng)保護(hù)藥物篩選的重點(diǎn)。

紅花黃色素(carthamin yellow)是菊科植物紅花花瓣中的最主要的色素成分，而羥基紅花黃色素A (hydroxysafflor yellow A，HSYA)是紅花黃色素中主要的水溶性單體成分，也被認(rèn)為是紅花藥理功效的最有效成分［3-4］。近年來(lái)研究顯示，紅花黃色素以及HSYA具有明顯的抗氧化作用，可清除羥自由基和脂質(zhì)過氧化物等［5-6］，同時(shí)能改善腦微小循環(huán)障礙，對(duì)腦缺血再灌注損傷也具有明顯的保護(hù)作用［7-8］，這提示紅花黃色素在拮抗神經(jīng)細(xì)胞損傷性疾病方面可能很有潛力。本研究以MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡為模型，研究HSYA對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，為紅花的神經(jīng)保護(hù)作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)。

1.2 藥物及試劑羥基紅花黃色素A(BRS011748，純度＞98%，成都貝斯特試劑有限公司)；DMEM/ F12(1∶1)高糖培養(yǎng)基，胰蛋白酶(美國(guó)Gibco公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；四甲基偶氮唑鹽(MTT)，1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)(美國(guó)Sigma公司)；二乙酸二氯熒光素鹽(DCFH-DA)活性氧檢測(cè)試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所)；細(xì)胞凋亡羅丹明123(Rhodamine123)染色試劑盒和Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒均(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)。Cyt-C、Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3、β-actin抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)。

1.3 儀器二氧化碳培養(yǎng)箱(美國(guó)SIM公司)，Accuri C6流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)，全自動(dòng)酶標(biāo)儀(德國(guó)BIO-RAD，Model 1550)，高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)HERMLE公司)，DYY-6C型電泳儀(北京市六一儀器廠)。

1.4 方法

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng) 用含有100 U/m L青霉素和100 μg/m L鏈霉素和100 m L/L胎牛血清的DMEM/ F12(1∶1)高糖培養(yǎng)基于37℃、50 m L/L CO2條件下培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞。2～3 d用1 g/L胰蛋白酶消化傳代1次，待細(xì)胞至80%融合時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率 實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照組、模型組(MPP+)和HSYA組(15、60、120μmol/L)，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔，所用藥物均用培養(yǎng)基稀釋。將SHSY5Y細(xì)胞以1×104個(gè)/孔接種于培養(yǎng)板中培養(yǎng)24 h后，模型組直接加入1 mmol/L MPP+，HSYA組經(jīng)藥物預(yù)處理SH-SY5Y細(xì)胞1 h后再加入1 mmol/L MPP+，空白對(duì)照組則只加等體積培養(yǎng)基。藥物孵育48 h后，每孔加入MTT(質(zhì)量濃度為5 g/L)20μL，繼續(xù)孵育。4 h后棄上清，每孔加入二甲基亞砜(DMSO)100μL，振蕩數(shù)次，采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀于570 nm處測(cè)定各孔的A值并計(jì)算細(xì)胞存活率。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)5次。

1.4.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 將SH-SY5Y細(xì)胞以1×105個(gè)/孔接種于培養(yǎng)板中培養(yǎng)24 h后分別加入藥物處理：模型組(1 mmol/L MPP+)，HSYA組(15、60、120μmol/L HSYA預(yù)處理1 h后再加入1 mmol/L MPP+)，空白對(duì)照組(加等體積培養(yǎng)基)。待藥物作用48 h后，收集細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌2遍，按照Annexine V-FITC/PI試劑盒說(shuō)明操作，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)并分析細(xì)胞凋亡率。

1.4.4 熒光探針DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平將SH-SY5Y細(xì)胞以1×105個(gè)/孔接種于培養(yǎng)板中培養(yǎng)24 h后分別加入藥物處理：模型組(1 mmol/L MPP+)，HSYA組(15、60、120μmol/L HSYA預(yù)處理1 h后再加入1 mmol/L MPP+)，空白對(duì)照組(加等體積培養(yǎng)基)。待藥物作用48 h后，去除細(xì)胞培養(yǎng)液，加入10μmol/L DCFH-DA溶液1 m L后孵育20 min。重懸細(xì)胞，使用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞3遍，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其熒光強(qiáng)度值。

1.4.5 Rhodamine123染色法檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位將SH-SY5Y細(xì)胞以1×105個(gè)/孔接種于培養(yǎng)板中培養(yǎng)24 h后分別加入藥物處理：模型組(1 mmol/L MPP+)，HSYA組(15、60、120μmol/L HSYA預(yù)處理1 h后再加入1 mmol/L MPP+)，空白對(duì)照組(加等體積培養(yǎng)基)。待藥物作用48 h后，加入10μmol/L Rhodamine123染液1 mL后孵育30 min。重懸細(xì)胞，使用磷酸鹽緩沖液洗滌細(xì)胞3遍，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其熒光強(qiáng)度值。

1.4.6 Western blot法檢測(cè)Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表達(dá) 分別收集1 mmol/L MPP+、120μmol/L HSYA+MPP+和培養(yǎng)基作用48 h后的細(xì)胞，加入含有PMSF的RIPA裂解液160μL，冰浴30 min，待充分裂解后，高速冷凍離心機(jī)離心10 min (12 000 r/min，4℃)，胞漿蛋白Cyt-C離心60 min(20 000×g，4℃)，提取上清，并用BCA法對(duì)所提蛋白進(jìn)行定量，規(guī)定上樣量為40μg。Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9抗體稀釋濃度均為1∶400，β-actin抗體稀釋濃度為1∶4 000，其他處理均參照文獻(xiàn)方法［9］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，并進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANVOA)，組間均數(shù)的多重比較使用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞存活率的影響1 mmol/L MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞48 h后，細(xì)胞相對(duì)存活率僅為49.8%，與空白對(duì)照組比較呈顯著性降低(P＜0.001)。而經(jīng)HSYA(15、60、120 μmol/L)預(yù)處理1 h后，細(xì)胞存活率明顯升高(P＜0.001)，并表現(xiàn)出一定的濃度依賴性?？梢姡琀SYA預(yù)處理能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞死亡(圖1)。

圖1 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞存活率的影響Fig.1 Effect of HSYA on cell viability induced by MPP+in SH-SY5Y cells(，n=5)

2.2 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的影響1 mmol/L MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞48 h后可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，凋亡率為(38.6±1.8)%，與空白對(duì)照組的(1.2±0.01)%比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。而經(jīng)HSYA(15、60、120μmol/L)預(yù)處理1 h后，凋亡率明顯降低(P＜0.01)，分別為(21.4± 2.1)%、(12.3±1.6)%和(6.3±1.1)%。可見，HSYA預(yù)處理能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞調(diào)亡。

2.3 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞ROS含量的影響1 mmol/L MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞48 h后，與空白對(duì)照組相比，細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯增加，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)(P＜0.001)；而經(jīng)HSYA(15、60、120μmol/L)預(yù)處理1 h后，與模型組比較，HSYA處理組熒光強(qiáng)度呈濃度依賴的減弱(P＜0.001，表1)?？梢?，HSYA預(yù)處理能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SHSY5Y細(xì)胞內(nèi)ROS的增加。

表1 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞ROS含量的影響Tab.1 Effect of HSYA on ROS induced by MPP+in SHSY5Y cells(，n=5)

表1 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞ROS含量的影響Tab.1 Effect of HSYA on ROS induced by MPP+in SHSY5Y cells(，n=5)

Control：空白對(duì)照組；MPP+：模型對(duì)照組。與空白對(duì)照組比較，###P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

組別DCF熒光強(qiáng)度(%of control) Control 100.0±8.9 MPP+581.3±30.3###15μmol/L HSYA+MPP+445.6±44.5*60μmol/L HSYA+MPP+311.7±20.1**120μmol/L HSYA+MPP+180.2±19.6***

2.4 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位的影響1 mmol/L MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞48 h后，細(xì)胞線粒體膜電位顯著性降低(P＜0.001)，熒光強(qiáng)度僅為空白對(duì)照組的(45.2±5.9)%；紅/綠熒光強(qiáng)度比值由空白對(duì)照組的4.21±0.15降低為0.95±0.07。而經(jīng)HSYA(15、60、120μmol/L)預(yù)處理1 h后，與模型組比較，HSYA處理組細(xì)胞線粒體膜電位呈濃度依賴的升高(P＜0.01)，紅/綠熒光強(qiáng)度比值由模型組的0.95±0.07升高為1.87± 0.23、3.02±0.36和3.96±0.19(表2)。可見HSYA預(yù)處理能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位的降低。

表2 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位的影響Tab.2 Effect of HSYA on mitochondrial transmembrane potential induced by MPP+in SH-SY5Y cells(，n=5)

表2 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位的影響Tab.2 Effect of HSYA on mitochondrial transmembrane potential induced by MPP+in SH-SY5Y cells(，n=5)

Control：空白對(duì)照組；MPP+：模型對(duì)照組。與空白對(duì)照組比較，###P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

組別熒光強(qiáng)度(%of control)紅/綠熒光強(qiáng)度比值Control 100.0±6.7 4.21±0.15 MPP+45.2±5.9###0.95±0.07###15μmol/L HSYA+MPP+64.4±9.1*1.87±0.23*60μmol/L HSYA+MPP+78.7±7.2*3.02±0.36**120μmol/L HSYA+MPP+90.2±8.6**3.96±0.19***

2.5 HSYA對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9表達(dá)的影響如圖2A所示，與空白對(duì)照組比較，1 mmol/L MPP+作用SH-SY5Y細(xì)胞48 h后，胞質(zhì)Cyt-C釋放明顯增加(P＜0.01)，與模型組比較，120μmol/L HSYA預(yù)處理顯著抑制Cyt-C的釋放(P＜0.05)；MPP+誘導(dǎo)Bcl-2表達(dá)明顯減少，Bax表達(dá)稍有增加，Bcl-2/Bax比值顯著性減小(P＜0.01)；與模型組比較，120μmol/L HSYA預(yù)處理能顯著性增加Bcl-2/Bax比值(P＜0.01，圖2B)。MPP+能明顯誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞Caspase-3和 Caspase-9的高表達(dá)(P＜0.01，P＜0.05)；而120 μmol/L HSYA預(yù)處理能夠有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞Caspase-3和Caspase-9表達(dá)的增加(P＜0.05，P＜0.05，圖2C、2D)。

圖2 HSYA對(duì)MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞Cyt-C、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9表達(dá)的影響Fig.2 Effects of HSYA on the expressions of Cyt-C，Bcl-2，Bax，Caspase-3 and Caspase-9 induced by MPP+in SH-SY5Y cells(，n=5)

3 討 論

ROS誘發(fā)的線粒體凋亡途徑被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的主要途徑之一［10］。在此過程中，ROS的堆積導(dǎo)致線粒體膜發(fā)生氧化受損并引起線粒體通透性轉(zhuǎn)導(dǎo)孔開放，進(jìn)而引起線粒體膜電位的降低，并引起核膜的破裂以及細(xì)胞色素及凋亡誘導(dǎo)因子等的釋放［11-13］；進(jìn)入胞質(zhì)的細(xì)胞色素C可活化Caspase-9并進(jìn)一步激活細(xì)胞凋亡過程中最關(guān)鍵酶Caspase-3從而觸發(fā)凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)［14-15］。Bcl-2主要存在于線粒體外層膜上，其抑制凋亡的機(jī)制是它可直接或者間接地阻止細(xì)胞色素C自線粒體的釋出，從而抑制Caspase-9活化。Bax能與Bcl-2形成異源二聚體，通過抑制后者的活性，促進(jìn)凋亡發(fā)生。一般認(rèn)為Bcl-2/Bax比值越低，細(xì)胞越易發(fā)生凋亡［16-17］。

研究表明，MPP+可特異性的與線粒體呼吸鏈復(fù)合物I(MC-I)結(jié)合并抑制其活性，從而抑制ATP的合成，并導(dǎo)致線粒體受損，從而產(chǎn)生大量自由基，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生［18-19］。目前，以MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體凋亡模型是研究藥物對(duì)神經(jīng)元凋亡保護(hù)作用的常用模型之一。

本研究參照程月發(fā)等人［20］的報(bào)道，采用MPP+誘導(dǎo)SH-SY5Y，發(fā)現(xiàn)1 mmol/L MPP+作用SHSY5Y細(xì)胞48 h后，能顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，凋亡率達(dá)(38.6±1.8)%，而HSYA預(yù)處理能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞調(diào)亡。文獻(xiàn)報(bào)道，紅花黃色素具有很強(qiáng)的抗自由基、抑制脂質(zhì)過氧化作用［5-6］。大量文獻(xiàn)顯示，紅花黃色素能顯著降低氧化損傷腦組織的丙二醛含量和提高超氧化物歧化酶活性［7-8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSYA預(yù)處理能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)活性氧的增加，我們認(rèn)為這正是其抗氧化作用的結(jié)果。線粒體與Caspase蛋白酶家族被認(rèn)為是凋亡過程中的兩個(gè)重要的調(diào)控點(diǎn)。線粒體膜電位的崩解導(dǎo)致Cyt-C向胞質(zhì)釋放，并進(jìn)一步激活Caspase蛋白酶是細(xì)胞凋亡中的核心事件［13］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSYA能有效抑制MPP+誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體膜電位的降低、抑制Cyt-C向胞質(zhì)釋放和抑制Caspase-3和Caspase-9的高表達(dá)，可見，HSYA通過抑制線粒體膜電位的降低甚至崩解，減少了Cyt-C向胞質(zhì)的釋放從而抑制Caspase蛋白酶活化。同時(shí)，我們的結(jié)果顯示，120μmol/L HSYA預(yù)處理能顯著性增加Bcl-2/Bax比值，該結(jié)果和逯素梅等人的報(bào)道一致。而我們知道Bcl-2可通過作用于細(xì)胞色素C抑制Caspase蛋白酶活化［16］，因此我們不妨認(rèn)為HSYA可能通過維持線粒體膜電位和增加Bcl-2的表達(dá)抑制Cyt-C向胞質(zhì)的釋放并最終抑制Caspase凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的發(fā)生。

總之，HSYA預(yù)處理能明顯提高M(jìn)PP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率，可有效抑制細(xì)胞調(diào)亡的發(fā)生，其機(jī)制可能與抑制細(xì)胞線粒體凋亡途徑有關(guān)。

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(編輯 卓選鵬)

Protective effects of hydroxysafflor yellow A against MPP+-induced apoptosis in SH-SY5Y cells

PAN Jian1，LI Shao-ping1，LI Jian-xiong2，LIAN Fo-yan3，HUANG Yan4，QIN Long4
(1.Emergency Center，2.Department of Neurology，3.Intensive Care Unit of Internal Medicine，4.Department of Pharmacy，Lanzhou University Second Hospital，Lanzhou 730030，China)

ObjectiveTo investigate the neuroprotective effect of hydroxysafflor yellow A(HSYA)on MPP+-induced apoptosis in SH-SY5Y cells and its related mechanisms.MethodsCell viability was analyzed using MTT assay.Cell apoptosis was measured by flow cytometry.The level of reactive oxygen species(ROS)within the cells was analyzed by fluorometric probe DCFH-DA assay and mitochondrial transmembrane potential was revealed by rhodamine123 staining.The expressions of cytosolic Cyt-C，Bcl-2，Bax，Caspase-3 and Caspase-9 were analyzed by Western blot.ResultsThe cell viability was significantly decreased by 1 mmol/L MPP+，and the percentage of apoptosis increased to(38.6±1.8)%，but was reversed by HSYA pretreatment of different concentrations(15，60 and 120μmol/L)(P＜0.001，P＜0.01，respectively).Pretreatment of HSYA reversed the increase of ROS，cytosolic Cyt-C，Caspase-3 and Caspase-9(P＜0.001，P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05，respectively)，decrease of mitochondrial transmembrane potential and Bcl-2/Bax ratio induced by MPP+in SH-SY5Y cells(P＜0.01，P＜0.01，respectively).ConclusionHSYA pretreatment can increase cell viability to prevent MPP+-induced cell apoptosis.The mechanism may be correlated to the inhibition of mitochondrial apoptotic pathway.

hydroxysafflor yellow A；SH-SY5Y；apoptosis；mitochondrion

R285

A

1671-8259(2014)05-0690-05

10.7652/jdyxb201405025

2013-11-08

2014-01-25

中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(No.LZUJBKY-2013-216) Supported by the Fundamental Research Funds for the Central Universities(No.LZUJBKY-2013-216)

秦龍，碩士.E-mail：lzviolin@163.com

潘劍(1958-)，男(漢族)，副主任醫(yī)師.研究方向：神經(jīng)損傷與藥物防治.E-mail：ldeypj@163.com

時(shí)間：2014-05-16 15∶47 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20140525.1243.001.html