崔振峰，魏永強，韓肖聰，李越超，紀曉娜，張學偉

（1.長春工程學院理學院，長春130012；2.長春旭陽汽車橡塑制品有限公司，長春130033）

自從1962年美國海洋生物學家蕾切爾·卡遜（Rachel Carson）出 版 《寂 靜 的 春 天 》（Silent Spring），人們不再只看到農(nóng)藥帶來的好處，而是越來越多地關(guān)注到了其副作用。雖然最初這部作品也引起了學者的諸多爭議，但今天看來農(nóng)藥的危害已經(jīng)引起了人們的足夠重視。

監(jiān)控農(nóng)藥使用過程中對農(nóng)田環(huán)境造成的直接污染[1]，關(guān)注農(nóng)藥使用過程中的殘留行為[2]對環(huán)境的危害，以及農(nóng)藥的殘留對處在生物鏈較高端的人和動物的影響，是國內(nèi)外研究的熱點。2005年1月17日，美國公布了兩項關(guān)于修改噻嗪酮殘留限量的法規(guī)。法規(guī)涉及的產(chǎn)品包括部分水果和蔬菜，分別對以下食品內(nèi)或表面的殺蟲劑噻嗪酮（Bruprofezin）制定如下限量：萵苣頭：5.0×10－6；萵苣葉：13.0×10－6；蔬菜、蔬菜用葫蘆9組：0.50×10－6；水果、柑橘10組：2.5×10－6；柑橘的干果肉7.5×10－6；柑橘油：80×10－6。歐盟對茶葉中噻嗪酮殘留的最大限量定為0.05mg·kg－1。盡管國內(nèi)對農(nóng)藥危害的研究起步較晚，但發(fā)展很快，我國對糧食和茶葉中噻嗪酮殘留量也做了相關(guān)規(guī)定。

國外關(guān)于噻嗪酮殘留的檢測有相關(guān)報道[3]，色譜法是比較先進的檢測手段[4]。農(nóng)藥對土壤[5]以及水體等自然環(huán)境帶來負面影響，直接影響到生物的生長和發(fā)育[6]，也可能形成短期不易察覺的長期影響。關(guān)注環(huán)境保護，農(nóng)藥在環(huán)境中的降解也成為研究熱點[7]。國內(nèi)關(guān)于茶葉[8]、蔬菜[9]、水果中噻嗪酮殘留的檢測[10]也有報道。

噻嗪酮（結(jié)構(gòu)如圖1）的熔點104.5～105.5℃，分子量305.44，沸點273℃（12torr）。在結(jié)構(gòu)式中有苯環(huán)的Ⅱ66，具有較強的紫外吸收，適用于二極管陣列檢測器（DAD）。需要特別指出，在噻嗪酮的結(jié)構(gòu)中盡管雜原子N、S、O均有孤對電子，但與苯環(huán)及相互之間都不在同一平面，無法形成更大共軛體系的多中心П鍵。但這并不影響采用高效液相色譜法（HPLC－DAD）檢測噻嗪酮的殘留。

圖1 噻嗪酮的分子結(jié)構(gòu)式

關(guān)于茶葉中噻嗪酮的殘留量的不確定度胡貝貞等[11]人做了簡單的分析，本文將以芹菜為例評定HPLC－DAD檢測蔬菜中的噻嗪酮的不確定，為噻嗪酮的不同檢測方法提供對比依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑和樣品

安捷倫HPLC 1100液相色譜儀（配備自動進樣器、二極管陣列檢測器、十八烷基鍵合固定相液相色譜柱）；AL104萬分之一電子天平，梅特勒托利多儀器（上海）有限公司；KQ－100E型超聲波清洗器，江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；冷凝旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海申生有限公司；WKY型微量移液器，上海榮泰生化工程有限公司；OCEAN過濾器（0.45μm的水系和有機系濾膜）；噻嗪酮標準溶液（1mg·mL－1），國家標準物質(zhì)研究中心GBW（E）060547；甲醇（色譜純），水（超純水），其他試劑為分析純。

1.2 色譜分析

流動相甲醇∶水（V／V）＝80∶20；流速1.0mL·min－1；柱溫30.0℃；DAD檢測波長230nm。在該色譜條件下分析樣品，保留時間為4.633min。

1.3 農(nóng)殘?zhí)崛》椒?/h3>

取一定量的芹菜樣品，準確稱量重量為m（g）。攪拌機打碎混勻后，依次加入15g氯化鈉、200mL丙酮、50mL二氯甲烷，勻漿1min后，置于超聲波清洗儀中震蕩20min，使混合均勻，之后經(jīng)過濾器過濾，將濾液置于分液漏斗中靜置分層，取上清液傾入500mL燒杯中，加入活性炭脫色120min，脫色后的液體中再加入30g無水硫酸鈉，不斷震蕩，靜止15min后，取裝有無水硫酸鈉的漏斗，以少許二氯甲烷洗滌無水硫酸鈉，合并濾液，用蒸餾裝置在30～40℃下將洗脫液濃縮近干，取出濃縮液在室溫下?lián)]干，用甲醇溶解，并準確定容到體積V mL，用0.45μm的針頭過濾器過濾，待分析。

2 建立數(shù)學模型

芹菜樣品中噻嗪酮的殘留量按式（1）計算：

式中：X為芹菜中含噻嗪酮的質(zhì)量濃度，μg·g－1；A為對應(yīng)色譜峰面積，mAU·s；F為色譜分析時的進樣體積，μL。V 為樣品提取后定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。

3 不確定度分析

芹菜中噻嗪酮的殘留檢測步驟如圖2所示，不確定度的來源包括農(nóng)殘?zhí)崛?、檢測、外標曲線和分析儀器4個方面。

圖2 芹菜中噻嗪酮殘留的分析過程

3.1 農(nóng)殘?zhí)崛∫氲牟淮_定度

3.1.1 稱取蔬菜樣品引入的不確定度

用電子天平稱取90g芹菜樣品，引起的不確定度為：

相對不確定度為：

3.1.2 樣品定容引入的不確定度

10mL容量瓶的定容最大允許誤差為±0.01mL，視為矩形分布，取分布因子樣品提取過程中由定容引入的不確定度為：

由樣品定容引入的相對確定度為：

由農(nóng)殘?zhí)崛∫氲南鄬Σ淮_定度分量為：

3.2 農(nóng)殘檢測引入的不確定度

對芹菜樣品進行噻嗪酮農(nóng)殘分析，取樣質(zhì)量m＝90g，定容體積V＝10mL，進樣體積F＝5μL，重復(fù)檢測的峰面積分別為41.1，40.7，45.7，43.5和42.1mAu·s，將檢測的峰面積（A）帶入式（1），芹菜中噻嗪酮的殘留量分別為：0.482，0.481，0.497，0.490和0.486μg·g－1。平均值

單次檢測的標準差為：

平均質(zhì)量濃度的不確定度為：

由農(nóng)殘檢測引入的相對不確定度分量為：

3.3 外標曲線引入的不確定度

用噻嗪酮標準溶液（1.0mg·mL－1）配置不同質(zhì)量濃度的標準溶液于10mL容量瓶中，按進樣量F＝5μL進行色譜分析。以峰面積對噻嗪酮標準品質(zhì)量濃度做外標曲線，標準曲線方程為Area＝35.138C－1 113.1，線性最小二乘法擬合的相關(guān)系數(shù)為0.999 65。

3.3.1 標準品引入的不確定度

標準品的說明書中顯示，1.0mg·mL－1噻嗪酮農(nóng)殘級標準溶液的相對不確定度為0.2%。

3.3.2 標準稀釋過程引入的不確定度

采用10mL容量瓶稀釋標準品，由標準品定容引入的相對不確定度為：

由外標曲線引入的相對不確定度分量為：

3.4 分析儀器引入的不確定度

3.4.1 進樣器引入的不確定度

高效液相色譜分析采用自動進樣，定量環(huán)的誤差為±0.10μL，按矩形分布處理，進樣引入的相對標準不確定度為：

進樣體積F＝5μL時的相對不確定度為：

3.4.2 二極管陣列檢測器引入的不確定度

檢測器的波長精度為±1nm，按矩形分布處理，由檢測器引入的不確定度為：

在230nm波長下檢測樣品的相對不確定度為：

由分析儀器引入的相對不確定度分量為：

3.5 合成相對不確定度計算

由上述各相對不確定度分量合成芹菜中噻嗪酮殘留量的不確定度為：

3.6 擴展不確定度

按置信概率P＝95%時，取k＝2。則芹菜樣品噻嗪酮殘留量測定的相對擴展不確定度為：

故其擴展不確定度為：

該芹菜樣品中的噻嗪酮殘留量表示為：

4 結(jié)語

評定了蔬菜中噻嗪酮農(nóng)藥殘留的高效液相色譜檢測方法的不確定度，相對擴展不確定度為2.70%，說明該方法結(jié)果可靠。該評定方法的建立，可以為其他蔬菜中農(nóng)殘檢測的高效液相色譜法不確定度分析提供參考。

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