李樹賓

摘 要：目的 對藥物制劑雜質(zhì)研究方法進行歸納和總結(jié)，對雜質(zhì)的分析方法和標(biāo)準(zhǔn)建立做相關(guān)探討 方法 通過查閱雜質(zhì)分析研究方面的文獻資料 結(jié)果 總結(jié)梳理了雜質(zhì)的研究分析過程 結(jié)論 色譜條件、波長等關(guān)鍵因素的確認應(yīng)合理。

關(guān)鍵詞：制劑 雜質(zhì) 色譜

中圖分類號：R283 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2014）01（c）-0253-01

藥物雜質(zhì)是指在藥品生產(chǎn)、運輸、儲存過程中產(chǎn)生的或引入的影響藥物純度的物質(zhì)，主要包括有機雜質(zhì)、無機雜質(zhì)、殘留溶劑等；有機雜質(zhì)主要是通過藥物本身降解、締合或藥物之間的反應(yīng)產(chǎn)生的；無機雜質(zhì)主要是原料藥制備過程中加入的一些如催化劑、無機鹽、配位體等；殘留溶劑主要是反應(yīng)試劑的殘留。藥物雜質(zhì)直接關(guān)系到臨床用藥的安全性，因為某些雜質(zhì)過量可能會使人體產(chǎn)生過敏反應(yīng)[1]，甚至危及病人生命，因此建立一個專屬性強、靈敏度高的的雜質(zhì)分析方法并得到科學(xué)的方法學(xué)驗證是在藥品研發(fā)評價及生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制必不可少的有效手段。

1 雜質(zhì)分析

雜質(zhì)分析主要是通過高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）、薄層色譜法（TLC）等分析方法進行檢測，目前較常用高效液相色譜法（HPLC），且多使用梯度洗脫。為了準(zhǔn)確的檢出藥物中存在的雜質(zhì)，在初步確定色譜條件后，首先需利用破壞性試驗確認各雜質(zhì)的分離度、峰純度以及波長的選擇是否合理，在確定上述條件后，可根據(jù)ICH關(guān)于方法學(xué)的要求進行方法學(xué)驗證，并完成相關(guān)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)確認工作。

破壞性試驗：破壞性試驗是指在酸、堿、氧化、高溫、高濕、光照等相對劇烈的條件下，對藥品進行破壞，從而產(chǎn)生較多的降解產(chǎn)物，模擬貨架期內(nèi)藥品降解產(chǎn)生雜質(zhì)，以驗證在當(dāng)前色譜條件下，各降解雜質(zhì)峰與主峰，以及各降解雜質(zhì)峰之間的分離度是否符合要求。

破壞條件：如酸破壞（0.05M鹽酸8 h）；堿破壞（0.02M氫氧化鈉溶液8 h）；氧化破壞（0.15%雙氧水1.5小時）；高溫破壞（100 ℃5個小時）；光照破壞（4500LX15 d）等，具體破壞條件的制定因藥物化學(xué)性質(zhì)不同而不同，具體指標(biāo)為主峰降解10%～15%，可參照峰高。

峰純度測試：在經(jīng)過破壞性試驗后，降解產(chǎn)生較多雜質(zhì)，采用高效液相色譜法進行分離時，不僅需要考慮各雜質(zhì)峰之間，雜質(zhì)峰與主峰之間的分離度，還應(yīng)考察各峰的峰純度[2]，因為分離度不能夠說明主峰或者各雜質(zhì)峰中沒有包含其他峰，峰純度測試主要采用DAD檢測器，且峰純度一般不應(yīng)小于950。

波長的確定：波長的選擇時可采用DAD檢測器，樣品溶液在經(jīng)過合理的破壞后，在同一色譜條件下，使用多波長掃描各破壞條件下樣品溶液，可以有效檢出已知雜質(zhì)，并且檢出雜質(zhì)數(shù)量較多者為最終確定波長。

方法學(xué)驗證及已知雜質(zhì)的分析：在方法確認過程中，需要進行定量限、檢測限、專屬性、線性（0.05%～2倍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)）、范圍、精密度等項目測試[3]。

定量限：指在既定的試驗條件下，樣品中被測物可以被定量測定的最低濃度，并且結(jié)果應(yīng)經(jīng)過精密度和準(zhǔn)確度的確認，指標(biāo)為信噪比S/N=10∶1；

檢測限：指在既定試驗條件下，樣品中被測物能夠被檢測到的最低濃度，但不必準(zhǔn)確定量，因此確認檢測限只是證實被分析物的含量高于或低于某個水平，指標(biāo)為信噪比S/N=3∶1；

線性：選擇0.5%～2倍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)選擇五個濃度，用峰面積建立回歸曲線，計算相關(guān)系數(shù)，結(jié)果應(yīng)符合要求；

精密度：包括重復(fù)性—同一濃度雜質(zhì)對照品連續(xù)進樣6針，計算峰面積RSD值；中間精密度—通過變換時間、操作人員、檢驗儀器等因素考察檢驗結(jié)果的差異；重現(xiàn)性—同一樣品不同實驗室之間的檢驗數(shù)據(jù)的比較工作；

準(zhǔn)確度：至少應(yīng)涵蓋所屬范圍內(nèi)濃度，最少用3個濃度，并測定9次，計算各雜質(zhì)的回收率；

專屬性：通過破壞性試驗實現(xiàn)。

耐用性：在藥典要求范圍內(nèi)，通過調(diào)整流動相比例、色譜柱品牌、柱溫、進樣體積等因素考察上述因素的微調(diào)對檢驗結(jié)果的影響程度，進一步評價檢驗方法的適用性；

穩(wěn)定性：在一定溫度下，將樣品溶解一段時間后，考察各雜質(zhì)含量的變化情況，為樣品檢驗時提供依據(jù)。

當(dāng)雜質(zhì)與主成分的相對相應(yīng)因子在0.9～1.1之間時[4]，可采用主成分的自身對照法，當(dāng)超出此范圍時應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)品對照法，雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品較難采購或因成本較高時，可采用加校正因子的自身對照法。

結(jié)構(gòu)確證：對正常樣品進行檢測，計算各雜質(zhì)的含量，并根據(jù)藥品的最大日劑量，確定雜質(zhì)的鑒別限度，當(dāng)檢測值大于雜質(zhì)的鑒別限度時，且為未知雜質(zhì)時，需要對該雜質(zhì)進行結(jié)構(gòu)確認，通常采用LC-MS進行結(jié)構(gòu)確認[5]。一般當(dāng)最大日劑量不超過2g時，鑒定閾值為0.2%，最大日劑量超過2g時，鑒定閾值為0.1%。

2 結(jié)語

色譜條件應(yīng)能保證分離各雜質(zhì)及各雜質(zhì)與主峰的分離度，以及各峰的峰純度；

波長的選擇應(yīng)該合理，色譜分離條件的基礎(chǔ)上，可以全部檢出降解雜質(zhì)，從而達到降解產(chǎn)物回收率的要求：約90%，主要方法是多波長檢測；

對已知雜質(zhì)的分析應(yīng)該合理，需要定量時應(yīng)驗證方法的線性范圍等，雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品采購較困難時，可以計算響應(yīng)因子，利用自身對照法計算雜質(zhì)含量；

超出鑒定閾值的雜質(zhì)應(yīng)做結(jié)構(gòu)確證。

參考文獻

[1] 霍秀敏.抗生素高分子雜質(zhì)與過敏反應(yīng)[J].國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，2005（9）.

[2] 成海平.雜質(zhì)檢查分析方法建立過程中破壞性試驗的意義和存在的問題分析[J].國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，2007（11）.

[3] 張哲峰，成海平，寧黎麗，等.CTD申報資料中雜質(zhì)研究的幾個問題[J].國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，2012（12）.

[4] 王巍，高鵬來，何紅梅，等.中華人民共和國藥典[M].中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[5] 于紅.雜質(zhì)譜的分析[J].國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，2007（6）.