孟祥瑞，陸 鵬，劉桂舉，肖 鵬，白 樺，栗 敏，李瑞君，梅家轉

（鄭州人民醫(yī)院腫瘤內科，河南鄭州450003）

酪氨酸蛋白激酶FphA7蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達

孟祥瑞，陸 鵬，劉桂舉，肖 鵬，白 樺，栗 敏，李瑞君，梅家轉

（鄭州人民醫(yī)院腫瘤內科，河南鄭州450003）

目的探索非小細胞肺癌（NSCLC）組織中FphA7蛋白的表達及其臨床意義。方法采用免疫組化法檢測66例手術切除的NSCLC組織中FphA7蛋白表達情況，并探索其與臨床病理特征的關系。結果全組66例患者中，F(xiàn)phA7蛋白表達陽性率56.06%。FphA7蛋白的表達與纖維化和腫瘤大小有關（P＜0.05）。FphA7的表達與腫瘤增殖能力有關（P＜0.05）。單因素生存分析及多因素生存分析結果顯示增強FphA7表達已確定為有利的患者生存預測因素（P＜0.05）。結論FpA7可能參與NSCLC發(fā)展過程，可作為臨床腫瘤標志物，并可用作將來治療的靶點。

FphA7蛋白；非小細胞肺癌；免疫組化

Fph蛋白構成最大受體酪氨酸激酶亞家族，并根據配體結合親和力和細胞外域結構分成2個分組（F-phA和 FphB）。已確定有 9種 FphA（FphA1-8和Fph10）和5種FphB（FphB1-4和FphB6）受體存在于人體內。迄今為止，一般認為Fph蛋白廣泛參與發(fā)育過程，其能夠調節(jié)細胞黏附、轉移或化療耐藥及組織或細胞邊界形成等，除了發(fā)育過程中基本作用之外，F(xiàn)ph蛋白同樣參與大量的腫瘤發(fā)展和轉移相關的過程，包括細胞黏附、形成、轉移和血管生成［1-5］。值得注意的是，F(xiàn)ph已被視為主要調控因子，其能夠刺激或抑制致癌信號網絡活動，具體取決于肝配蛋白刺激和其他環(huán)境因素［3］。多種腫瘤都有Fph過表達，并與患者預后存在關聯(lián)性［1-5］。迄今為止國內尚未獲得非小細胞肺癌中與Fph表達的臨床意義相關的全面數據。鑒于上述考慮，本研究旨在采用免疫組化法評估66例非小細胞肺癌（non-small cell lung carcinoma，NSCLC）患者的FphA7表達與臨床病理參數和患者生存的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象收集接受手術治療的66例NSCLC患者，術前未接受過化療或放療。最后一次隨訪時，60例（90.91%）患者因 NSCLC死亡，而其余 6例（9.09%）患者尚生存。詳細臨床病理資料見表1。

1.2 檢測方法采用免疫組化法檢測NSCLC組織中FphA7蛋白表達，然后使用哈氏蘇木素染色切片，并置于無水甲醇蓋片上。通過忽略一抗和（或）使用一種不相關抗血清取代一抗，執(zhí)行合適陰性對照。

1.3 結果判定標準采用雙盲法觀片，每個腫瘤至少分析2個核心，以評估FphA7的免疫反應性。根據F-phA7陽性腫瘤細胞百分比作為腫瘤細胞免疫反應評分，0分：陰性染色；陽性腫瘤細胞在0%～4%；1分：5%～24%腫瘤細胞陽性；2：25%～49%腫瘤細胞陽性；3分：陽性腫瘤細胞在50%～100%。對于染色程度，0分：陰性染色；1分：輕度染色；2分：中度染色；3分：高度染色。最后，F(xiàn)phA7表達水平歸類為陰性（如果總得分為0～2分）和陽性（如果總得分≥3分）。

1.4 統(tǒng)計學處理采用SPSS 17.0進行所有統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗檢驗評估FphA7蛋白表達水平與臨床病理特征之間的關聯(lián)性。使用Kaplan-Meier構建生存曲線，并利用log rank檢驗比較曲線之間差異。建立COX比例風險回歸模型評估潛在預后指標和患者生存整體情況之間的關聯(lián)性。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 EphA7的表達及與臨床病理特征之間的關系66例 NSCLC組織中，F(xiàn)phA7蛋白表達陽性率為56.06%（37/66）。FphA7的表達與臨床病理特征之間的關系見表1。在41例腺癌中，發(fā)現(xiàn)FphA7蛋白表達為陽性的為24例（58.54%）。在25例鱗狀細胞肺癌中，發(fā)現(xiàn) FphA7蛋白表達為陽性的為 13例（52.00%）。

2.2 EphA7蛋白表達水平與患者生存期的關系

2.2.1 FphA7蛋白的表達情況對生存的影響 Kaplan-Meier生存曲線表明，相比于陰性表達水平，F(xiàn)phA7陽性表達水平的NSCLC患者具有較長生存時間（P＜0.05）。見圖1。

2.2.2 FphA7蛋白表達水平對患者預后的影響 單因素分析顯示，病理類型、病理分期、FCOG活動狀態(tài)評分以及FphA7的表達都確定是患者生存的重要預后因素（P＜0.05）。多因素分析顯示，病理類型、病理分期、FCOG活動狀態(tài)、FphA7蛋白的表達水平可視為患者生存的獨立預后因子。見表2、3。

表1 FphA7的表達與臨床病理特征之間的關系

圖1 FphA7蛋白的表達情況對生存的影響

表2 臨床病理特征與患者生存之間的關系（單因素分析）

表3 臨床病理特征與患者生存之間的關系（COX回歸模型）

3 討論

Fph基因在多種人類惡性腫瘤中過表達，包括食管、甲狀腺、胸腺、胃、結腸、胰腺和婦科腫瘤、黑素瘤和神經膠質瘤［1-5］。然而，目前大部分全面臨床數據僅限FphA2受體，且對Fph在肺癌中的評估依然不足。

一項針對279例NSCLC患者的免疫化學分析表明，較高的FphA2蛋白表達水平與K-Ras突變、FGFR活性、吸煙史和不良預后相關聯(lián)［6］。另一項研究［7］分析了11種Fph和8種肝配蛋白，其結果表明FphA4基因表達水平與肺腺癌患者病癥改善存在關聯(lián)性，有可能是通過影響腫瘤細胞的轉移和浸潤。在肺腺癌中，確定了Fph家族成員（包括FphA3、A5、A7、B1和B6）的多個突變基因型，而相比于低級階段的腫瘤，高級階段的腫瘤表現(xiàn)出更多的FphA7突變累積［8］。F-phA7蛋白在肺癌的表達情況及與預后的關聯(lián)性報道較少。

在這一方面，目前的研究提供了臨床證據，表明FphA7有可能參與了NSCLC的癌演化過程的生物學機制。我們發(fā)現(xiàn)較高的FphA7表達水平與有利的預后存在顯著關聯(lián)性。而FphA7蛋白高表達水平與患者較高的年齡、纖維化和較小的腫瘤尺寸之間存在顯著關聯(lián)性。FphA7高表達水平還與較高的腫瘤增殖能力相關聯(lián)。此外，在FCOG活動狀態(tài)＜2的NSCLC患者中FphA7蛋白表達水平較高，這些證據提示FphA7蛋白可作為NSCLC獨立的預后因子，并可能在早期的肺癌中發(fā)揮更重要作用。

很多研究［3］顯示Fph家族成員及其配體可促進腫瘤增長、浸潤和遷移以及新血管形成。也有報道［9］揭示了Fph受體的腫瘤抑制作用，而配體依賴型與配體獨立型信號之間的比較也被認為是起到腫瘤抑制功能的一個關鍵機制。因此，借助雙向信號通路，F(xiàn)ph受體及其配體可在截然相反的活動以及其他信號形態(tài)之間切換，以影響腫瘤細胞行為。我們的研究結果證實FphA7受體可能作為潛在調控因子，抑制NSCLC發(fā)展過程中的致瘤信號活動，具體取決于Fph刺激和（或）環(huán)境因素。

了解FphA7蛋白參與NSCLC的過程有助于進一步揭示肺癌發(fā)展和轉移的機制，進而為針對此類人體惡性腫瘤中Fph蛋白信號系統(tǒng)的創(chuàng)新抗腫瘤藥物的開發(fā)提供支持。

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Expression of Tyrosine Kinase EphA7 in the Non-small Cell Lung Carcinoma

Meng Xiangrui，Lu Peng，Liu Guiju，Xiao Peng，Bai Hua，Li Min，Li Ruijun，Mei Jiazhuan
（Department of Oncology，the People’s Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450003，China）

ObjectiveTo evaluate the clinical significance of FphA7 protein expression in non-small cell lung carcinoma（NSCLC）.MethodsFphA7 protein expression was assessed by using immunohistochemically in the 66 surgically resected NSCLC and was analyzed in the relation with clinicopathological characteristics.ResultsThe positive rate FphA7 protein was 56.06%in the NSCLC.FphA7 protein expression was significantly associated with，fibrosis and tumor size（P＜0.05）.FphA7 expression was positively associated with tumor proliferative capacity（P＜0.05）.FphA7 expression were identified as predictors of favourable patients’survival at both univariate and multivariate levels（P＜0.05）.ConclusionFphA7 may be involved in progression of NSCLC，reinforcing their utility as clinical biomarkers for patient’s management and prognosis，as also as potential targets for future therapeutic interventions.

FphA7；non-small cell lung carcinoma；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.003

R734.2；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0193-04

2013-10-14）

孟祥瑞（1977-），女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事食管癌及肺癌的診治與研究。F-mail：mengxiangruibb2008@163.com

梅家轉（1967-），男，博士，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤生物治療的研究。F-mail：mjzhuan@163.com