曹 翠,宋瑞清

(1.渭南師范學(xué)院數(shù)學(xué)與信息科學(xué)學(xué)院,陜西渭南 714099;2.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院,哈爾濱 150040)

2株藍(lán)變菌的生物學(xué)特性測(cè)定和抑菌藥劑的篩選

曹 翠1,宋瑞清2

(1.渭南師范學(xué)院數(shù)學(xué)與信息科學(xué)學(xué)院,陜西渭南 714099;2.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院,哈爾濱 150040)

通過(guò)對(duì)2個(gè)云杉八齒小蠹伴生藍(lán)變真菌的試驗(yàn)研究,結(jié)果表明：2個(gè)藍(lán)變菌菌株適宜生長(zhǎng)溫度均為25℃;對(duì)酸堿度的適應(yīng)能力強(qiáng),在pH值為4.0～9.0范圍內(nèi)均能生長(zhǎng),在酸性環(huán)境下發(fā)育較好;以葡萄糖和果糖為最佳碳源,最佳氮源為甘氨酸,此外菌株Ophiostoma penicillatum 1也可很好利用酵母粉.甲基托布津、撲海因?qū)?個(gè)試驗(yàn)菌株的生長(zhǎng)有極強(qiáng)的抑制效果,百菌清和中生菌素僅對(duì)Ophiostoma penicillatum 2有很強(qiáng)的抑制效果,可殺得和硫酸鏈霉素對(duì)所有菌株的抑制作用均不明顯.

云杉八齒小蠹;藍(lán)變菌;生物學(xué)特性;抑菌藥劑篩選

0 引言

云杉八齒小蠹(Ips typographus Linnaeus)是危害天然云杉林的次期性害蟲(chóng),主要危害樹(shù)干基部至樹(shù)梢部,在蛀干部位嚴(yán)重蛀食樹(shù)干韌皮組織,破壞養(yǎng)分正常輸送[1].在寄主、環(huán)境、氣候等適宜的條件下,云杉八齒小蠹可造成成片森林毀滅,導(dǎo)致嚴(yán)重?fù)p失,其一直是我國(guó)北方針葉樹(shù)危險(xiǎn)性害蟲(chóng)之一[2].

云杉八齒小蠹與許多真菌存在著密切的內(nèi)在聯(lián)系.科學(xué)家已從被云杉八齒小蠹致死的云杉邊材中分離出幾種能引起藍(lán)色污斑的真菌.其中包括長(zhǎng)喙殼屬(Ceratocystic)的若干種類(lèi)[3].有研究報(bào)道云杉八齒小蠹攜帶Ceratocystis polonica,Ophiostoma bicolor和Ophiostoma penicillatum[4].故本研究對(duì)2個(gè)云杉八齒小蠹伴生藍(lán)變菌株進(jìn)行試驗(yàn),測(cè)定生物學(xué)特性并了解藍(lán)變菌株的生物、生態(tài)及營(yíng)養(yǎng)習(xí)性,篩選對(duì)伴生真菌防治效果明顯的抑菌藥劑,為以后深入研究致病機(jī)理提供可靠依據(jù),為防治木材藍(lán)變及解釋云杉八齒小蠹與真菌之間的關(guān)系提供理論基礎(chǔ).

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

藍(lán)變菌株：試驗(yàn)菌株分離自黑龍江豐林國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)內(nèi)云杉八齒小蠹坑道內(nèi),經(jīng)分離鑒定確認(rèn)為Ophiostoma penicillatum 1,Ophiostoma penicillatum 2[5].

培養(yǎng)基：改良PDA培養(yǎng)基.

化學(xué)抑菌藥劑：共10種(見(jiàn)表1).

表1 試驗(yàn)用抑菌藥劑及使用濃度

腐霉利(50%可濕性粉劑)10.1氫氧化銅(可殺得)(53.8%干懸浮劑)1.150.115硫酸鏈霉素(72%可溶性粉劑)10.1烯酰嗎啉(50%可濕性粉劑)20.2霜霉威(72.2%水劑)20.2撲海因(50%可濕性粉劑)1.3510.1350.1噻菌銅(20%懸浮劑)3.350.335

1.2 試驗(yàn)方法

將供試菌株接種在改良PDA培養(yǎng)基中,置25℃恒溫培養(yǎng)6 d.

(1)生物學(xué)特性測(cè)定

生物學(xué)特性[6-9]研究主要包括：菌絲生長(zhǎng)的最適溫度、pH、碳源和氮源.試驗(yàn)采用菌餅法,菌株菌絲體生長(zhǎng)測(cè)定采用生長(zhǎng)速率法.[10]

(2)抑菌藥劑的篩選

10種抑菌藥劑對(duì)2個(gè)藍(lán)變菌株的抑菌活性大小的測(cè)定采用室內(nèi)生長(zhǎng)速率法.[11]

試驗(yàn)方法：用直徑10 mm的打孔器分別切取在PDA綜合培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的伴生真菌菌落,分別接入不同處理的PDA平板培養(yǎng)基中央(PDA培養(yǎng)基與2 mL配制好的藥液配制的培養(yǎng)基),每處理設(shè)3次重復(fù),以不加任何抑菌藥劑的PDA平板培養(yǎng)基為對(duì)照.置于生化培養(yǎng)箱中25℃下暗培養(yǎng),每12 h用十字交叉法測(cè)量菌絲生長(zhǎng)直徑.描述菌株在不同殺菌劑中菌落的性狀,分析各種殺菌劑對(duì)伴生真菌的抑制效果.

1.3 殺菌劑抑菌效果計(jì)算

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

2個(gè)測(cè)試菌株在試驗(yàn)溫度范圍內(nèi)均可生長(zhǎng)(圖1).2個(gè)菌株菌絲生長(zhǎng)最適宜溫度均為25℃,25℃下培養(yǎng)6 d供試菌株O.penicillatum 1和O.penicillatum 2菌落生長(zhǎng)直徑分別達(dá)到8.5 cm和8.3 cm.15℃～30℃范圍內(nèi)菌株O.penicillatum 1生長(zhǎng)較快.

圖1 菌株菌絲在不同溫度下的生長(zhǎng)情況

2.2 pH對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

2個(gè)菌株在測(cè)試pH值范圍內(nèi)均能生長(zhǎng).但是,在不同的pH培養(yǎng)基中生長(zhǎng)差異較大(圖2).2個(gè)菌株均在pH值為5.5時(shí)生長(zhǎng)最好;2個(gè)菌株在pH值為8.0和9.0的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)均弱,菌絲匍匐,菌落稀疏. 2個(gè)菌株在測(cè)試pH值范圍內(nèi)影響差異不大.

圖2 菌株菌絲在不同pH培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況

2.3 碳源對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

2個(gè)菌株均在以葡萄糖和果糖為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好(圖3).生長(zhǎng)6 d菌株O.penicillatum 1的菌落直徑分別達(dá)到8.45 cm和8.18 cm,菌株O.penicillatum2的菌落直徑分別達(dá)到8.35 cm和8.5 cm;菌株O.penicillatum 1在以山梨醇為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好,菌株O.penicillatum 2在以乳糖為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好,生長(zhǎng)6 d菌落直徑為8.18 cm;生長(zhǎng)6 d以甘露糖、木糖和甘露糖為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)次好.無(wú)碳源培養(yǎng)基對(duì)2個(gè)菌株的生長(zhǎng)影響最大,菌絲稀疏.菌株O.penicillatum 2在無(wú)碳源培養(yǎng)基上菌落直徑雖大于在木糖的,但是菌絲不是稠密狀.綜上所述,這10種碳源2個(gè)菌株均可以利用.

圖3 菌株菌絲在不同碳源培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況

2.4 氮源對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

菌株O.penicillatum 1在以甘氨酸和酵母粉為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好(圖4).菌株O.penicillatum 2僅在以甘氨酸為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好;生長(zhǎng)6 d菌落直徑均達(dá)到8.5 cm.菌株O.penicillatum 1在以天門(mén)冬、蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好,菌株O.penicillatum 2在以硝酸鉀、天門(mén)冬、谷氨酰胺和酵母粉為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好,生長(zhǎng)6 d菌落直徑達(dá)到8.0 cm以上;2個(gè)菌株均在以酒石安酸為氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最差,生長(zhǎng)6 d菌落直徑分別為5.4 cm和6.3 cm.氮源對(duì)2個(gè)試驗(yàn)菌株生長(zhǎng)的影響差異較小.綜上所述,這10種氮源2個(gè)菌株均可以利用.

圖4 菌株菌絲在不同氮源培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況

2.5 不同抑菌藥劑對(duì)藍(lán)變菌生長(zhǎng)的影響

甲基托布津、撲海因?qū)?個(gè)菌株生長(zhǎng)均有極強(qiáng)的抑制效果,百菌清、中生菌素和腐霉利僅對(duì)O.penicillatum 2有很強(qiáng)的抑制效果(表2).

甲基托布津(0.125 g/L)和撲海因(0.135 g/L)對(duì)2個(gè)菌株的生長(zhǎng)抑制率均達(dá)到100%.百菌清(0.125 g/L)對(duì)O.penicillatum 2的抑制率也很強(qiáng),抑制率為100%.濃度為0.335 g/L的中生菌素和腐霉利(0.1 g/L)對(duì)O.penicillatum 2的抑制效果較強(qiáng),抑制率均達(dá)97%以上.腐霉利和撲海因(0.1 g/L)對(duì)O.penicillatum 1抑制效果較好,抑制率超過(guò)85%;百菌清(0.9 g/L)和霜霉威對(duì)O.penicillatum 2的抑制效果次好,抑菌率均為85%以上;烯酰嗎啉和噻菌銅對(duì)藍(lán)變菌株的抑制率介于60%～82%之間;可殺得和硫酸鏈霉素對(duì)所有菌株的抑制效果都很低.

表2 抑菌藥劑對(duì)藍(lán)變菌株生長(zhǎng)的抑制率(%)

3 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)2個(gè)菌株適宜生長(zhǎng)溫度為25℃;生長(zhǎng)最適pH值為5.5;生長(zhǎng)最適碳源為葡萄糖和果糖,菌株O.penicillatum 1最適氮源為甘氨酸和酵母粉,菌株O.penicillatum 2最適氮源僅有甘氨酸.

甲基托布津和撲海因?qū)?個(gè)試驗(yàn)菌株的生長(zhǎng)有極強(qiáng)的抑制效果,百菌清和中生菌素僅對(duì)O.penicillatum 2有很強(qiáng)的抑制效果,腐霉利對(duì)2個(gè)試驗(yàn)菌株有顯著的抑制效果,可殺得和硫酸鏈霉素對(duì)所有菌株的抑制作用均不明顯.在防治中應(yīng)根據(jù)這些特點(diǎn)適當(dāng)?shù)剡x擇抑菌藥劑.

綜上所述,同種真菌的不同菌株在對(duì)藥劑的敏感度和抗藥性上存在的差異較小,但是酵母粉對(duì)菌株O.penicillatum 1的生長(zhǎng)最適合,菌株O.penicillatum 2也適應(yīng)于酵母粉培養(yǎng)基,百菌清和中生菌素對(duì)O.penicillatum 2的抑制作用強(qiáng)于O.penicillatum 1,這些差異可能是由于培養(yǎng)基的不同所影響,有待于進(jìn)一步研究;在病害發(fā)生的不同時(shí)期和不同程度的危害,應(yīng)根據(jù)具體情況選擇使用試驗(yàn)所用藥劑.

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【責(zé)任編輯 曹 靜】

Biological Characteristics of Two Blue-stain Fungi and Screening of Fungicides

CAO Cui1,SONG Rui-qing2
(1.School of Mathematics and Information Science,Weinan Normal University,Weinan 714099,China; 2.School of Forestry,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China)

Two blue-stain fungi associated with Ips typographus were tested and the results show that to two strains of blue-stain fungi,the optimum temperature were all 25℃,and their adaptability to pH were strong.They could grow under pH4.0～9.0,and they grew better in acidic environment.Optimum growth carbon source was glucose and fructopyranose.Optimum growth nitrogen sources were glycine.In addition,Ophiostoma penicillatum 1 could make good use of yeast extract.Mildothane and Iprodione were the most effective fungicides,Chlorothalonil and Zhongshengmycin only has significant inhibitory effect to Ophiostoma penicillatum 2 .

Ips typographus;blue-stain fungus;biological characteristics; fungicides selection

S433

A

1009-5128(2014)15-0030-05

2014-02-18

曹翠(1985—),女,山西朔州人,渭南師范學(xué)院數(shù)學(xué)與信息科學(xué)學(xué)院教師,農(nóng)學(xué)碩士,主要從事園林綠化植物配置、植物病蟲(chóng)害及防治研究;宋瑞清(1964—),女,黑龍江哈爾濱人,東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院教授,博士生導(dǎo)師,主要從事菌物開(kāi)發(fā)及利用、林木病理學(xué)及植物病害防治研究.