胡瑞鴻 叢秋實(shí) 史玉梅

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

雞新城疫活疫苗（CS2株）穩(wěn)定性試驗(yàn)

胡瑞鴻 叢秋實(shí) 史玉梅

（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

雞新城疫是由新城疫病毒引起的禽類高度接觸性傳染病，目前主要采用疫苗的免疫接種以達(dá)到良好的預(yù)防作用。而在當(dāng)今疫苗大規(guī)模的現(xiàn)代化生產(chǎn)中，疫苗的穩(wěn)定性成為免疫預(yù)防的關(guān)鍵。本試驗(yàn)采用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA）測定疫苗的EID50，探索疫苗貯存的穩(wěn)定性，為疫苗質(zhì)量的提升提供有力的技術(shù)支持。

新城疫；穩(wěn)定性；EID50

新城疫（Newcastle Disease，ND），也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由病毒引起的雞和火雞急性高度接觸性傳染病，常呈敗血癥經(jīng)過，主要特征是呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血。本病1926年首次發(fā)現(xiàn)于印尼，同年發(fā)現(xiàn)于英國新城，根據(jù)發(fā)現(xiàn)地名而命名為新城疫。本病分布于世界各地我國于1935年已有本病流行的報(bào)告，但當(dāng)時被認(rèn)為是真性雞瘟，直到1947～1948年才被確證為新城疫，病原屬于1927年分離的強(qiáng)毒株，國內(nèi)攻毒使用的北京強(qiáng)毒株，也屬于此種類型。NDV的主要特征是不同病毒株致病力差異較大。當(dāng)前我國國內(nèi)NDV的毒力呈現(xiàn)不斷增強(qiáng)的趨勢，本病死亡率高，是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的重要疾病之一，造成很大經(jīng)濟(jì)損失，疫苗的質(zhì)量就顯得尤為重要。

疫苗的生產(chǎn)以及質(zhì)量檢驗(yàn)均按照獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（簡稱獸藥GMP）進(jìn)行，但GMP中針對產(chǎn)品留樣進(jìn)行了進(jìn)一步的說明：在適宜條件下保留的疫苗樣品，應(yīng)在不同時間段定期監(jiān)測其效力，看能否達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)。2010年版《中華人民共和國獸藥典》三部規(guī)定：雞新城疫活疫苗在-15℃保存，有效期為24個月。試驗(yàn)意在證明疫苗的效力在超過有效期半年內(nèi)都是穩(wěn)定的，因此疫苗在效期內(nèi)是安全、有效的。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)疫苗

抽取5批雞新城疫活疫苗（CS2株），由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司提供

名 稱批 次生產(chǎn)日期2012012012年1月 1日2012022012年1月1日2012032012年1月2日2012042012年1月2日2012052012年1月13日雞新城疫活疫苗（CS2株）

1.2 試驗(yàn)SPF雞胚

10日齡SPF雞胚 由山東濟(jì)南斯帕法斯家禽有限公司提供SPF種蛋，哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司孵化

1.3 主要試劑

（1）1%雞紅細(xì)胞懸液及制備

采取3只3月齡SPF雞的血液，與等量阿氏液混合，然后用PBS（1/15moLL-1；pH7.2）洗滌3次，每次以1500rpm離心5min，吸棄上清液，注意吸棄紅細(xì)胞表面的白細(xì)胞層，并盡量吸凈上清液，將沉積的紅細(xì)胞用PBS配制成1%雞紅細(xì)胞懸液。

（2）0.85%生理鹽水及制備

取0.85gNaCl加注射用水至100mL，121℃高壓滅菌35min，4℃儲存

1.4 主要設(shè)備

干熱滅菌箱、八道數(shù)字式可調(diào)微量移液器、超凈工作臺、微量血凝板、微量振蕩器、Tip頭、吸管（1mL、10mL）

2 試驗(yàn)方法

疫苗存放于-15℃保存0月、12月、24月、30月后，分別將疫苗作10倍系列稀釋，取10-5、10-6、10-7三個稀釋滴度，各尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚5枚，每胚0.1mL，接種后用臘封好針孔，置37℃孵育72h，測定紅細(xì)胞凝集價(jià)（HA），凝集價(jià)（HA）≥1：64者判為感染，計(jì)算雞胚感染百分率，按Reed和Muench法計(jì)算雞胚半數(shù)感染量（EID50）。

logEID50=高于50%的病毒稀釋的對數(shù)+距離比例×稀釋系數(shù)的對數(shù)

3 結(jié)果與分析

組 別保存不同月份結(jié)果（EID50）0月12月24月30月201201105.5105.5105.32105.32201202105.5105.5105.32105.32201203105.63105.63105.5105.32201204105.5105.5105.32105.32201205105.63105.63105.5105.32

通過上表可以看出雞新城疫活疫苗（CS2株）在30個月的穩(wěn)定性試驗(yàn)中疫苗的效價(jià)（EID50）雖然有所降低，但仍在國標(biāo)范圍內(nèi)，符合《中華人民共和國獸藥典》的要求，證明我們公司生產(chǎn)的雞新城疫活疫苗（CS2株）是穩(wěn)定、有效的。