金紅軍，婁衛(wèi)華

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科，河南鄭州450052）

喉鱗癌組織中Oc t-4mRNA的表達及意義

金紅軍，婁衛(wèi)華

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科，河南鄭州450052）

目的探討Oct-4 mRNA在喉鱗癌組織中的表達及意義。方法采用RT-PCR和熒光定量PCR檢測48例喉鱗癌及其癌旁正常喉黏膜組織中Oct-4 mRNA的表達。結(jié)果RT-PCR顯示Oct-4 mRNA在喉鱗癌組織中的陽性率為64.6%，熒光定量PCR顯示喉鱗癌組織中Oct-4 mRNA的相對表達量為0.533± 0.142，而癌旁正常喉黏膜組織未檢測出Oct-4基因的表達（P＜0.01）。Oct-4 mRNA在喉鱗癌高分化組陽性率為33.3%，顯著低于中、低分化組的69.0%（P＜0.05）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率為47.8%，顯著低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的80.0%（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ期組陽性率為47.4%，低于Ⅲ、Ⅳ期組的75.9%（P＜0.05）。熒光定量PCR結(jié)果顯示Oct-4基因的相對表達量隨著喉鱗癌組織分化減低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和高的臨床分期而顯著增加（P＜0.05）。結(jié)論Oct-4基因的高表達可能參與了喉鱗癌的發(fā)生、發(fā)展，并對判斷喉鱗癌患者的生物學(xué)行為有一定意義。

喉鱗癌；Oct-4 mRNA；RT-PCR；熒光定量PCR

腫瘤的發(fā)病率近年來逐漸上升，嚴重威脅著人類的健康和生命，已成為繼心血管病之后人類第2大致死原因［1］。喉癌約占耳鼻喉科腫瘤的1/3，是頭頸部最常見的惡性腫瘤，尤其是近年來隨著環(huán)境污染的加劇，其發(fā)病率呈上升趨勢，并且呈現(xiàn)年輕化的趨勢［2-3］。喉癌的發(fā)病部位較為隱蔽，同時腫瘤的異質(zhì)性也會導(dǎo)致臨床病理分期在預(yù)后評估方面有一定局限性，因此，明確喉癌相關(guān)基因，以利于喉癌的早期診斷和預(yù)后判斷是一個需要解決的問題。研究［4］顯示，腫瘤細胞內(nèi)存在有一小群具有高增生潛能和自我更新潛能的起始細胞被稱為腫瘤干細胞，是腫瘤發(fā)生的根源，其相關(guān)的基因在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中也起到關(guān)鍵的作用。研究［5-6］發(fā)現(xiàn)，Oct-4在腫瘤干細胞特性的維持中發(fā)揮一定的作用。本研究檢測了喉鱗癌組織中Oct-4基因的表達情況，以探討Oct-4檢測的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集我院2007年1月至2010年12月耳鼻咽喉科手術(shù)切除標本48例，所有病例經(jīng)病理證實為喉鱗癌，其中男41例，女7例，年齡39～71（58.3 ±13.4）歲，每例另取癌旁正常喉黏膜組織作為對照。根據(jù)1997年UICC TNM分期標準所有病例分為：Ⅰ期7例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期15例；高分化6例，中、低分化42例；有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。

1.2 主要試劑Trizol為北京天根生物科技公司產(chǎn)品，RT-PCR和熒光定量檢測試劑盒購自美國ABI公司，PCR引物由深圳華大基因公司合成。

1.3 組織總RNA提取及cDNA第一鏈的合成取50 mg手術(shù)切除標本，按照試劑盒說明書使用Trizol提取細胞總RNA。按照RT-PCR試劑盒說明書合成cDNA第一鏈。樣品-70℃凍存。

1.4 RT-PCR按照RT-PCR試劑盒說明書擴增Oct-4片段。Oct-4（194 bp）：Sence：AGCAACTCCGATGGGGCCTCC，Antisence：GCCCCACATCGGCCTGTG；GAPDH（205bp）：Sence：5′-GGTTCCGGATCGATTTTGGG-3′，Antisence：5′-GCCTTGGATAGTTAATCGT-3′。94℃預(yù)變性3 min；94℃40 s，60℃40 s，72℃1 min，30個循環(huán)；72℃10 min。

1.5 熒光定量PCR按照熒光定量檢測試劑盒說明書操作檢測Oct-4 mRNA的表達量，引物序列同RTPCR，反應(yīng)條件為：95℃ 15 s，60℃ 1 min，30個循環(huán)。Ct值說明基因擴增達到閾值的循環(huán)數(shù)，△Ct值=目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值，目的基因的表達量采用2 -△Ct評估。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 16.0處理數(shù)據(jù)，計量資料以s表示，2組樣本均數(shù)間的比較使用t檢驗，多組均數(shù)間的比較使用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，檢驗水準α= 0.05。

2 結(jié)果

2.1 喉鱗癌組織及癌旁組織中Oct-4 mRNA表達的差異RT-PCR結(jié)果顯示48例喉鱗癌組織中有31例檢出Oct-4 mRNA的陽性表達，占64.6%，而癌旁正常喉黏膜組織未檢測出Oct-4 mRNA的表達（P＜0.05）（圖1）。熒光定量PCR結(jié)果也顯示喉鱗癌組織中Oct-4基因的相對表達量為0.533±0.142，而癌旁正常喉黏膜組織的熒光值都在基線水平（P＜0.05）。

圖1 鱗癌及癌旁組織中Oct-4基因RT-PCR結(jié)果

2.2 喉鱗癌組織中Oct-4 mRNA表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1 喉鱗癌組織中臨床指標與Oct-4 mRNA表達的關(guān)系

3 討論

Oct-4是一個新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子，屬于POU家族成員，其表達的蛋白可以結(jié)合到相應(yīng)目的基因啟動子的PORF或MORF序列而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用，調(diào)節(jié)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄、表達，健康個體中Oct-4呈低表達狀態(tài)，主要參與個體的胚胎發(fā)育過程以及干細胞的自我更新和多能性的維持［7］。近期的研究［8］顯示Oct-4在乳癌、肺癌、前列腺癌等多種實體腫瘤組織中高表達，參與了上述腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，并且可以作為腫瘤干細胞的一個標志蛋白。腫瘤干細胞是目前腫瘤學(xué)的一個新概念，認為是腫瘤的起源細胞，同時也是腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)的根源［9］。

Oct-4基因表達水平與一些惡性腫瘤發(fā)生和生物學(xué)行為的密切關(guān)系已被多數(shù)研究者所證實［10］。本研究結(jié)果也顯示，喉鱗癌組織中Oct-4 mRNA陽性率為64.6%，而癌旁正常喉黏膜組織未檢測出該基因的表達，提示Oct-4基因的表達可能參與了喉鱗癌的發(fā)生，這一發(fā)現(xiàn)與前人在其他腫瘤中的研究結(jié)果相一致，同時也暗示了Oct-4基因在惡性腫瘤中的檢測意義重大，有可能成為腫瘤早期篩查、診斷及預(yù)后評估的有效標志。本研究結(jié)果還顯示，喉鱗癌組織中Oct-4基因的表達與腫瘤的分化程度、有無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期關(guān)系密切；熒光定量PCR結(jié)果顯示Oct-4的相對表達量隨著喉鱗癌組織分化程度減低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和高的臨床分期而顯著增加，提示Oct-4基因在喉鱗癌的惡性程度判定上是一個敏感指標，可能預(yù)示患者的預(yù)后。

綜上所述，Oct-4基因在喉鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起到一定的作用，在腫瘤的分級以及預(yù)后判斷等方面具有一定的意義。

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Expression and Significance of Oct-4 Gene in Laryngeal Squamous Cell Carcinoma

Jin Hongjun，Lou Weihua
（Department of Otorhinolaryngology，the First Affiliated Hospital，Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China）

ObjectiveTo investigate the expression and significance of Oct-4 mRNAi n laryngeal squamous cell carcinoma.MethodsRT-PCR and fluorescence quantitative PCR were used to detect Oct-4 mRNA expressions in the 48 cases of laryngeal squamous cell carcinoma tissues and paraneoplastic nomal mucosa tissues.ResultsThe result of RT-PCR showed that the positive rate of Oct-4 mRNAw as 64.6%in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues，the result of fluorescence quantitative PCR showed that the amount of Oct-4mRNA in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues was 0.533±0.142，while no Oct-4 mRNAw as found in the paraneoplastic normal mucosa tissues（P＜0.05）.The expression rate of Oct-4 mRNA in the well differentiated laryngeal squamous cell carcinoma tissues（33.3%）was lower than that in the medium and poor differentiated laryngeal squamous cell carcinoma tissues（69.0%）（P＜0.05）.The expression rate of Oct-4 mRNA in the no lymph node metastasis group（47.8%）was lower than that in the lymph node metastasis group（80.0%）（P＜0.05）.The positive expression rate of Oct-4 mRNA inⅠ-Ⅱphase（47.4%）was lower than that in theⅢ-Ⅳ phase（75.9%）（P＜0.05）.The result of fluorescence quantitative PCR showed that the amount of Oct-4 mRNA in the laryngeal squamous cell carcinoma tissues was obviously increased with the lower differentiation，the lymph node metastasis and higher clinical stages.ConclusionThe overexpression of Oct-4 mRNA may be associated with the carcinogenesis and development of laryngeal squamous cell carcinoma，and can be used for judging its biological behavior.

laryngeal squamous cell carcinoma；Oct-4 mRNA；RT-PCR；fluorescence quantitative PCR

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.002

R739.65；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0190-03

2013-07-12）

金紅軍（1965-），男，博士，主任醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉科臨床工作。F-mail：jinhongjun1@126.com