王娜鄒明靜(

1.商丘醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校,河南商丘 476000;2. 菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校,山東菏澤 274030)

轉(zhuǎn)鐵蛋白的分析進(jìn)展

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1.商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校,河南商丘 476000;2. 菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校,山東菏澤 274030)

綜述了目前國內(nèi)外測定轉(zhuǎn)鐵蛋白的多種方法,探討其原理并分析比較了方法的優(yōu)缺點(diǎn);簡單介紹了轉(zhuǎn)鐵蛋白測定的臨床意義。

轉(zhuǎn)鐵蛋白 分析方法 臨床意義

轉(zhuǎn)鐵蛋白又稱為鐵傳遞蛋白、運(yùn)鐵蛋白(TRF)是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì),主要由肝細(xì)胞合成。Tf是體液中不可缺少的成分,不僅參與鐵的運(yùn)輸與代謝,參與呼吸、細(xì)胞增殖和免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié),而且能調(diào)節(jié)鐵離子平衡和能量平衡,還具有抗菌殺菌的自我保護(hù)的抗病功能,是抑制細(xì)菌繁殖的重要因子,因而Tf具有較全面的蛋白質(zhì)生理功能。現(xiàn)有多種方法應(yīng)用于對(duì)血清轉(zhuǎn)鐵蛋白的測定。

1 轉(zhuǎn)鐵蛋白的分析方法

目前測定Tf的免疫方法有火箭免疫電泳、放射免疫分析(RIA)、酶聯(lián)免疫分析(ELISA)、熒光酶免疫分析,電化學(xué)免疫分析,毛細(xì)管區(qū)帶電泳,表面等離子共振(SPR),壓電免疫分析,免疫比濁法、共振散射法等。

1.1 火箭免疫電泳法(RIR)[1]

此法靈敏度較低,在實(shí)驗(yàn)過程中瓊脂糖板與電泳條件要嚴(yán)格控制一致,否則重現(xiàn)性較差。

1.2 放射免疫分析(RIA)[2]

放射免疫分析(Radio Immunoassay,RIA)是用放射性同位素標(biāo)記抗原Ag*與未標(biāo)記抗原Ag競爭結(jié)合過量的抗體(Ab),則生成的Ag*-Ab復(fù)合物就與Ag的量呈負(fù)相關(guān);Ag增加,則Ag*-Ab.減少;反之Ag *-Ab上升,Ag*-Ab的生成量可通過測定其放射活性得到。因此,如果測定出樣品的放射活性,就可根據(jù)已知濃度抗原的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中抗原濃度,這種分析方法稱為放射免疫分析。若是用放射性同位素標(biāo)記的抗體Ab*與樣品中的抗原Ag反應(yīng),然后用固相抗原免疫吸附劑去掉未結(jié)合的Ab*測定上清液中的放射活性就可計(jì)算出生成Ag-Ab*的量,此量與樣品中抗原的量成正比,以此計(jì)算出樣品抗原濃度。放射性同位素對(duì)人體有害。

1.3 酶免疫分析法

何濤等[3]建立了人血清轉(zhuǎn)鐵蛋白的競爭性酶聯(lián)免疫測定法(CEIT),可以測定到納克水平。Yasser Perera等基于兩種對(duì)鼠類血清轉(zhuǎn)鐵蛋白無交叉反應(yīng)的單克隆抗體建立了一種酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法測鼠血清中的人轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度,測得線性范圍為25-400ng/ ml,檢出限為10ng/ml。此方法靈敏度很高,但操作復(fù)雜,費(fèi)時(shí)。

1.4 熒光酶免疫分析

免疫熒光檢測法是以熒光物質(zhì)作為標(biāo)記物,與已知的抗體(或抗原)結(jié)合,但不影響其免疫學(xué)特性,根據(jù)熒光的存在與否來檢測抗原或抗體,用于檢測和鑒定未知的抗原,經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照而得到分析物的濃度。Li等過氧化物酶標(biāo)抗原和未標(biāo)記抗原競爭和固定抗體反應(yīng),過氧化物酶催化過氧化氫氧化PCP生成一種新的熒光物質(zhì)進(jìn)行檢測,大大增強(qiáng)熒光信號(hào)。

1.5 表面等離子共振(SPR)

SPR是一種物理光學(xué)現(xiàn)象,當(dāng)一束平面單色偏振光在一的角度范圍內(nèi)照射到鍍?cè)诓ＡП砻娴慕饘俦∧ど习l(fā)生全射時(shí),其入射光的波向量與金屬膜內(nèi)表面電子(稱為等離體)的振蕩頻率相匹配時(shí),光線被耦合進(jìn)入金屬膜,引起電發(fā)生共振,即表面等離子體共振。Liu xia等基于表面等離子共振傳感器用金納米粒子和雙層傳感膜增大共振波長變化來提高靈敏度,金納米粒子不是用來標(biāo)記,而是用來加強(qiáng)SPR信號(hào)的雙分子作用的組成部分。

1.6 壓電免疫分析

壓電免疫傳感器的基本原理就是將抗體或抗原固定于石英晶體表面,利用抗原與抗體的特異親合反應(yīng), 當(dāng)待測的抗原或抗體與所固定的識(shí)別物相互作用而產(chǎn)生特異吸附時(shí),就會(huì)導(dǎo)致晶體表面質(zhì)量負(fù)載的增加,所吸附的抗體或抗原的量可以通過傳感器的頻率變化加以監(jiān)測。王樺等建立一種基于等離子體聚合膜、結(jié)合聚電解質(zhì)設(shè)計(jì)的壓電免疫傳感器測定人血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白,將其用于實(shí)際樣品中轉(zhuǎn)鐵蛋白的測定,結(jié)果與酶聯(lián)免疫法基本一致。

1.7 電免疫傳感器

Hu Shun-Qin等基于金表面的低聚物層建立一種定量測定電免疫傳感器方法,在電化學(xué)作用下鄰氨基苯硫醇在多晶的金表面形成的自組裝層被聚合,同時(shí)在金表面也有氨基自由基生成,轉(zhuǎn)鐵蛋白抗血清被共價(jià)偶聯(lián)在金表面,并不影響其生物活性。在溶液中含有抗體的混合結(jié)構(gòu)電極與抗原反應(yīng)導(dǎo)致低聚物層電介質(zhì)增加,電信號(hào)的降低與抗原的量成線性。

1.8 毛細(xì)管電泳

Tünde Konecsni等通過用毛細(xì)管區(qū)帶電泳成功對(duì)異硫氰酸熒光黃(FITC)標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白的交聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測。在堿性條件下, FITC的異硫氰基與抗體蛋白的自由氨基竟碳酰胺化而形成穩(wěn)定的硫碳氨基鍵,成為熒光素標(biāo)記抗體,轉(zhuǎn)鐵蛋白的檢出限為10ng/ml。

1.9 共振散射法

在聚乙二醇的作用下,羊抗人TRF和血清TRF特異性結(jié)合形成免疫復(fù)合物微粒,使相應(yīng)的各同步散射峰的共振散射強(qiáng)度大大增強(qiáng),在470nm測定線性范圍為0.10-2.50μg/mL;楊培慧等利用碳二亞胺將抗TRF化學(xué)偶聯(lián)到已修飾了半胱胺的金納米表面,制備了抗TRF-納米金免疫探針,再與血清TRF特異性結(jié)合形成更大的免疫復(fù)合物微粒,使470處的散射峰明顯增強(qiáng),檢測下限為8.5×10-11mol/L,提高了對(duì)血清TRF測定的靈敏度。

2 臨床意義

血清TRF的測定,對(duì)于貧血的診斷和治療,肝、腎疾病的病情觀察和預(yù)后判斷有重要的臨床意義。若患者出現(xiàn)缺鐵性貧血、急性肝炎、急性炎癥、口服避孕藥、妊娠后期等癥狀時(shí),血清轉(zhuǎn)鐵蛋白含量增多;若患者出現(xiàn)腎病綜合征、肝硬化、惡性腫瘤、溶血性貧血、營養(yǎng)不良等癥狀時(shí),血清轉(zhuǎn)鐵蛋白含量減少,常隨著白蛋白、前白蛋白同時(shí)下降,因此可以作為評(píng)價(jià)營養(yǎng)狀況和衡量機(jī)體抗感染能力可靠指標(biāo)。

[1]張彬.火箭電泳法測豬血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白含量[J].畜牧與獸醫(yī),1992, 24(2):56.

[2]吳嬋群,江一民,李尹民.轉(zhuǎn)鐵蛋白放射免疫分析法的建立及其初步應(yīng)用[J].核技術(shù),1993,16(11):653-656.

[3]何濤,吳明瀘,羅文熾,楊燁,劉友平,周志遠(yuǎn).人血清轉(zhuǎn)鐵蛋白酶聯(lián)免疫測定法的研究[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1999,22(2):99-101.