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        豬流行性腹瀉的病毒分離鑒定與免疫試驗

        2014-06-16 00:42:14王林鋒劉寶元郝常寶
        科學(xué)種養(yǎng) 2014年6期
        關(guān)鍵詞:癥狀

        王林鋒+劉寶元+郝常寶

        豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病,于1977年在比利時首次被發(fā)現(xiàn),1982年被命名為豬流行性腹瀉,我國于 1980年首次分離得到PEDV。近年來,山東、河南、湖北等省多個地區(qū)陸續(xù)發(fā)生,漸呈流行之勢,仔豬死亡率最高,可達(dá)100%,給養(yǎng)豬業(yè)造成非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文就近期流行性腹瀉的流行情況開展調(diào)查,對病毒進(jìn)行分離鑒定后對市場上不同類的疫苗免疫效果進(jìn)行研究,確立了PED的綜合防控技術(shù),為養(yǎng)豬戶提供參考,以推動養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。

        一、流行病學(xué)

        豬流行性腹瀉可單一發(fā)生或與豬傳染性胃腸炎混合感染。豬流行性腹瀉病毒為類冠狀病毒,該病毒在65℃條件下10分鐘左右就可殺死;在陽光下6~8小時可滅活;在陰暗環(huán)境中7~10天具有感染力;用0.5%苯酚在37℃下處理30分鐘可殺死。康復(fù)豬可排毒2個月以上,甚至長達(dá)109天。

        該病多發(fā)于冬季,山東省2010年冬季就曾發(fā)生,自2013年9月至2014年1月情況越發(fā)嚴(yán)重,表現(xiàn)為傳播速度快,很快波及到所有豬群,已經(jīng)嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的健康發(fā)展。

        目前,市售疫苗種類繁多,有聯(lián)合疫苗,有基因缺失苗,但疫苗質(zhì)量良莠不齊,再加上抗生素的濫用,治療方案五花八門,亂用疫苗的現(xiàn)象非常普遍,導(dǎo)致毒株變異、毒力增強(qiáng),給養(yǎng)豬業(yè)帶來重大損失。因此,研究一套合理有效的疫苗免疫方案,制定效果確實的疾病治療方案具有重要意義。

        二、臨床癥狀與病理變化

        人工感染的潛伏期,新生仔豬為15~30小時,育肥豬為2天,自然感染可能稍長些。該病的主要臨床癥狀為水樣腹瀉,或者伴隨嘔吐。豬流行性腹瀉病常以暴發(fā)性腹瀉的形式發(fā)生在非免疫斷奶仔豬(I型)或各種年齡的豬(Ⅱ型)?;钾i表現(xiàn)出嘔吐、腹瀉和脫水,與豬傳染性胃腸炎相似,但程度較輕、傳播稍慢;糞稀如水,呈灰黃色或灰色;嘔吐多發(fā)生于吃食或吮乳后。少數(shù)患豬體溫升高1~2℃,精神沉郁,食欲減退或不食,尤其是繁殖種豬。癥狀的輕重隨年齡的大小而有差異,年齡越小,癥狀越重,1周內(nèi)新生仔豬常于腹瀉后2~4天內(nèi)脫水而死,病死率70%~100%。斷奶豬、育肥豬以及母豬常呈現(xiàn)沉郁和厭食癥狀,持續(xù)腹瀉4~7天,逐漸恢復(fù)正常。成年豬僅表現(xiàn)沉郁、厭食、嘔吐等癥狀,如果沒有繼發(fā)感染且護(hù)理得當(dāng),豬很少發(fā)生死亡。

        剖檢可見主要病變?yōu)樾∧c膨脹,充滿淡黃色液體,腸壁變薄,個別小腸黏膜有出血點,腸系膜淋巴結(jié)水腫,小腸絨毛變短,重癥者絨毛萎縮,甚至消失。胃經(jīng)常是空的,或充滿膽汁樣黃色液體。其他實質(zhì)性器官無明顯病變。

        三、病毒分離鑒定

        從2013年9月開始,沂水、莒縣地區(qū)曾有2個養(yǎng)殖場(豬群總構(gòu)成為母豬1227頭,種公豬40頭,育肥豬6833頭,保育豬和仔豬3817頭)發(fā)生過仔豬腹瀉。隨機(jī)采集臨床有腹瀉癥狀的哺乳仔豬采取小腸內(nèi)容物,共10份,送到山東農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗室檢測,證實該病原為豬流行性腹瀉病毒。

        四、疫苗免疫試驗

        1. 試驗材料

        ①試驗豬

        本試驗于2013年10~12月在沂水錦程畜牧科技發(fā)展有限公司環(huán)保豬場進(jìn)行。隨機(jī)選取同期妊娠健康母豬20頭,隨機(jī)分為A、B、C、D、E共5組,每組5頭,相互分欄隔離飼養(yǎng)管理。

        ②試驗用疫苗

        本試驗所用的兩種疫苗均從市場購買,分別為TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗、青島易邦PEDV基因缺失苗。

        ③病毒來源

        本試驗攻毒所用的病毒液來自本場經(jīng)過病毒分離鑒定的毒株——7日齡仔豬腸道及內(nèi)容物,RT-PCR檢測為PEDV陽性,加入青霉素、鏈霉素研磨,使其終濃度為1000IU/毫升,加入到30%甘油生理鹽水中,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        2. 試驗方法

        ①試驗前準(zhǔn)備

        試驗開始前給母豬標(biāo)耳號、仔豬稱重,觀察豬只采食量、糞便和精神狀況等,做好相關(guān)記錄。采用RT-PCR方法對豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎和豬輪狀病毒基因進(jìn)行檢測,確定為陰性。

        ②疫苗接種。對4組共20頭試驗豬按說明后海穴注射疫苗,對照組5頭不進(jìn)行疫苗免疫。A組于產(chǎn)前70天注射TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗,產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次;B組于產(chǎn)前60天接種PEDV基因缺失苗,產(chǎn)前40天加強(qiáng)免疫1次;C組于產(chǎn)前70天注射TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗,產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次,產(chǎn)前60天接種PEDV基因缺失苗,產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次;D組在產(chǎn)前40天,實行反飼試驗,直接飼喂經(jīng)抗生素處理的PEDV陽性仔豬腸道及內(nèi)容物5毫升/天,連續(xù)飼喂3天;E組為空白組。

        ③攻毒

        劑量為5毫升/頭,方法為口服。攻毒后觀察記錄母豬、仔豬的采食量、精神狀態(tài)、排便、發(fā)病和死亡等情況。

        3. 結(jié)果

        攻毒后,豬只的基本情況見表1。妊娠母豬出現(xiàn)不同程度的腹瀉,糞便呈水樣、惡臭,治療后1~2天康復(fù),無死亡。哺乳仔豬死亡率較高,仔豬最早出生后2小時出現(xiàn)腹瀉癥狀,腹水和運(yùn)動僵硬見于接毒后20~30小時,最晚見于90小時。腹瀉開始時排黃色黏稠便,以后變成水樣便,混雜有黃白色的凝乳塊,腹瀉最嚴(yán)重時糞便幾乎全部為水。嘔吐、腹瀉的同時患豬伴有精神沉郁、脫水、眼窩下陷、厭食、消瘦和衰竭。癥狀的輕重與年齡大小有關(guān),年齡越小,癥狀越重。剖檢可見小腸腸壁變薄,呈透明狀,腸系膜淋巴結(jié)水腫、出血,腎臟有出血點。

        所選兩類疫苗均為目前市場上所售的中高端產(chǎn)品,通過試驗結(jié)果可以看出,此次流行性腹瀉病毒致病性較強(qiáng),對照組死亡率最高,7日齡內(nèi)死亡率為74%,總死亡率達(dá)85.1%;基因缺失苗的免疫效果優(yōu)于TB二聯(lián)苗免疫效果,而兩者聯(lián)合后免疫效果最好,7日齡以后死亡率僅有3.7%。采用反飼效果比疫苗單用效果稍微好一點,總死亡率達(dá)到35.7%。

        五、結(jié)論

        通過以上試驗,可知產(chǎn)前70天注射TB腹瀉特制二聯(lián)滅活苗,產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次,產(chǎn)前60天免疫PEDV基因缺失苗,產(chǎn)前40天加強(qiáng)1次的免疫方案對豬群能夠產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)。

        對中大豬、成年母豬發(fā)生該病時,要采用停食或大幅度限食,停食時間可持續(xù)2~3天。在停食期間為了防止患豬脫水,可在食槽內(nèi)添加一些補(bǔ)液鹽,有助于降低死亡率。2~3天后患豬開始逐漸恢復(fù)采食,投喂的飼料量要逐步增加,一般經(jīng)過3~7天康復(fù)。

        該病是由冠狀病毒引起的,目前尚無有效的治療藥物,但可以使用一些藥物來減輕腹瀉的癥狀,如口服楊樹花口服液或硅鋁酸鹽配合乙酰甲喹(痢菌凈)粉進(jìn)行治療。對個別腹瀉嚴(yán)重的患豬可肌內(nèi)注射豬干擾素、白細(xì)胞介素或雞新城疫I系苗,配合博落回注射液或阿托品注射液等藥物,可有效控制腹瀉并降低死亡率。由于腹瀉易造成豬脫水死亡,為了降低仔豬的死亡率,可對患豬及時補(bǔ)充電解質(zhì)和水分(可通過直接飲水、腹腔注射或靜脈注射等方式)。

        此外,仔豬對溫度的反應(yīng)非常敏感,冷熱刺激引起仔豬腹瀉,特別是低溫寒冷或高溫潮濕,豬舍的保溫效果不好或濕度過高都會引發(fā)豬流行性腹瀉。所以,我們要綜合考慮才能徹底做好豬流行性腹瀉的防控工作。

        (作者聯(lián)系地址:山東省臨沂市沂水縣畜牧局 郵編:276400)

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